虎驹乙肝制剂质量控制方法和制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种治疗和预防乙型病毒性肝炎的中药组合物检测方法，属于中药现 代化领域。
【背景技术】
[0002] 治疗和预防乙型病毒性肝炎的中药组合物虎驹乙肝制剂，已在CN1299725C(中国 专利号21^200410065020.3)中公开。其中公开的一种优选处方如下：虎杖2.66份、蚂蚁1.15 份、板蓝根1.33份、茵陈1份、黄芪0.67份、枸杞子0.53份、丹参0.67份、三七0.07份、大枣0.2 份、五味子0.53份、柴胡0.53份。
[0003] 作为临床使用的药品，安全、有效、可控是其三大核要素。尽管由上述处方制成的 制剂已在临床使用多年并取得了优良的临床疗效，并且药品安全性也未见不良记载。然而， 随着中药现代化进程，使用优异的质量控制手段来对药品进行评价、监控，是生产厂商以及 药品监管机构迫切期待的。
[0004] 虎驹乙肝制剂具有疏肝健脾，利湿清热，活血化瘀之功效。用于慢性乙型肝炎属肝 郁脾虚兼湿热瘀滞证，症见:胁肋胀满疼痛，脘脾腹胀，胃纳不佳，四肢倦怠，小便色黄等。
[0005] 本发明虎驹乙肝制剂具有组方大。令人遗憾的是，现有的虎驹乙肝制剂，包括其片 剂和胶囊剂，对其进行质量监控的方法却多用比较低级的检测手段，例如薄层色谱法等灵 敏性相对较低的方法，这类方法难以适应本发明这样的大组方中药制剂的质量监控。
[0006] 因此，开发灵敏准确的适合虎驹乙肝制剂的质量监控方法，仍是本领域技术人员 迫切期待的。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种灵敏准确的适合虎驹乙肝制剂的质量监控方法。
[0008] 本发明是照如下方式实现的：
[0009] 在本发明第一方面，提供的是一种虎驹乙肝制剂质量控制的方法，所述虎驹乙肝 制剂由以下11味中药以及任选的药用辅料制成:虎杖、蚂蚁、柴胡、茵陈、板蓝根、枸杞子、黄 芪、三七、丹参、五味子、大枣，该方法包括使用高效液相色谱法A对所述虎驹乙肝制剂中的 药材三七和/或黄芪或者它们指标成分进行鉴别的步骤。
[0010] 根据本发明的方法，其中所述虎驹乙肝制剂是片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0011] 根据本发明的方法，其中制备所述虎驹乙肝制剂的药材比例为:虎杖665重量份、 蚂蚁287.5重量份、柴胡132.5重量份、茵陈250重量份、板蓝根332.5重量份、枸杞子132.5重 量份、黄芪167.5重量份、三七17.5重量份、丹参167.5重量份、五味子132.5重量份、大枣50 重量份。
[0012] 根据本发明的方法，其中所述三七和/或黄芪的指标成分是选自下列的一种或多 种:三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl、黄芪甲苷。
[0013] 根据本发明的方法，其中对药材三七和/或黄芪或者它们指标成分进行鉴别所用 的高效液相色谱法A包括如下步骤：
[0014] (1)取虎驹乙肝制剂适量，研细，取2g，加甲醇40ml，超声处理（例如，功率400~ 600W，频率35~45kHz ;例如，功率500W，频率40kHz)30~50分钟（例如40分钟）（本领域技术 人员公知，超声处理是使得制剂中的指标成分溶解于溶剂中，因此其超声处理的强度也不 需要严格限定），放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液用水饱和的正丁醇 振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用浓氨试液洗涤两次，每次20ml，取正丁醇液水浴 蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
[0015] (2)另取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Rb 1对照品、黄芪甲苷 对照品，加甲醇制成每lml各含70yg的混合溶液，作为对照品溶液；
[0016] (3)照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录36页"附录VID高效液相色谱法" 所载方法试验，或者照《中华人民共和国药典》2015年版四部第59页"0512高效液相色谱法" 所载方法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按 下表中的规定进行梯度洗脱，流速为lml/min，柱温为35°C，蒸发光散射检测器检测； L υυ 〇」 、4 J刀、力IJ不苜s' TO |工迎鬥竹梢· ?义食丄
丄，仕yV ?义4·日 '巴imx，1C*求 '巴1首团，PL权?六ΤΑ 品溶液色谱图和对照品溶液色谱图。
[0019] 根据本发明的方法，其中所述高效液相色谱法Α中，比较供试品溶液色谱图和对照 品溶液色谱图，供试品色谱中如果分别呈现与对应对照品保留时间相同的色谱峰，则所述 虎驹乙肝制剂中的药材三七和/或黄芪或者它们指标成分鉴别试验合格，否则不合格。
[0020] 根据本发明的方法，其还进一步包括使用高效液相色谱法B对所述虎驹乙肝制剂 中的药材虎杖、丹参、五味子、和/或茵陈或者它们指标成分进行鉴别的步骤。
[0021] 根据本发明的方法，其中所述药材虎杖、丹参、五味子、和/或茵陈的指标成分是选 自下列的一种或多种:虎杖苷、丹酚酸B、五味子醇甲、五味子甲素、和绿原酸。
[0022] 根据本发明的方法，其中对药材虎杖、丹参、五味子、和/或茵陈或者它们指标成分 进行鉴别所用的高效液相色谱法B包括如下步骤：
[0023] (1)取虎驹乙肝制剂适量，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀 乙醇100ml，密塞，称定称重，加热回流1小时，放冷，再称定称重，加稀乙醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
[0024] (2)取虎杖苷对照品、丹酚酸B对照品、五味子醇甲对照品、五味子甲素对照品和绿 原酸对照品，加甲醇制成每lml各含80yg的混合溶液，作为对照品溶液；
[0025] (3)照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录36页"附录VID高效液相色谱法"
所载方法试验，或者照《中华人民共和国药典》2015年版四部第59页"0512高效液相色谱法" 所载方法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1 %磷酸溶液为 流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟0.8ml;测定波长为215nm;柱温为30 °C；
[0026]
[0027]
[0028] (4)分别精密吸取上述两种溶液各15μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，比较供试 品溶液色谱图和对照品溶液色谱图。
[0029] 根据本发明的方法，其中所述高效液相色谱法Β中，比较供试品溶液色谱图和对照 品溶液色谱图，供试品色谱中如果分别呈现与对应对照品保留时间相同的色谱峰，则所述 虎驹乙肝制剂中的药材虎杖、丹参、五味子、和/或茵陈或者它们指标成分鉴别试验合格，否 则不合格。
[0030] 根据本发明的方法，其还进一步包括使用高效液相色谱法C对所述虎驹乙肝制剂 进行含量测定，该含量测定针对制剂中使用到的药材虎杖和五味子二者进行。
[0031 ]本发明的高效液相色谱法C包括以下步骤：
[0032] (1)照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录36页"附录VID高效液相色谱法" 所载方法测定，或者照《中华人民共和国药典》2015年版四部第59页"0512高效液相色谱法" 所载方法测定；
[0033] (2)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流 动相Α，以0.1 %磷酸溶液为流动相Β，按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟0.8ml; 柱温为30°C;检测波长为215nm;理论塔板数按虎杖苷计算不得低于3000;
L UU 〈；j ;对照1?裕淞的市u食：甘別耿立μ木卞脬干对照茆和虎仪甘对照茆迈重，棺岔孙 定，加甲醇制成每lml含五味子醇甲15yg、虎杖苷160yg的混合对照品溶液，即得；
[0036] (4)供试品溶液的制备:取虎驹乙肝制剂，确定每粒制剂的平均重量，取适量(如果 制剂是胶囊剂则是指胶囊内装的颗粒或粉末，亦称内容物），研细;取约2g，精密称定，置具 塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇100ml，密塞，称定称重，加热回流1小时，放冷，再称定称重，加 稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0037] (5)测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ1或10μ1，注入液相色谱 仪，测定，计算每粒制剂中包含的虎杖以虎杖苷(C20H2208)计的量，和/或包含的五味子以 五味子醇甲（C24H3207)计的量。
[0038] 众所周知的，对于含量测定，是需要精确称取供试品的，这一点与在鉴别试验时不 同。在上述含量测定的步骤(4)中，"确定每粒制剂的平均重量"，如果所述制剂是片剂，则