免疫层析用试验片、用于其的展开液及使用其的免疫层析法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫层析用试验片、用于其的展开液及使用其的免疫层析法。
【背景技术】
[0002] 作为检测生物体中的抗原等微量物质的方法，有利用侧流型免疫层析法的检查 法。在该方法中，使标记颗粒捕捉样本中含有的被检物质，利用毛细管现象使多孔载体移 动。之后，使该被检物质与固定于多孔载体上的捕捉物质接触。由此，捕捉上述被检物质并 进行浓缩，在固定有捕捉物质的部分使目标物质显色。可根据该显色判定有无被检物质。作 为该免疫层析法的特征，可以举出下述3点。
[0003] (1)至判定为止所需要的时间短，能够进行迅速的检查。
[0004] (2)仅通过滴加样本即可测定，操作简便。
[0005] (3)无需特别的检测装置，容易判定。
[0006] 利用这些特征，免疫层析法被用于妊娠检查药、流行性感冒检查药，作为新的 P0CT(即时检测，Point Of Care Testing)的方法得以利用。另外，在食品检查中也被广泛 用作例如食物过敏原的检查试剂等而日益受到关注。
[0007] 本申请人鉴于免疫层析法相关的上述特征对应用于膜的试剂进行了研究开发，开 发出了使用荧光二氧化硅微粒的技术（参照专利文献1等）。由此，与现有的将生物体物 质、生物体细胞或金胶体颗粒用于试剂的方法相比，能够廉价且格外稳定地进行测定和检 测。另外，还能够更为确实地应对检测灵敏度的提高或定量化之类的要求，对于免疫层析法 利用范围的扩大做出贡献。
[0008] 现有技术文献
[0009] 专利文献
[0010] 专利文献1 :国际公开第2008/018566号小册子
[0011] 专利文献2 :日本专利第4578570号公报
【发明内容】
[0012] 发明所要解决的课题
[0013] 本发明人进一步对上述使用荧光微粒的免疫层析技术继续进行了研究，结果得 知，有时构成标记剂的微粒会产生凝集而难以在试验片内移动。具体而言，为如下所述的现 象。样本在被应用于免疫层析法时，经常利用碱或酸进行灭菌处理。由于处理后保持该状 态会对膜等部件造成损害，因而通常在试验前需要进行中和处理。受到该中和所产生的盐 的影响，有时标记剂在膜内产生凝集，未移动至试验区域而停滞下来。其结果，捕捉到目标 物质的标记颗粒未到达试验区域，难以进行高灵敏度的检测（作为未进行碱处理而将样本 利用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液进行稀释、并在其中应用m)TA的示例，参照上述专利 文献2)。对于利用了二氧化硅微粒的标记剂，该影响尤其显著，要求对其进行改善。
[0014] 本发明的目的在于提供即使在利用碱或酸对样本实施灭菌处理时也能够确保标 记剂的良好的流动性、能够以更高的灵敏度和精度进行目标物质的检测或测定的免疫层析 用试验片、用于其的展开液及使用其的免疫层析法。
[0015] 用于解决课题的手段
[0016] 上述课题通过下述手段得以解决。
[0017] [1] -种免疫层析用试验片，其为具备凝集抑制垫、结合垫以及膜的免疫层析用试 验片，上述膜具有捕捉目标物质的试验区域，上述凝集抑制垫包含脱盐剂，上述结合垫包含 标记剂。
[0018] [2]如[1]所述的免疫层析用试验片，其中，上述脱盐剂为螯合剂或适体。
[0019] [3]如[2]所述的免疫层析用试验片，其中，上述螯合剂为氨基羧酸系螯合剂。
[0020] [4]如[1]~[3]中任一项所述的免疫层析用试验片，其中，上述标记剂为荧光二 氧化硅微粒。
[0021] [5]如[1]~[4]中任一项所述的免疫层析用试验片，其中，在上述凝集抑制垫中 导入有连结分子，经由该连结分子导入有脱盐剂。
[0022] [6] -种免疫层析用展开液，其包含碱或酸、目标物质以及脱盐剂。
[0023] [7]如[6]所述的免疫层析用展开液，其中，上述脱盐剂为螯合剂或适体。
[0024] [8]如[7]所述的免疫层析用展开液，其中，上述螯合剂为氨基羧酸系螯合剂。
[0025] [9]如[6]~[8]中任一项所述的免疫层析用展开液，其经由下述步骤进行了处 理：对样本液赋予碱或酸的步骤、进行加热的步骤、以及利用碱或酸进行中和的步骤。
[0026] [10] -种免疫层析法，其为使用[1]~[5]中任一项所述的试验片进行的免疫层 析法，对上述试验片赋予包含碱或酸以及目标物质的展开液，进行该样本液中的目标物质 的检测。
[0027] [11] -种免疫层析法，对具备具有捕捉目标物质的试验区域的膜的免疫层析用试 验片赋予[6]~[9]中任一项所述的包含脱盐剂的展开液，进行该目标物质的检测。
[0028] [12] -种免疫层析法，其为赋予包含碱或酸以及目标物质的展开液并使其通过 膜、将目标物质捕捉到膜的试验区域来进行检查的免疫层析法，通过使用含有脱盐剂的脱 盐垫、或者对样本液进行脱盐处理来进行展开液的脱盐，防止目标物质的凝集。
[0029] 发明的效果
[0030] 根据本发明的免疫层析用试验片、用于其的展开液、以及使用其的免疫层析法，即 使在利用碱或酸对样本实施灭菌处理时，也能够确保标记剂的良好的流动性，能够以更高 的灵敏度和精度进行目标物质的检测或测定。对于利用了二氧化硅微粒的标记剂发挥尤其 显著的效果，使其在膜内适当地移动而实现目标物质的良好检测等。
[0031] 本发明的上述特征及其他特征和优点可由下述记载及所附的附图进一步明确。
【附图说明】
[0032] 图1为示意性示出本发明中适合使用的长条试验体的分解立体图。
[0033] 图2为本发明中适合使用的试条的说明图，图2(a)为俯视图、图2(b)为展开截面 图。
[0034] 图3为示意性示出本发明中适合使用的试条的变形例的部分展开截面图。
[0035] 图4为示意性示出本发明中适合使用的试条的其他变形例的部分展开截面图。
[0036] 图5为示出实施例以及比较例中进行的目标物质的检测试验的结果（荧光强度） 的曲线图。
[0037] 图6为示出标记颗粒在膜内的移动状态（颗粒集聚比例）的曲线图。
[0038] 图7为示出在比较例中对进行试验后的膜的内部进行观察的电子显微镜照片的 附图代用照片。
[0039] 图8为示出参考例中得到的二氧化硅颗粒在分散液中的粒度分布的曲线图。
[0040] 图9为示出利用实施例中使用的凝集垫的实验的结果（标记颗粒在膜内的移动状 态）的显微镜照片。
[0041] 图10为示出利用实施例中使用的凝集垫的实验的结果（标记颗粒在膜内的移动 状态）的另一显微镜照片。
【具体实施方式】
[0042] 下面参照附图对本发明的免疫层析用试验片的优选实施方式进行说明。
[0043] [试条（试验片）]
[0044] 本实施方式的免疫层析用试条（试验片）中，优选下述部件以相互产生毛细管现 象的方式串联连结。
[0045] ?凝集抑制垫8a
[0046] ?结合垫（浸渗标记体并进行干燥而得到的部件）8b
[0047] ?膜（抗体固定化膜）8c
[0048] ?吸收垫8d
[0049] 在本实施方式中，如图1和图2所示，具备具有上述试验区域nt和参照区域η ^的 膜8c的试条10被壳体上部6a与壳体下部6b夹持内包，形成长条试验体100。在壳体上部 6a设置有检测开口部61和样本导入开口部62。经由该检测开口部61，能够将照射光送至 内部的试条10,并对由此处发出的荧光或吸光进行检测、观测。另一方面，经由样本导入开 口部62,能够将样本液S供给至试条10而进行测定试验。
[0050] 参照图2 (a)和图2 (b)对本实施方式的免疫层析用试条的一个优选实施方式进行 说明，但本发明并不受其限制。图2(a)示出了本发明的免疫层析用试条的一个优选实施方 式的俯视图，图2(b)是表示图1(a)示出的免疫层析用试条的展开纵截面图的图。如上所 述，本实施方式的免疫层析用试条10具备凝集抑制垫8a、结合垫8b、抗体固定化膜8c、吸收 垫8d。进而，如本实施方式所述，上述各构成部件优选由带粘合剂的衬板8e进行衬底。
[0051] (目标物质）
[0052] 在本发明中，作为检测、定量的对象的目标物质1可以举出抗原、抗体、DNA、RNA、 糖、糖链、配体、受体、肽、化学物质等。在本发明中，作为含有目标物质1的试样没有特别限 制，可以举出尿、血液等液体试样。
[0053] (凝集抑制垫）
[0054] 在本实施方式中，凝集抑制垫8a为滴加含有目标物质的样品（样本）的构成部 件。凝集抑制垫的材料、尺寸等没有特别限定，例如可以利用适用于样品垫的通常的材料、 尺寸。该凝集抑制垫8a中赋予了后述的脱盐剂9。
[0055] 凝集抑制垫的制作方法没有特别限定，例如可以举出在样品垫或结合垫所用的膜 材料中浸渗脱盐剂的方法。具体而言，可以将膜材料浸渍在脱盐剂的溶液中、之后进行干燥 来得到。或者，可以举出将脱盐剂的溶液或分散液涂布、滴加或喷雾至膜材料上、之后进行 干燥的方法等。脱盐剂的应用量没有特别限定，每单位面积（cm2)的垫8a中的脱盐剂的含 量优选为1 μ g~1〇〇〇 μ g。
[0056] 此外，将凝集剂固定于垫材料的方法例如可以举出利用冷冻干燥进行的固定化。 具体而言，可以使1% m)TA溶液浸渗到玻璃纤维制造的结合垫中，之后在-8〇°c~-10°C冷 冻。在冷冻后进行冷冻干燥处理，使其固定化