预测孕妇分娩时间的方法

预测孕妇分娩时间的方法
【专利说明】
[0001] 本申请要求2013年1月2日提交的61/748, 310号和2013年11月26日提交的 61/909, 238号美国临时专利申请的优先权，通过引用将二者全部并入本文。
技术领域
[0002] 本申请内容涉及预测妊娠患者中分娩时间（time-to-delivery, TTD)和/或确定 患者早产（preterm labor)和/或绒毛膜自发破裂的风险的方法。
【背景技术】
[0003] 在面临早娩风险的妊娠中，分娩时间（TTD)的预测在临床上是很重要的，特别是 对于皮质激素的给药（在给药的24小时至7天内效果最佳）。此外，早生风险高的患者应 在三级护理病房中分娩。特别是考虑到类固醇的重复使用尚有争议，产科医师就担负着在 面临早娩风险的患者中预测TTD的任务。
[0004] 美国产科和妇科医师学会（AC0G)在其最近的早产处置规范公报中指出，虽然已 提出并评估了很多鉴别面临早生风险的妇女的方法，但只有超声波检查（用以确定宫颈 长度）和胚胎纤粘连蛋白（fibronectin)试验显示出有效。超声波检查或胚胎纤粘连蛋 白试验或二者的组合在鉴别早娩风险高的妇女时可能有用，但其临床用处可能主要取决 限于其鉴别最不倾向分娩的妇女的能力（即，试验的阴性预测值（negative predictive value, NPV))，而不是鉴别最倾向分娩的妇女（即，阳性预测值（positive predictive value，PPV)高的试验）的能力。因而，迫切需要具有高PPV的试验以便准确地预测临近的 分娩，并允许有利健康的干预。

【发明内容】

[0005] 如上文所讨论的，技术领域中需要的是用于准确诊断有临近分娩（例如14天内、 7天内或48小时内）风险的患者的改进的装置和方法，特别是出现了提示早产（preterm labor, PTL)的迹象、征兆或不适，但是没有胎膜破裂（rupture of fetal membranes, ROM) 临床证据的患者的改进的装置和方法。对于医护人员而言，此类改进的装置和方法对决定 如何管理其患者有重要价值：例如，决定是否给予安胎药来延长妊娠、给予皮质激素来改善 胎儿的呼吸发育、给予抗生素降低感染风险（产时和产后）、建议卧床休息和/或增加观察 和胎儿监测等。
[0006] 因而，在某些方面，本
【发明内容】
提供预测分娩时间（TTD)的方法，其包括（例如，包 含、本质上由下列构成、由下列构成）：(a)使取自孕妇的阴道液样品与至少两种PAMG-1特 异性单克隆抗体接触，其中所述抗体的至少一种与在样品中存在时的PAMG-1结合，从而形 成PAMG-1/单克隆抗体复合物；(b)只有当样品中PAMG-1的浓度超过预定的检测阈值时， 检测样品中PAMG-1/单克隆抗体复合物的存在；和（c)如果检测到PAMG-1，则预测该孕妇 将在预定的时间框架内分娩。在另一方面，预测TTD的方法包括（a)使取自孕妇的阴道液 样品与至少两种PAMG-1特异性单克隆抗体接触，其中所述抗体的至少一种与在样品中存 在时的PAMG-1结合，从而形成PAMG-1/单克隆抗体复合物；(b)只有当样品中PAMG-1的浓 度超过预定的检测阈值时，检测样品中PAMG-1/单克隆抗体复合物的存在；和（c)如果检测 到PAMG-1，则预测该孕妇将在预定的时间框架内分娩；或（d)如果没有检测到PAMG-1，则预 测该孕妇将不会在预定的时间框架内分娩。在某些实施方案中，步骤（d)包含在从孕妇获 得阴道液样品时预测该孕妇将不会在预定的时间框架内分娩。预测分娩时间的预定的时间 框架可以是例如约48小时以内；约7小时以内；和/或（iii)约14天以内。在某些方面， 预测TTD的方法具有下列阳性预测值（PPVs)的一个或多个：（i)对于预测48小时以内的 TTD，至少约39% ; (ii)对于预测7天以内的TTD，至少约64% ;和（iii)对于预测约14天 以内的TTD，至少约77%。在某些方面，预测TTD的方法具有下列PPVs的一个或多个：（i) 对于预测约48小时以内的TTD，约45. 5% ; (ii)对于预测约7天以内的TTD，约81. 8% ;和 (iii)对于预测14天以内的TTD，约90. 9%。在某些方面，本方法具有大于约90%的阴性 预测值（NPV)。在某些方面，预测TTD的方法具有下列PPVs的一个或多个：（i)对于预测 48小时以内的TTD，约45. 5% ;和/或（ii)对于预测7天以内的TTD，约78. 3% (例如约 78% );和/或（iii)对于预测14天以内的TTD，约87 %。在某些方面，本方法具有87 %以 上的阴性预测值（NPV)。还在其它方面，本方法具有下列NPVs的一个或多个：（i)对于预 测48小时以内的TTD，约100%;和/或（ii)对于预测7天以内的TTD，约97. 4% (例如约 87%);和/或（iii)对于预测14天以内的TTD，约93. 6% (例如约84%)。
[0007] 在其它方面，本
【发明内容】
提供确定早娩风险的方法，其中所述方法包括（例如，包 含、本质上由下列构成、由下列构成）：(a)使取自孕妇的阴道液样品与至少两种PAMG-1特 异性单克隆抗体接触，其中所述抗体的至少一种与在样品中存在时的PAMG-1结合，从而形 成PAMG-1/单克隆抗体复合物；(b)只有当样品中PAMG-1的浓度超过预定的检测阈值时， 检测样品中PAMG-1/单克隆抗体复合物的存在；和（c)如果检测到PAMG-1，则预测该孕 妇面临早娩风险。在其它方面，本
【发明内容】
提供确定早娩风险的方法，其中所述方法包括 (例如，包含、本质上由下列构成、由下列构成）：（a)使取自孕妇的阴道液样品与至少两种 PAMG-1特异性单克隆抗体接触，其中所述抗体的至少一种与在样品中存在时的PAMG-1结 合，从而形成PAMG-1/单克隆抗体复合物；(b)只有当样品中PAMG-1的浓度超过预定的检 测阈值时，检测样品中PAMG-1/单克隆抗体复合物的存在；和（c)如果检测到PAMG-1，则预 测该孕妇面临早娩风险；或（d)如果没有检测到PAMG-1，则预测该孕妇没有面临早娩风险。 在某些实施方案中，步骤（d)包含在从孕妇获得阴道液样品时预测该孕妇没有面临早娩风 险。
[0008] 还在其它方面，本
【发明内容】
提供确定孕妇的绒毛膜自发破裂风险的方法，其中所 述方法包括（例如，包含、本质上由下列构成、由下列构成）：（a)使取自孕妇的阴道液样品 与至少两种PAMG-1特异性单克隆抗体接触，其中所述抗体的至少一种与在样品中存在时 的PAMG-1结合，从而形成PAMG-1/单克隆抗体复合物；(b)只有当样品中PAMG-1的浓度 超过预定的检测阈值时，检测样品中PAMG-1/单克隆抗体复合物的存在；和（c)如果检测 到PAMG-1，则确定该孕妇面临绒毛膜自发破裂的风险。在另一方面，本
【发明内容】
提供确定 孕妇的绒毛膜自发破裂风险的方法，其中所述方法包括：(a)使取自孕妇的阴道液样品与 至少两种PAMG-1特异性单克隆抗体接触，其中所述抗体的至少一种与在样品中存在时的 PAMG-1结合，从而形成PAMG-1/单克隆抗体复合物；(b)只有当样品中PAMG-1的浓度超 过预定的检测阈值时，检测样品中PAMG-1/单克隆抗体复合物的存在；和（c)如果检测到 PAMG-1，则确定该孕妇面临绒毛膜自发破裂的风险；或（d)如果没有检测到PAMG-1，则确定 该孕妇没有面临绒毛膜自发破裂的风险。在某些实施方案中，步骤（d)包含在从孕妇获得 阴道液样品时预测该孕妇没有面临绒毛膜自发破裂的风险。
[0009] 在某些方面，本方法用于确定自发的预产期前过早绒毛膜破裂的风险。
[0010] 另一方面，本文提供的是排除（预测为高度不可能）孕妇在预定的时间框架内自 发预产期前过早（preterm premature) ROM或早娩的方法。该方法包括：（a)使取自疑似有 早娩风险的孕妇的阴道液样品与至少两种PAMG-1特异性单克隆抗体接触，其中所述抗体 的至少一种与在样品中存在时的PAMG-1结合，从而形成PAMG-1/单克隆抗体复合物；(b) 只有当样品中PAMG-1的浓度超过预定的检测阈值时，检测样品中任何PAMG-1/单克隆抗体 复合物的存在；和（c)如果没有检测到PAMG-1，则排除（预测为高度不可能）在预定的时间 框架内的自发预产期前过早ROM或早娩。预定的时间框架可为例如约48小时以内；约7天 以内；和/或（iii)约14天以内。在某些方面，排除（预测为高度不可能）自发的预产期 前过早ROM或早娩的方法具有大于约90%的阴性预测值（NPV)。在某些方面，排除（预测为 高度不可能）自发的预产期前过早ROM或早娩的方法具有87%以上的阴性预测值（NPV)。 还在其它方面，该方法具有下列NPVs的一个或多个：（i)对于排除（预测为高度不可能）48 小时以内的自发预产期前过早ROM或早娩，约100%;和/或（ii)对于排除（预测为高度不 可能）7天以内的自发预产期前过早ROM或早娩，约97. 4% (例如约87%);和/或（iii) 对于排除（预测为高度不可能）14天以内的自发预产期前过早ROM或早娩，约93. 6 % (例 如约84% )。
[0011] 在以上公开的任何方面，该方法可进一步包括确定孕妇的胎膜是完整的。该方法 也可包括只有当孕妇出现下列一项以上、两项以上、三项以上或所有四项时，才选择该孕妇 进行该方法的分析：（i)提示早产的迹象、征兆或不适；（ii) 20周与36周6天之间的妊龄； (iii) 25mm以上的宫颈长度；和（iv) 3cm以下的宫颈扩张。该方法也可包括用采集器具（例 如植绒拭子（flocked swab))从孕妇采集阴道液样品。在某些方面，植绒阴道拭子使存在于 阴道液样品中的任何PAMG-1以1:4稀释。在某些方面，植绒拭子使存在于阴道液样品中的 任何PAMG-1在1:1至1:10的范围内稀释。该方法也可包括下列步骤的任何一个或多个：使 采集器具与溶剂接触而释放采集的阴道液样品；在约30秒的时间框架上采集阴道液样品； 采集阴道液样品之后，使采集器具与溶剂接触约30秒；使阴道液样品与至少两种PAMG-1特 异性单克隆抗体接触5分钟。
[0012] 在任何上述方面中，预定的PAMG-1检测阈值水平可为4ng/ml。
[0013] 在任何上述方面中，在侧流装置（lateral flow device)中可使用至少两种 PAMG-1特异性单克隆抗体。所述侧流装置可包括衬垫区和试验区。试验装置的衬垫区可 包括所述至少两种PAMG-1特异性单克隆抗体的一种，且试验区可包括所述两种的另一种。 在某些方面，衬垫区中的PAMG-1特异性单克隆抗体是可移动的且试验区的PAMG-1特异性 单克隆抗体是固定化的。在某些方面，试验装置的试验区进一步包括对照区。在某些方面， 所述至少两种PAMG-1-特异性单克隆抗体为各自选自由下列抗体组成的组的抗体：杂交瘤 N271产生的M271，由俄罗斯国家工业微生物保藏中心（VKPM)保藏机构保藏并分配登录号 VKPM-93 ;杂交瘤N52产生的M52,由VKPM保藏并分配登录号VKPM-92 ;和杂交瘤N42产生的 M42,由VKPM保藏并分配登录号VKPM-94。
[0014] 在任何上述方面中，衬垫区中可移动的抗体可以是杂交瘤N271产生的M271，由俄 罗斯国家工业微生物保藏中心（VKPM)保藏机构保藏并分配登录号VKPM-93,且试验区中固 定化的抗体可以是杂交瘤N52产生的M52,由VKPM保藏并分配登录号VKPM-92。
[0015] 在上述使用装置的某些方法中，装置可以是图1和2中说明的装置。
[0016] 在某些方面，本
【发明内容】
提供试剂盒，其包括（例如，包含、本质上由下列构成、由 下列构成）：(a)当阴道液样品中存在超出阈值水平的PAMG-1时检测PAMG-1存在的装置； 和阴道拭子。在某些方面，阴道拭子可以是植绒的。在某些方面，试剂盒进一步包括药瓶和/ 或使用说明书。在某些方面，预定的阈值为4ng/ml。还在其它方面，装置包括对PAMG-1特异 的第一和第二单克隆抗体。第一和第二PAMG-1-特异性单克隆抗体可具有不同的对PAMG-1 的结合特异性和亲和力。在某些方面，第一和第二PAMG-1-特异性单克隆抗体各自可选自 由下列抗体组成的组：杂交瘤N271产生的M271，由俄罗斯国家工业微生物保藏中心（VKPM) 保藏机构保藏并分配登录号VKPM-93 ;杂交瘤N52产生的M52,由VKPM保藏并分配登录号 VKPM-92 ;和杂交瘤N42产生的M42,由VKPM保藏并分配登录号VKPM-94。还在其它方面，试 验装置为侧流装置。试验装置可包括衬垫区和试验区。试验装置的衬垫区可包括所述第一 和第二PAMG-1-特异性单克隆抗体之一，且试验区可包括另一所述第一和第二PAMG-1-特 异性单克隆抗体。在某些方面，衬垫和试验区之一或二者可含有附加的PAMG-1-特异性单 克隆抗体和/或所述前两种PAMG-1-特异性单克隆抗体的混合物。在某些方面，衬垫区中 的PAMG-1-特异性单克隆抗体可以是可移动的，且试验区中的PAMG-1-特异性单克隆抗体 可以是固定化的。还在另一方面，衬垫区中可移动的抗体为杂交瘤N271产生的M271，由俄 罗斯国家工业微生物保藏中心（VKPM)保藏机构保藏并分配登录号VKPM-93 ;杂交瘤N52产 生的M52,由VKPM保藏并分配登录号VKPM-92。在某些方面，试验装置的试验区进一步包括 对照区。在某些方面，试剂盒可用于预测TTD的方法。另一方面，试剂盒可用于预测早娩风 险的方法。还在另一方面，试剂盒可用于预测孕妇绒毛膜自发破裂（ROM)(例如预产期前过 早ROM)的风险的方法。在某些方面，试剂盒中的装置是图1和2中说明的装置。
[0017]宙义：
[0018] 如在本文中使用，"分娩时间（TTD) "是从预定的起始时间点（例如患者出现早产 的潜在迹象的时间）开始，直至妊娠的患者分娩其胎儿的时间总长度（例如若干小时、天、 周）。TTD可规定为"在预定的时间框架内"，例如从作出预测的时间起约14天以内（或约 7天以内，或约48小时以内）。如在本文中使用，"预测TTD"意指确定在预定的时间框架内 (例如2、7或14天以内）分娩的可能性。在某些方面，预测TTD包括确定在预定的时间点 以内自发的预产期前过早ROM或早娩为高度可能。在某些方面，预测TTD包括排除预定的 时间点以内的自发预产期前过早ROM或早娩（即确定在预定的时间框架内自发的预产期前 过早ROM或早娩为高度不可能）。
[0019] 如在本文中使用，"早娩"定义为在37周妊龄之前分娩。
[0020] 如在本文中使用，确定为"面临早娩风险"的孕妇是出现了提示早产的迹象、征兆 或不适的孕妇。
[0021] 如在本文中使用，对于本文公开的试验，"预定的检测阈值"是以下水平（例如浓度 或量）：多肽或其它物质必须以该水平或高于该水平存在于样品（例如未稀释的阴道或宫 颈-阴道液样品）中以便被检测到（例如在本文公开的试验（例如TTD试验）中给出阳性 结果）。
[0022] 如在本文中使用，术语"抗体"表示对如本文所述的抗原（例如PAMG-1)有结合亲 和力、不依赖于获得多肽所使用的方法的任何多肽。例如，多肽可以是单克隆抗体或其片 段、多克隆抗体或其抗原结合片段，或如本文所述的对靶抗原有结合特异性的任何分子。
[0023] "抗原"是一种实体（例如蛋白质实体或肽），结合分子特异性的与其结合。
[0024] 术语"表位"或"抗原决定簇"是指与结合分子（例如抗体）特异性结合的抗原位 点。
[0025] 如在本文中使用的，对抗原（例如PAMG-1) "特异"的抗体结合至该抗原。
[0026] 如在本文中使用的，如果孕妇满足如本文所公开的预定的标准，包括但不限于例 如：具有提示分娩的迹象、征兆或不适，但没有临床可检测的破膜（ROM)(例如液体从宫颈 口泄漏、液体在阴道后穹窿中淤积），则该孕妇"适合于"或"需要"根据本文公开的方法预 测 ITD。
[0027] 如在本文中使用的术语"约"意指在如本领域技术人员确定的特定值的可接受误 差范围之内，其将部分取决于该值是如何测定或确定的，即测定体系制约。例如，按照技术 实践"约"可表示1倍标准差以内或多于1倍标准差。可选地，"约"可意指给定值的上至 20%、优选上至10%、更优选上至5%、且还更优选上至1%的范围。可选地，特别是关于生 物体系或过程，该术语可表示数值的一个数量级以内，优选5倍以内，更优选2倍以内。特 定值记载在申请和权利要求书中时，除非另有声明，术语"约"意指应当认为该特定值在可 接受的误差范围之内。
[0028] 除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语的含义与本
【发明内容】
所属技术领 域普通技术人员通常的理解相同。在冲突的情况下，以本文件，包括定义为准。
[0029] 本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献通过引用将其全部并入。 本文公开的材料、方法和实施例仅为说明性的，且并非旨在限制。
[0030] 本
【发明内容】
一个或多个实施方案的细节在下面的附图和说明书中阐述。优选的方 法和材料记述如下，但与本文的记载相似或等同的方法和材料也可用于本
【发明内容】
的实践 或测试。本文所公开方法的其它特征、目标和优点将从说明书、附图和权利要求中清楚得 出。
【附图说明】
[0031] 图1为可用于检测阴道液样品中PAMG-1的存在（例如用于诊断分娩时间（TTD)) 的示例性装置的示意性纵截面图，图2为该装置的俯视图。附图标记表示示例性装置的下 列组件：10 -M271抗体区；12 -衬垫；14 -试验区；16 -对照区；18 -箭头；22 -硝化纤维 素膜；24 -滤纸膜；26 -粘性硬塑料基材；28 -带箭头的半透明保护膜；和30 -不透明保 护膜。
【具体实施方式】

【发明内容】
[0032] 的各方面记述如下。
[0033]
[0034] 本
【发明内容】
提供用于预测预定的时间框架内（例如约14天、7天或48小时以内） 的TTD的改进方法。还提供用于确定早娩（例如在37周妊龄之前分娩）风险的方法，和用 于确定孕妇自发绒毛膜破裂（ROM)风险的方法。通常，本文公开的方法包括当PAMG-1以超 出预定的检测阈值的水平存在时检测PAMG-1的存在。本公开方法能以高PPV和高NPV预 测TTD和/或排除自发早娩。根据本文公开方法的阳性的试验可指示分娩临近（例如约14 天、7天或48小时以内）。阴性的试验（没有检测到PAMG-1)指示分娩不太可能在14天、7 天或48小时以内发生。阳性的试验也可指示孕妇面临自发预产期前过早ROM和/或早娩 的风险，而阴性的试验指示孕妇没有面临自发预产期前过早ROM或早娩的风险。于是，还提 供用于排除（预测为高度不可能）自发预产期前过早ROM或早娩的方法。
[0035] PAMG-1是在羊水中发现浓度高但在宫颈-阴道排出物中为低浓度背景水平的蛋 白质。近年来，医学界日益接受了将PAMG-1的检测广泛地用于辅助医护人员确认或排除 自发胎膜破裂（ROM)。