角质层状态的评价方法及关于化妆品的角质层改善效果的评价方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及角质层状态的评价方法。此外，本发明也涉及对化妆品或美容处置的 角质层改善效果进行评价的方法。
【背景技术】
[0002] 在选择化妆品方面，准确地了解皮肤的状态是非常重要的，为了保持更理想 的皮肤状态，需要根据皮肤状态来选择化妆品、美容方法。皮肤状态的评价中，使用 Reviscometer、Cutometer等来测定皮肤的柔软性；进行了皮肤水分蒸发量（TEWL)的计测、 利用显微镜进行的肌理的测定、利用带剥离进行的角质层评价等（非专利文献1、2、3,专利 文献1)。其中，可以认为利用带剥离进行的角质层评价能够容易采取，对于适当地评价肌肤 状态是有效的，公开了除了角质细胞的形状、面积、核的有无以外，通过使用能够染色0折 叠结构的刚果红将角质层进行染色来观察，从而鉴别皮肤的柔软性的方法（专利文献2)。
[0003] 由0折叠结构的多寡来表现的皮肤柔软性虽然是角质层状态的指标之一，但除 了柔软性以外，有显示角质层状态的各种特性，例如透明度、角质层细胞间脂质的结构、角 质层屏障功能等。然而，关于从带剥离出的角质层简便地测定这些信息的方法，还没有进行 充分的研究，此外能够简便地鉴别肌肤粗糙状态的方法也没有确立。
[0004] 现有技术文献
[0005] 专利文献
[0006] 专利文献1 :日本特开2007-033201号公报
[0007] 专利文献2 :日本特开2007-263655号公报 [0008] 非专利文献
[0009] 非专利文献1:小山内宰等：7y于工<y夕シy-只''皮膚①抗老化最前線，第 150页~第161页
[0010] 非专利文献2:高桥元次等：7y于工4y夕シy-只''皮膚①抗老化最前線，第 114页~第133页
[0011] 非专利文献 3:(株）4y亍夕7:FragranceJournal,35 ⑵，67 页~69 页 (2〇〇7 年）
【发明内容】
[0012] 发明所要解决的课题
[0013] 本发明的课题在于提供更简便地评价角质层状态的方法。进一步，本发明的课题 在于提供使用简便地评价角质层状态的方法，来评价关于角质层改善效果的候选化妆品或 美容处置的方法。
[0014] 用于解决课题的手段
[0015]对于粗糙的角质层，已知角质层透明性低，屏障功能也低，细胞间脂质乱。虽然能 够使用这些指标来评价角质层状态，但在这些指标的测定中，各自需要特殊的装置。因此， 本发明人等为了提供更简便地评价角质层状态的方法而进行了深入研究。其结果是，发 现如果用荧光素、玫瑰红将角质层片进行染色，则在粗糙的角质层的情况下染色强度变高 (图1和图2)，而且发现使用了荧光素、玫瑰红的染色，即使是一眼看上去健康的皮肤，也灵 敏度优异到可以识别其状态的程度（图3)，能够评价角质层片的角质层状态。进一步，提供 了通过使用该角质层状态的评价法，来评价关于角质层改善效果的候选化妆品或美容处置 的方法。
[0016] 更具体而言，本发明涉及以下的发明：
[0017] [1] -种角质层状态的评价方法，其包括下述工序：
[0018] 使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与角质层片接触的工序，
[0019] 洗涤上述染料的工序，
[0020] 测定角质层片中的上述染料的染色强度的工序。
[0021] [2]根据项目[1]所述的评价方法，上述角质层状态的评价是对角质层透明度、角 质层细胞间脂质的结构和角质层的水分含量进行评价。
[0022] [3]根据项目[1]或[2]所述的评价方法，上述评价基于与标本的染色强度的比 较、或与比色表的比较来进行。
[0023] [4]根据权利要求1~3的任一项所述的方法，上述角质层片为通过带剥离调制的 角质层片。
[0024] [5] -种关于角质层改善效果的候选化妆品的评价方法，其包括下述工序：
[0025] 对角质层片应用候选化妆品的工序，
[0026] 使角质层片干燥的工序，
[0027] 使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与角质层片接触的工序，
[0028] 洗涤上述染料的工序，以及
[0029] 测定角质层片中的上述染料的染色强度的工序。
[0030] [6]根据项目[5]所述的方法，上述角质层片为培养角质层片。
[0031] [7] -种关于角质层改善效果的美容处置的评价方法，其包括下述工序：
[0032] 使选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料的水溶液与对皮肤进行美容处置后取 得的调制角质层片接触的工序，
[0033] 洗涤上述染料的工序，以及
[0034] 测定上述调制角质层片中的上述染料的染色强度或荧光强度的工序。
[0035] [8]根据项目[7]所述的评价方法，上述评价基于：用染料对美容处置前的通过带 剥离取得的角质层片进行染色，将美容处置前后的角质层片的荧光强度进行比较。
[0036] [9]根据项目[8]所述的方法，上述美容处置为化妆品的涂抹、蒸汽的应用或按 摩。
[0037] 发明的效果
[0038] 通过本发明，能够使用选自荧光素、玫瑰红和它们的盐中的染料来评价角质层片 中的角质层状态。由于能够进行角质层状态的评价，因而通过评价候选化妆品或美容处置 的应用前后的角质层状态，能够确认角质层改善效果。
【附图说明】
[0039] 图1为显示对将被水湿润了的培养角质层片慢慢干燥而得的健康角质层模型、与 冷冻干燥而得的肌肤粗糙角质层模型进行荧光素染色并拍摄到的图像。
[0040] 图2为显示对从进行10%SDS处理而诱导了肌肤粗糙的皮肤通过带剥离取得的肌 肤粗糙角质层片、与从不进行SDS处理的部位的皮肤取得的健康角质层片进行荧光素的结 果。显示皮肤的状态（图2A)、和表示荧光素染色时的荧光亮度的图（图2B)。
[0041] 图3显示表示对从上臂内侧的皮肤通过带剥离取得的角质层片、与从面颊的皮肤 取得的角质层片荧光素染色后的荧光亮度的图。
[0042] 图4显示在体内使皮肤湿润，接着在低湿度（10% )或高湿度（90% )进行干燥 后，对通过带剥离取得的角质层片进行荧光素染色并拍摄到的图像（图4A)，以及显示表示 在该图像中选择12视场而计测的荧光亮度的图（图4B)。
[0043] 图5显示表示在将从皮肤通过带剥离取得的角质层用水浸润，在湿度90%慢慢干 燥了的情况，以及使用硅胶快速干燥了的情况下，用各种染料进行染色而得的染色强度的 图。作为染料，使用了（A)荧光素、（B)玫瑰红、（C)藏红、（D)刚果红。
[0044] 图6显示表示使角质层片浸渍于水、3%赤藓醇（ER)和3%P0E(14)POP(7)二甲基 醚后，在装有硅胶的密闭容器中，在湿度〇%进行了干燥的情况下的由荧光素染色得到的荧 光亮度的图。作为对照，也显示使水在湿度90%进行了干燥的情况下的结果。
[0045] 图7显示表示使角质层片浸渍于0%、0. 1%、1%、3%、10%的P0E(14)P0P(7)二甲 基醚中，然后在装有硅胶的密闭容器中，在湿度0%进行了干燥的情况