标记试剂二氧化硅微粒（标记 体）所发出的荧光的观点考虑，优选上述激发光源发出波长200nm~400nm的激发光。作 为上述激发光源，可以举出汞灯、卤素灯和氙灯。在本发明中，特别优选使用由激光二极管 或发光二极管照射的激发光。
[0153] 另外，上述荧光检测系统更优选具备用于仅使来自上述激发光源的特定波长的光 透过的滤光器；此外，从通过目视等仅检测荧光的观点考虑，更优选具备除去上述激发光而 仅使荧光透过的滤光器。
[0154] 上述荧光检测系统特别优选具备接收上述荧光的光电倍增管或CCD检测器，由 此，通过目视无法确认的强度或波长的荧光也能够进行检测，进而能够测定其荧光强度，因 此还能够进行目标物质的定量，能够进行高灵敏度的检测和定量。
[0155] 上述激发光的波长优选为300nm~700nm。上述焚光的波长优选为能够通过目视 识别的波长，优选为350nm~800nm。另外，出于在通过目视观察时可得到高可见度的原因， 该波长更优选为530nm~580nm。此时，为了有效地生成上述波段的荧光，激发光的波长优 选为 500nm ~550nm〇
[0156] 本发明的优选实施方式的试条中，从即使是手法不熟练的普通需求者也容易操作 以及进行P0CT(即时检测，Point Of Care Testing)的观点出发，优选利用塑料材料等对通 过目视观察试条的检测线的观察窗施以外壳（外罩）。例如可以举出日本特开2000-356638 等中记载的外壳等。
[0157] 此处，所谓P0CT是指用于在尽可能接近患者的场所进行诊断的检查。以往，所采 取的血液、尿、患部组织等样本被送至医院的中央检查室或专门的检查中心来出具数据，因 而至诊断确定为止需要花费时间（例如1天以上）。利用P0CT，能够基于瞬时提供的检查 信息迅速且确切地进行治疗，因而可实现医院中的紧急检查或手术中的检查，因此，近来在 医疗现场的需求高。
[0158]【实施例】
[0159] 下面基于实施例进一步详细地说明本发明。本发明并不受这些实施例的任何限 定。
[0160] (二氧化硅微粒的制备）
[0161] 将5_(以及-6)-羧基四甲基若丹明-琥珀酰亚胺基酯（商品名、emp Biotech GmbH公司制造）2.9mg溶解在lmL的二甲基甲酰胺（DMF)中。向其中加入1.3yL的APS， 在室温（24°C )进行1小时的反应。
[0162] 将所得到的反应液600 μ L与乙醇140mL、四乙氧基硅烷（TE0S) 6. 5mL、蒸馏水35mL 和28质量％氨水15mL混合，在室温进行24小时的反应。
[0163] 将反应液在15000 X g的重力加速度下进行30分钟离心分离，除去上清。在沉淀出 的二氧化硅颗粒中加入蒸馏水4mL，使颗粒分散，再次在15000Xg的重力加速度下进行20 分钟离心分离。将本清洗操作再重复2次，将二氧化硅微粒分散液所含有的未反应的TEOS、 氨等除去，得到平均粒径为200nm的二氧化硅微粒1. 71g(收率为约97% )。
[0164] 〈比较例1>
[0165] 在2N的氢氧化钠中追加中和量的盐酸，向所得到的含有盐成分的水溶液中以含 有0. 02质量％的方式添加上述中制作的二氧化硅微粒，制备展开液试样。使用其进行展开 液的移动试验。其结果为图5(b)。此时的SEM图像示于图7。可知标记剂（二氧化硅微 粒）局部不均匀地存在，固定在膜（长度25mm、商品名：Hi-Flow Plusl20膜、MILLIP0RE公 司制造）的纤维表面。图6是使纵轴为颗粒的集聚比例来表示图5 (a)和图5(b)的结果的 图。
[0166] 〈实施例1>
[0167] 向上述比较例的展开液中以达到1质量％的方式添加乙二胺四乙酸（EDTA)。与比 较例1同样地对其进行展开液的移动试验。图5(a)示出其结果。
[0168] 将图5(a)和图5(b)进行比较可知，在比较例中，在到达相当于试验区域（nt)的位 置（8000 μ m附近）之前，标记剂发生滞留；而在本发明中，样本物质确实地到达了试验区域 (nt)的位置并被捕捉。由该结果可知，根据本发明，标记剂的凝集或在膜上的局部固定受到 了抑制，实现了其适当的流动性。
[0169] 〈实施例2>
[0170] 作为上述脱盐剂，使用EGTA和DTPA来代替EDTA，进行同样的展开液的移动试验。 其结果，观察到与m)TA同样良好的凝集抑制效果。
[0171] 〈参考例〉
[0172] 图8中示出了在高浓度（6质量％ )的NaCl盐中添加二氧化硅颗粒并测定其粒度 分布的经时变化的结果。图8的各曲线的数值表示从试验开始起的经过时间（秒）。根据 图8 (a)，在添加时平均粒径为400nm左右的颗粒在30分钟后增大至600nm，在1小时后增 大至800nm。另一方面，若添加EDTA，则在添加时平均粒径为500nm，即使时间推移，也未观 察到大的变化（图8(b))。由该结果可知，通过添加EDTA，能够维持颗粒的表面电荷。认为 这是由于，颗粒未发生凝集，颗粒的集合体的粒径（尺寸）未发生变化。需要说明的是，虽 然在0分钟时本发明的粒径大，但400nm与500nm的差异并不显著，且重要的是即使时间推 移也未发生凝集。
[0173] 图9、图10为示出使用另一实施例中的经脱盐处理（利用连结材料将脱盐剂固 定化）的垫时的状态的显微镜照片。没有大的凝集块，颗粒斑点状地存在，在每1视野 (24 μ m □)观察到6个颗粒。由该结果也可知，在本发明的实施例中，标记颗粒的堵塞得到 大幅改善。
[0174]【符号的说明】
[0175] 1目标物质（被检物质）
[0176] 2标记体
[0177] 2a标记颗粒
[0178] 2b试验用结合性物质
[0179] 3标记体
[0180] 3a标记颗粒
[0181] 3b参照用结合性物质
[0182] 4试验用捕捉性物质
[0183] 5参照用捕捉性物质
[0184] 6 壳体
[0185] 61检测开口部
[0186] 62样本导入开口部
[0187] 6a壳体上部
[0188] 6b壳体下部
[0189] 8a凝集抑制垫
[0190] 8b结合垫
[0191] 8c 膜
[0192] 8d吸收垫
[0193] 8g样品垫
[0194] 9脱盐剂
[0195] 10 试条
[0196] 100长条试验体
[0197] 参照区域
[0198] nt试验区域
[0199] L侧流方向
[0200] S 样本
[0201] 将本发明与其实施方式一并进行了说明，但只要申请人未特别指定，则说明中的 任何细节均不意图对本发明进行限定，应当在不违反所附的权利要求书中所示的发明的精 神和范围的情况下宽泛地进行解释。
[0202] 本申请要求基于2013年7月25日在日本提交的日本特愿2013-154763的优先权， 在此参照并引入其内容作为本说明书的记载的一部分。
【主权项】
1. 一种免疫层析用试验片，其为具备凝集抑制垫、结合垫以及膜的免疫层析用试验片， 所述膜具有捕捉目标物质的试验区域，所述凝集抑制垫包含脱盐剂，所述结合垫包含标记 剂。2. 如权利要求1所述的免疫层析用试验片，其中，所述脱盐剂为螯合剂或适体。3. 如权利要求2所述的免疫层析用试验片，其中，所述螯合剂为氨基羧酸系螯合剂。4. 如权利要求1~3中任一项所述的免疫层析用试验片，其中，所述标记剂为荧光二氧 化硅微粒。5. 如权利要求1~4中任一项所述的免疫层析用试验片，其中，在所述凝集抑制垫中导 入有连结分子，经由该连结分子导入有脱盐剂。6. -种免疫层析用展开液，其包含碱或酸、目标物质以及脱盐剂。7. 如权利要求6所述的免疫层析用展开液，其中，所述脱盐剂为螯合剂或适体。8. 如权利要求7所述的免疫层析用展开液，其中，所述螯合剂为氨基羧酸系螯合剂。9. 如权利要求6~8中任一项所述的免疫层析用展开液，其经由下述步骤进行了处理： 对样本液赋予碱或酸的步骤、进行加热的步骤、以及利用碱或酸进行中和的步骤。10. -种免疫层析法，其为使用权利要求1~5中任一项所述的试验片进行的免疫层析 法，对所述试验片赋予包含碱或酸以及目标物质的展开液，进行该样本液中的目标物质的 检测。11. 一种免疫层析法，对具备具有捕捉目标物质的试验区域的膜的免疫层析用试验片 赋予权利要求6~9中任一项所述的包含脱盐剂的展开液，进行该目标物质的检测。12. -种免疫层析法，其为赋予包含碱或酸以及目标物质的展开液并使其通过膜、将目 标物质捕捉到膜的试验区域来进行检查的免疫层析法，通过使用含有脱盐剂的脱盐垫、或 者对样本液进行脱盐处理来进行展开液的脱盐，防止目标物质的凝集。
【专利摘要】一种免疫层析用试验片，其为具备凝集抑制垫、结合垫以及膜的免疫层析用试验片，所述膜具有捕捉目标物质的试验区域，所述凝集抑制垫包含脱盐剂，所述结合垫包含标记剂。
【IPC分类】G01N33/543, G01N33/552
【公开号】CN105358981
【申请号】CN201480038523
【发明人】福岛将行, 大久保典雄, 三好一富, 关根贵成
【申请人】古河电气工业株式会社
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2014年7月25日
【公告号】US20160209410, WO2015012384A1