一种可同时评价补血类中药复方制剂四种原药材质量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药材的质量评价方法，尤其涉及一种评价补血类中药复方制剂 中四种原药材质量的方法。
【背景技术】
[0002] 复方阿胶浆是由东阿阿胶股份有限公司生产的一种补益气血的复方中药口服液， 其配方由阿胶、熟地黄、党参、山楂、红参五味中药材组成。目前，原药材的质量标准检测 项需对五味药材中的各药效成分含量单独测定，需对每味药材分别处理、单独进样检测， 且目前建立的成分测定指标不能全面反映药材质量。本发明通过建立原药材的前处理及 HPLC-MS检测方法，统一了多味药材的前处理及检测方法，避免了多味药材分别前处理、单 独检测的繁琐过程，用时更短，且检测指标更加全面，更能多维度反映药材的质量，建立了 原药材的质量综合评价体系。
[0003] 目前在将药典质量标准及文献中改进的熟地黄、党参、山楂、红参的质量评价方法 应用于复方阿胶浆的原药材药效成分含量检测时，存在以下问题：
[0004] 四味中药材中的成分需用不同的试剂单独提取，方法繁琐、提取时间长且各药材 成分分析方法的液相条件不一致；
[0005] 药典中对于山楂的成分检测为枸椽酸单一成分，红参的药效成分检测为Rgl、Re、 Rbl三种成分，不能较全面地反应此两种药材的质量。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是弥补目前分析方法的不足，提供一种能对四种药材一 次处理、一次进样同时检测四种药材中枸椽酸、毛蕊花糖苷等九种药效成分的方法，且药材 前处理方式采用超声法，较之前的前处理方法更简单、用时更短，可全面、准确地评价四种 药材的质量。
[0007] HPLC-MS技术可根据不同类型化合物的裂解规律，快速、灵敏、高通量地测定中药 化学成分含量，因此被广泛应用于中药化学成分研究。为了保证高效地实现对四种药材采 用同一处理方法，对九种化合物采用一次进样同时定量，本发明通过对四种药材的前处理 条件、色谱条件、质谱参数、流动相组成、流动相洗脱梯度、流速等进行了摸索，在对四种药 材的前处理条件进行摸索的过程中，由于其成分复杂，并且考虑最大程度地提取药材中的 药效成分，采取了药材煎煮、回流、超声等方法，最终得到了最佳的药材前处理方法，发现甲 醇的浓度选择、超声次数的筛选是关键点。通过本方法的成功建立，为复方制剂多种原药材 的整体质量评价提供了 一种新的研究思路。
[0008] 本发明提供的质量检测方法能同时检测并定量分析熟地黄、党参、山楂、红参中的 九种成分，且药材前处理方法简单、可操作性强，能够高效、准确地评价药材的质量，为指导 复方制剂的生产、构建原料评价体系有重要意义。
[0009] 根据以上思路，本发明所提供的原药材的质量检测方法是采用高效液相色谱-串 联三重四级杆质谱对样品进行分析，样品经超声处理后取上清，稀释后用外标法进样分析。
[0010] 为达上述目的，本发明一种可同时评价补血类中药复方制剂四种原药材质量的方 法，包括以下步骤：
[0011] (1)、供试品的制备
[0012] 精密称取过筛的党参粉末2g，置于锥形瓶中；
[0013] 将熟地黄切片，置于烘箱内烘干、粉碎，过筛，准确称取熟地黄粉末5g、山楂粉末 2g、红参粉末5g置于上述同一锥形瓶中，加入50-120ml的70% - 90%甲醇超声1-4次，每 次0. 2-1小时，滤过后合并滤液，用甲醇将滤液稀释20倍，作为供试品溶液。
[0014] (2)、HPLC-MS 检测
[0015] 采用C18色谱柱；流动相：A: 0.02%甲酸水-B:0.02%甲酸乙腈（含0.02%甲酸的 水和含0. 02%甲酸的乙腈），梯度洗脱，流速为0. 2-0. 6ml/min，柱温为30°C ;进样量20ul ; 分析时间60分钟；然后样品进入质谱仪检测。
[0016] 其中步骤（1)中所述党参过四号筛，所述熟地黄切片厚度为0. 5cm，并置于60°C烘 箱内烘干半小时后粉碎，过40目筛。
[0017] 其中步骤（1)中药材样品前处理方法为准确称取党参粉末2g、熟地黄粉末5g、山 楂粉末2g、红参粉末5g置于锥形瓶中，加入甲醇的浓度75%、体积为100ml。
[0018] 其中步骤（1)中甲醇超声次数为2次，每次0.5h。
[0019] 其中步骤⑵中梯度洗脱程序为：0分钟流动相A :B的比例为75:25 ;15分钟流动 相A :B的比例为68:32 ;25分钟流动相A :B的比例为63:37 ;45分钟流动相A :B的比例为 22:78 ;60分钟流动相A :B的比例为75:25。流速为0. 5ml/min。
[0020] 其中步骤⑵中采用的色谱仪为Agilent 1290高效液相色谱仪，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱（250mmX4. 6mm, 5 μπι);米用的质谱仪为 TSQ Quantum Access Max 三重四级杆质谱仪；质谱仪参数为：碰撞气为超纯氦，鞘气和辅助气为高纯氮；电喷雾电 离（ESI)，检测模式为负离子模式；鞘气（Shoath Gas Pressure) :40psi;辅气（Aux Gas Pressure) :20psi ;加热器温度（Temp) :350°C ;电压（IonSpray) :-3000V ;使用选择离子模 式（MRM) 〇
[0021] 本发明与现有技术不同之处在于本发明取得了如下技术效果：
[0022] 本发明通过采用高效液相串联质谱检测技术，解决了通用的液相检测中对于样品 除杂要求高且样品检出限高的问题；通过创造性的研究选择了适用色谱柱、流动相比例及 洗脱梯度、色谱条件、质谱参数，提供了通过一次进样对九种活性成分同时定量的检测方 法。本发明提供的四种药材的质量检测方法可同时检测九种化合物并对其进行定量分析， 克服了现有方法检测成分单一、药材前处理方法复杂、耗时长的不足，经试验证实，本发明 提供的质量检测方法稳定性好、精密度和准确度高，可较全面、准确的评价熟地黄的质量， 对保证该药材的临床药效有重要意义。
[0023] 下面结合附图对本发明作进一步说明。
【附图说明】
[0024] 图1为本发明评价复方制剂中四种原药材质量的方法的总离子流图。
[0025] 附图标记说明：1-绿原酸、2-党参炔苷、3-麦角甾苷、4-枸椽酸、5-Rgl、6-Re、 7-RbI、8-S-Rg2、9-R-Rg2。
【具体实施方式】
[0026] 以下结合实施例，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。
[0027] 实施例1
[0028] 四种原药材的质量检测
[0029] (1)、供试品的制备
[0030] 分别取来源于河南、山西、甘肃等地的5批熟地黄、党参、山楂、红参药材，精密称 取粉碎后过四号筛的党参粉末2g，置于锥形瓶中；
[0031] 将熟地黄切成厚度为0. 5cm的片，置于60°C烘箱内烘干半小时后粉碎，过40目筛， 准确称取熟地黄粉末5g、山楂粉末2g、红参粉末5g置于上述同一锥形瓶中，加入100mL的 75%甲醇超声2次，每次0. 5小时，滤过后合并滤液，用甲醇将滤液稀释20倍，作为供试品 溶液。
[0032] (2)标准品的制备：精密称取党参炔苷、麦角甾苷、枸椽酸、绿原酸、Rgl、Re、RbU S-Rg2、R-Rg2，配成如下表所示的混标溶液。
[0033] 表1-1标准曲线浓度（yg/mL)
[0035] (3)、标准曲线的制备
[0036] 精密吸取上述对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，进行LC-MS分析测定，以各个对 照品的浓度为横坐标、各个峰面积的值为纵坐标绘制标准曲线，如下：
[0037] 党参炔苷标准曲线：y = 215601X - 32019, R2= 0· 9946
[0038] 麦角甾苷标准曲线：y = 394254x - 23315, R2= 0· 9996
[0039] 枸椽酸标准曲线：y = 502256X - 13655, R2= 0· 9951
[0040] 绿原酸标准曲线：y = 1259334x - 1259, R2= 0· 9983
[0041] Rgl 标准曲线：y = 9084x - 120, R2= 0· 9946
[0042] Re 标准曲线：y = 70846x - 14216, R2= 0· 9973
[0043] Rbl 标准曲线：y = 57086x - 148, R2= 0· 9980
[0044] S-Rg2 标准曲线：y = 15658x - 5482, R2= 0· 9964
[0045] R-Rg2 标准曲线：y = 12356x - 2130, R2= 0· 9916
[0046] (4)、HPLC-MS 检测
[0047] 米用 C18 色谱柱（Agilent Zo