。无质量问题的壳体放在合格品专用售内备用。
[0028] (2)贴膜：将制成的NC膜片正面固定到忍片壳体内侧的胶边上，使其处于反应窗 口正中。
[0029] (3)装吸水材料：先将一张擦镜纸正面紧贴NC膜片背面放置，然后再将吸水材料 紧贴于擦镜纸的反面平放。
[0030] (4)扣盖：将忍片上壳体与下壳体紧扣，使壳体四条缝隙均匀扣实。
[00川 妨贴品名标签：将与NC膜片品名一致的标签，贴入忍片壳体正面的品名槽内。
[0032] (6)忍片净化：用洗耳球将壳体表面及NC膜片上的灰尘和纤维丝吹去，保持膜面 洁净。
[003引 7)忍片封袋：将净化处理后的忍片整齐装入贴有相应标识的自封袋，并置放于 4°C恒溫保存。
[0034] 实施例2制备用于分型检测幽口螺杆菌感染的蛋白忍片的试剂盒
[0035] 试剂盒是由洗涂液、显色剂和实施例1的蛋白忍片组成。
[0036] 1.配制洗涂液
[0037] (1)用1000ml量筒量取500m口邸缓冲液，倒入2000ml烧杯；
[0038] (2)用100ml量筒量取100ml饱和硫酸锭溶液，倒入2000ml烧杯；
[0039] (3)打开磁力揽拌器开关，调节转速至液体能充分揽拌均匀； W40] (4)用100ml量筒量取20mlTween-20，倒入2000ml烧杯，继续揽拌；
[0041] (5)用500ml量筒量取500ml去离子水； 阳0创 （6)倒入装过Tween-20的量筒约100ml，摇动量筒清洗残留Tween-20,再倒入 2000ml烧杯； 阳0创 （7)重复洗3次，把剩余去离子水全部倒入2000ml烧杯，定容至1000ml充分混匀 后，按每支7ml分装。
[0044] 注：T邸（1L) :54邑Tris、27. 5邑HsBOs'lOml0. 5MpH8. 0EDTA
[0045] 2.制备胶体金及免疫胶体金显色剂
[0046] 制备胶体金：将0. 4g/mL的氯金酸300ul加入到800ml去离子水然后加热至沸， 在揽拌情况下迅速加入Ig/mL巧樣酸Ξ钢32ml，继续加热lOmin，液体呈葡萄酒红即为金溶 胶，冷却后加蒸水至原体积。
[0047] 制备免疫胶体金显色剂： 柳48] (1)取800ml胶体金，用0.1M的K2CO3溶液调抑至6.0;
[0049] (2)在揽拌的条件下逐滴加入5mlImg/ml的SPA，继续揽拌20min，确保混合均匀 但不起泡沫；
[0050] 做在揽拌的条件下，滴加10ml10%的BSA，继续揽拌5min充分混匀； 阳化1](4)用70ml的离屯、管，于4°C3000巧m离屯、lOmin，取上清；
[0052] (5)将上清液于4°C14000巧m离屯、40min，弃上清； 阳05引（6)将沉淀悬浮于800ml的悬浮液中，按每支4ml分装。
[0054] 实施例3检测验证 阳化5] 分别取正常人和感染幽口螺杆菌感染患者的血清各5份，分为对照组和实验组。 采用实施例2的试剂盒，严格按照下列步骤操作，进行对比和验证本发明的蛋白忍片的检 测结果。 阳050] 检测步骤：
[0057] 1)润膜：取洗涂液160μ1 (4滴）加于忍片检测窗口膜面上，均匀润湿膜面；
[0058] 2)加样：取处理好的待检血清200μ1，加于忍片检测窗口膜面上；
[0059] 3)洗涂：待样本充分渗入后，为保证洗涂效果，分两步洗涂：取洗涂液120μ1 (3 滴），加于忍片检测窗口膜面上，待洗涂液渗入后，再取洗涂液120μ1 (3滴），加于忍片检测 窗口膜面上；
[0060] 4)显色：待洗涂液充分渗入后，取显色剂360μ1化滴），加于忍片检测窗口膜面 上；
[oow]W洗涂：待显色剂充分渗入后，为保证洗涂效果，分两步洗涂：取洗涂液120μ1 (3 滴），加于忍片检测窗口膜面上，待洗涂液充分渗入后，再取洗涂液120μ1 (3滴），加于忍片 检测窗口膜面上；
[0062] 6)检测：待洗涂液充分渗入后，用生物忍片阅读仪读取灰度值。
[0063] 结果发现，正常人血清检测的蛋白忍片上时，蛋白忍片上除了反应对照探针有显 色外其余检测项的色度均没有变化；而W幽口螺杆菌感染患者的血清检测蛋白忍片时，蛋 白忍片上反应对照探针和检测项均有显色，具体结果参见表1。
[0064]表1 阳0化]
[0066] 实验结果表明各个检测项的色度随着血清中幽口螺杆菌IgG抗体的含量的不同 而发生变化，检测项的灰度值在一定范围内随着血清中幽口螺杆菌IgG抗体含量的增加而 递增，当血清中幽口螺杆菌IgG抗体的含量达到一个临界值时，其灰度值达到最大值不再 增加。并且实验表明3个蛋白联合检测其诊断的准确性明显优于一个蛋白检测项；并且3 个蛋白联合检测相对3次检测3个蛋白的方法更加快速简便。
【主权项】
1. 一种用于分型检测幽门螺杆菌感染的蛋白芯片，其特征在于，包括基膜和以点阵的 形式分别点在基膜上的抗原，所述的抗原有三种：CagA抗原、VacA抗原和Ure抗原。2. 根据权利要求1所述的用于分型检测幽门螺杆菌感染的蛋白芯片，其特征在于，所 述的基膜上还固定有阴性对照和反应对照。3. 含有如权利要求1-2任意一种所述的用于分型检测幽门螺杆菌感染的蛋白芯片的 试剂盒，其特征在于，包括： 1) 洗涤液：由TBE和饱和硫酸铵溶液组成； 2) 显色剂：葡萄球菌A蛋白胶体金标记物； 3) 蛋白芯片
【专利摘要】本发明提供了一种用于分型检测幽门螺杆菌感染的蛋白芯片，包括基膜和以点阵的形式分别点在基膜上的抗原，所述的抗原有三种：CagA抗原、VacA抗原和Ure抗原。本发明使用的检测抗原为Ure、CagA、VacA三种单一蛋白，可同时检测患者血清中针对三种抗原的特异性IgG抗体，从而可以判断是I型或II型感染，更有利于临床治疗，此外本产品还具有检测敏感度高，快速简便、立等可读，抗原用量少等优点。
【IPC分类】G01N33/569, G01N33/68
【公开号】CN105277722
【申请号】CN201510711577
【发明人】闫小君, 阎平希, 王小明, 薛小平, 曾德隆, 王艳玲, 郭松
【申请人】泰州欣康基因数码科技有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年10月28日