或加成有N-羟基琥珀酰亚胺（NHS)酯基、马来酰亚胺基、异氰酸酯基、 异硫氛酸醋基、S全基、对硝基苯基、^乙氧基甲基、环氧基、氛基等活性基团的上述功能性化 合物与具有与这些活性基团相应地发生反应的取代基（例如氨基、羟基、巯基）的硅烷偶联 剂发生反应而进行共价结合，使1种或2种以上的硅烷化合物与所得到的产物进行缩聚，形 成硅氧烷键。
[0120] 下面例示出使用APS作为上述硅烷偶联剂、使用四乙氧基硅烷（TE0S)作为硅烷化 合物的情况。
[0121] 【化3】
[0122]
[0123] 作为具有或加成有上述活性基团的上述功能性化合物的具体例，可以举出5_(以 及-6)-羧基四甲基若丹明-NHS酯（商品名、emp Biotech GmbH公司制造）、由下式分别表 示的DY550-NHS酯或DY630-NHS酯（均为商品名、Dyomics GmbH公司制造）等具有NHS酯 基的荧光色素化合物。
[0126] 作为具有上述取代基的硅烷偶联剂的具体例，可以举出γ-氨基丙基三乙氧基硅 烷（APS)、3-[2-(2-氨基乙基氨基）乙基氨基]丙基三乙氧基硅烷、Ν-2(氨基乙基）-3-氨 基丙基甲基二甲氧基硅烷、3-氨基丙基三甲氧基硅烷等具有氨基的硅烷偶联剂。其中优选 APS〇
[0127] 作为进行上述缩聚的上述硅烷化合物，没有特别限制，可以举出TE0S、γ-巯基丙 基三甲氧基硅烷（MPS)、γ-巯基丙基三乙氧基硅烷、γ-氨基丙基三乙氧基硅烷（APS)、 3-硫氰基丙基三乙氧基硅烷、3-环氧丙氧基丙基三乙氧基硅烷、3-异氰酸根合丙基三乙氧 基硅烷以及3-[2-(2_氨基乙基氨基）乙基氨基]丙基三乙氧基硅烷。其中，从形成上述二 氧化硅颗粒内部的硅氧烷成分的观点考虑，优选TEOS ;从形成上述二氧化硅颗粒内部的有 机硅氧烷成分的观点考虑，优选MPS或APS。
[0128] 若按上述方式进行制备，则能够制造球状或接近球状的二氧化硅颗粒。接近球状 的二氧化硅颗粒具体是指长轴与短轴之比为2以下的形状。
[0129] 为了得到所期望的平均粒径的二氧化硅颗粒，可以使用YM-10、YM-100 (均为商品 名、MILLIP0RE公司制造）等超滤膜进行超滤，除去粒径过大或过小的颗粒，或者在适当的 重力加速度下进行离心分离，仅回收上清或沉淀。
[0130] 作为吸附或结合在上述二氧化硅颗粒的表面的生物体分子（结合性物质），可以 举出抗原、抗体、DNA、RNA、糖、糖链、配体、受体、蛋白质或肽。此处，配体是指与蛋白质特异 性结合的物质，例如是指与酶结合的底物、辅酶、调节因子或激素、神经递质等，不仅包含低 分子量的分子或离子，还包含高分子量的物质。
[0131] 标记颗粒（优选荧光二氧化硅颗粒）的平均粒径优选为lnm~Ιμπκ更优选为 20nm~500nm、进一步优选为50nm~300nm。
[0132] 在本发明中，上述平均粒径如下求出：从透射型电子显微镜（TEM)、扫描型电子显 微镜（SEM)等的图像中随机选择100个标记试剂二氧化硅颗粒，利用图像处理装置由上述 100个标记试剂二氧化硅颗粒的合计投影面积求出标记试剂二氧化硅颗粒的占有面积，用 该合计占有面积除以选择出的标记试剂二氧化硅颗粒的个数（100个），求出与所得到的值 相当的圆的直径的平均值（平均圆等效直径）。
[0133] 需要说明的是，上述平均粒径与作为包含一次颗粒凝集而成的二次颗粒的概念的 后述"利用动态光散射法得到的粒度"不同，其是仅由一次颗粒构成的颗粒的平均粒径。
[0134] 在本说明书中，上述"利用动态光散射法得到的粒度"是利用动态光散射法测定 的、与上述平均粒径不同、不仅包含一次颗粒、还包含一次颗粒凝集而成的二次颗粒的概 念，其成为评价上述复合颗粒的分散稳定性的指标。
[0135] 作为利用动态光散射法得到的粒度的测定装置，可以举出Zetasizer Nano (商品 名；Malvern公司制造）。该方法为如下方法：测定由微粒等光散射体引起的光散射强度的 时间变动，由其自相关函数计算出光散射体的布朗运动速度，由该结果导出光散射体的粒 度分布。
[0136] 荧光二氧化硅颗粒优选以粒状物质的形式单分散，粒度分布的变异系数即所谓的 CV值没有特别限制，优选为10 %以下、更优选为8 %以下。
[0137] ?乳胶颗粒
[0138] 在本发明中，出于其效果显著的原因，优选应用上述的二氧化硅微粒，但也可以 代替上述二氧化硅微粒、或者在上述二氧化硅微粒的基础上使用乳胶颗粒来作为标记颗 粒。作为乳胶颗粒，可以举出由聚苯乙烯、苯乙烯-磺酸（盐）共聚物、苯乙烯-甲基丙 烯酸共聚物、丙烯腈-丁二烯-磺酸共聚物、氯乙烯-丙烯酸酯共聚物、乙酸乙烯酯-丙 烯酸酯共聚物等构成的合成高分子颗粒。另外，作为乳胶颗粒的着色方法，可以利用日 本特开2000-178309、日本特开平10-48215号、日本特开平8-269207号、日本特开平 6-306108号等中记载的方法来进行。需要说明的是，荧光物质（标记物质）在这种颗粒上 的固定化可以适当利用常规方法来进行。例如可以参照日本特表2005-534907、日本特开 2010-156642、日本特开2010-156640等。作为商品化的荧光乳胶颗粒，已知有Luminex公 司的商品名 xMAP(注册商标）Multi-Analyte COOH Microspheres, (http://hitachisoft. jp/products/lifescience/lineup/luminex/about/bead. htmlhttp://hitachisoft. jp/ products/lifescience/pdf/the_luminex_labmap_system. pdf)〇
[0139] ?半导体颗粒等
[0140] 标记剂也可以应用半导体颗粒。半导体颗粒的材质没有特别限制，优选例示ZnO、 ZnS、ZnSe、ZnTe、CdO、CdS、CdSe、CdTe、HgS、HgSe、HgTe、InP、InAs、GaN、GaP、GaAs、Ti0 2、 W03、PbS或PbSe。例如可以使用日本专利第3897285号公报等中记载的半导体微粒。上述 半导体微粒可以通过硫醇化合物的-SH基与半导体微粒表面的5、0、56、1'6、？3 8、1^等原子 置换来进行表面修饰。作为上述金颗粒、上述金属微粒，可以使用日本特开2003-26638说 明书等中记载的金胶体颗粒和金属胶体颗粒。作为上述金属胶体颗粒的具体例，可以举出 铂、铜、氧化铁等金属胶体颗粒。作为上述无机晶体，可以举出氧化铁（III) (Fe203)、氧化银 ⑴（Ag20)、氧化锡（IV) (Sn02)、二氧化钛（IV) (Ti02)、铟锡氧化物（ΙΤ0)等。例如可以使用 日本特开2005-76064公报中记载的无机晶体。
[0141] ?吸光系数
[0142] 在标记剂具有吸光微粒的情况下，优选为吸收可见光而着色从而能够辨认的标 记剂。优选为其摩尔吸光系数ε为5X106M km1以上的颗粒，更优选摩尔吸光系数ε为 SXloVcmLlXK^Vcm1。
[0143] 此处，摩尔吸光系数ε可由下述朗伯-比尔（Lambert-Beer)公式算出。
[0144] A = Log10(I0/I) = ε bp = asbp'
[0145] [A :吸光度、I :透射光的强度、10 :入射光的强度、ε :摩尔吸光系数（M km 3、b : 光程（cm)、p :标记颗粒（包括着色颗粒和荧光微粒的混合分散液）的浓度（M(mol/l))、as:比吸光度、P' ：标记颗粒（包括着色颗粒和荧光微粒的混合分散液）的浓度（g/1)]
[0146] 上述浓度p'（g/1)是从一定量（例如1ml)的标记颗粒分散液中仅回收标记颗粒、 确定其干燥得到的质量而得到的值。另一方面，上述浓度P(mol/l)是从TEM照片求出标 记颗粒的尺寸，确定一个颗粒的体积，由颗粒的密度（例如二氧化硅颗粒的情况下为2. 3g/ cm3)确定一个颗粒的质量，从一定量（例如lml)的标记颗粒分散液中仅回收标记颗粒，由 干燥得到的标记颗粒的质量确定摩尔数而得到的值。在本发明中，"标记颗粒的摩尔吸光系 数ε "是指通过对标记颗粒分散液测定吸光度并应用于上述朗伯-比尔公式而得到的、上 述分散液中的标记颗粒的摩尔吸光系数ε。标记颗粒的吸光度、吸光光谱和ε可以使用任 意的吸光光度计或酶标仪以水分散液、乙醇分散液、Ν，Ν-二甲基甲酰胺分散液等分散液的 形式进行测定。
[0147] 吸光微粒的表面修饰或结合性物质的导入的实施方式与上述荧光微粒相同。
[0148] [检测方法]
[0149] 免疫层析法通常为使用利用毛细管现象等进行移动的标记试剂二氧化硅微粒 (标记体）2、3、使上述颗粒在判定部集聚来进行判定的检测方法。例如优选利用免疫层析 法或微通道芯片等来进行。此时，标记试剂二氧化硅微粒可以适合用作侧流用标记体。此 外，在本发明的目标物质的检测方法中，优选利用侧流型的免疫层析法进行目标物质的检 测。
[0150] 作为上述试条的制作法，可以通过如下方法制作：按照样品垫、结合垫、抗体固定 化膜、吸收垫的排列顺序，并且为了容易在各部件间产生毛管现象，使这些各部件的两端与 相邻的部件重叠1_~5mm左右来进行粘贴（优选粘贴在衬板上）。
[0151] 作为上述免疫层析用荧光检测系统，优选至少包括：（1)由样品垫、浸渗有含有荧 光物质的标记试剂二氧化娃微粒或侧流用标记试剂二氧化娃微粒的部件（结合垫）、抗体 固定化膜以及吸收垫构成的试条、以及（2)激发光源。
[0152] 在上述荧光检测系统中，从通过目视等来检测上述