同时检测蔬菜/水果中杀线威和杀线威肟残留量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种农药及其代谢物残留量的检测方法，具体涉及一种同时检测蔬 菜、水果中杀线威及代谢物杀线威肟残留量的检测方法，属于农药残留量的测定技术领域。
【背景技术】
[0002] 杀线威是一种氨基甲酸酯类杀线虫剂、杀螨剂和杀虫剂，其通用名0XAMYL，化学名 N，N_二甲基-2-甲基氨基甲酰基氧代亚氨-2-甲硫基乙酰胺。杀虫机理是通过抑制乙酰胆碱 酯酶活性达到防治的目的。该药能防治蓟马、蚜虫、马铃薯瓢虫、螨等，广泛应用于柑桔、棉 花、大豆、烟草、果树、蔬菜和某些观赏作物。该药是广谱性的杀线虫剂，可叶面处理亦可土 壤处理，可在植物体内吸收传导，也可保留在土壤中对线虫起作用，可同时杀灭地上和地下 害虫。同时，该药还可与多菌灵、克菌丹等多种杀菌剂混用，防治某些病害，具有杀虫谱广、 杀伤力强、见效期快、不杀伤天敌等特点，因此该品种在国内外得到广泛应用。
[0003] 杀线威为剧毒农药，有神经毒性，能抑制脑、红细胞和血浆中的胆碱酯酶活性，由 于使用广泛，杀线威通过环境进入人体的几率大，对人的身体健康影响较大。杀线威的检测 方法主要有液相色谱-紫外检测器法、液相色谱-质谱/质谱法、气液色谱法-火焰光度检测 器法等。NY/T1453-2007《蔬菜及水果中多菌灵等16种农药残留测定液相色谱-质谱-质谱联 用法》采用乙酸乙酯提取，硅胶小柱净化，液相色谱-质谱/质谱联用仪检测的方法。SN/ T0134-2010《进出口食品中杀线威等12种氨基甲酸酯类农药残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》采用乙腈提取，乙腈饱和的正己烷液-液分配净化，氟罗里硅土和活性炭固相 小柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测的方法。这两种标准只有检测杀线威的方法，未提到杀 线威代谢物杀线威肟的检测方法。而GB2763-2014《食品安全国家标准食品中农药最大残留 限量》中规定杀线威的残留物为杀线威和杀线威肟之和，以杀线威表示。因此，建立一种简 便、快速、准确的蔬菜和水果中杀线威及其代谢物杀线威肟残留量同时检测的方法非常必 要。
【发明内容】
[0004] 针对上述现有技术，本发明提供了一种同时检测蔬菜、水果中杀线威及其代谢物 杀线威肟残留量的方法，试验结果表明该方法操作简便、快速、分离效果好，准确度和精密 度均能达到定量分析的要求，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、准确等优点。
[0005] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0006] -种同时检测蔬菜/水果中杀线威和杀线威肟残留量的方法，包括以下步骤：
[0007] (1)提取:取待检测的蔬菜/水果样品，切成小段或小块，置于离心管中，加入乙腈 匀浆，加入NaCl，再次匀浆，离心；
[0008] 所述乙腈的加入比例为:每1克蔬菜/水果样品加入lml的乙腈；
[0009] 所述NaCl的加入比例为:每1克蔬菜/水果样品加入0.5克的NaCl;
[0010] 当蔬菜/水果样品为脱水蔬菜/水果时，切成小段或小块后，加入适量水充分浸润 (浸润5~30分钟），然后再加入乙腈进行匀浆；
[0011 ] 所述离心的参数为3800r/min离心5min;
[0012] (2)净化:上述离心后，取上层乙腈相，置于装有基质分散固相萃取剂的离心管中， 混匀，离心、，取上清液，氮气吹干，流动相定容，过0.22μπι有机系滤膜，得样品液；
[0013] 所述基质分散固相萃取剂由乙二胺-Ν-丙基硅烷（PSA)、十八烷基硅烷键合相 (C18)和石墨化炭黑(GCB)组成，PSA、C18和GCB三者的用量比例为100mg :50mg:10mg;每lml 乙腈相对应的PSA、C18和GCB三者的用量分别为100mg、50mg、10mg;
[0014] 所述离心的参数为:5000r/min离心5min;
[0015] (3)测定和结果计算:进行定性或/和定量测定；
[0016] 定性测定:检测样品中目标化合物(杀线威和杀线威肟）的母离子和子离子对，若 其离子色谱峰保留时间与标准工作液一致;样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度与 浓度相当的空白基质标准液的离子相对丰度偏差不超过30 %时，则判断该样品中存在杀线 威和杀线威肟;若上述两个条件不能同时满足，则判断样品中不含杀线威和杀线威肟；
[0017] 所述标准工作液是指杀线威或杀线威肟的标准工作液；
[0018] 所述空白基质标准液是指不含杀线威或杀线威肟的样品经步骤（1)(2)处理后得 到的样品液；
[0019] 定量测定:采用液相色谱-质谱/质谱联用仪对样品液进行检测，测得样品液中杀 线威或杀线威肟的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中杀线威或杀线威肟含量，然后 根据样品液所代表样品的质量计算得到待检测的蔬菜/水果样品中杀线威或杀线威肟残留 量。
[0020] 优选的，所述液相色谱-质谱/质谱联用仪为Agilent 126〇-642〇-Agilent，USA，色 谱柱为Eclipse plus C18,柱长 150mm，内径4.6mm，粒径5μηι〇
[0021] 所述液相色谱和质谱条件为:流速:0.4mL/min;柱温:35°C ;进样量:5yL;离子源： 电喷雾离子源ESI;扫描方式:正离子源;毛细管电压:4KV(_);脱溶剂温度:300°C;脱溶剂气 流量：10L/min;雾化器压力：35psi;所用流动相为0.1% (体积百分比）甲酸水溶液-甲醇，洗 脱方式为梯度洗脱，具体洗脱方式见表1。
[0022] 表 1 Γηη"?
LUUM」 所还求线風恆测万瓦艿多里反吆监jmMKM)，求线風肟恆测万瓦艿选拝呙于；测 (SIM)，具体如表2所示。
[0025]表 2
[0026]
[0027]所述标准曲线是通过以下方法得到的:配制系列浓度的杀线威标准工作液和杀线 威肟标准工作液，在与样品液的检测条件相同的条件下进行HPLC-MS/MS测定，以标准工作 液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线。
[0028]所述系列浓度的杀线威标准工作液的浓度依次为0.01、0.05、0.1、0.5、5yg/mL，由 杀线威标准品配置而成。
[0029]所述系列浓度的杀线威肟标准工作液的浓度依次为0.01、0.05、0.1、0.5、5yg/mL， 由杀线威肟标准品配置而成。
[0030] 现有技术中，杀线威肟在液相色谱-质谱/质谱仪上只能扫描到母离子185.1，不能 再进一步打碎优化。为解决该问题，本方法选择了离子监测(sn〇的方式对杀线威肟进行检 测，多重反应监测(MRM)的方式对杀线威进行检测。但在做果蔬样品时，样品中的杂质峰对 杀线威Η亏的定性、定量产生了干扰，为克服该难题，clipse plus C18柱采用长150mm、内径 4.6mm、粒径5μπι的柱子，流动相梯度洗脱的方法，样品中的干扰峰很好的与目标峰分离，实 现了采用液相色谱-质谱/质谱联用仪对果蔬样品中杀线威和杀线威肟同时检测的目的。
[0031] 本发明同时检测蔬菜/水果中杀线威和杀线威肟残留量的方法，优点为:本发明利 用分散固相萃取技术，建立了简便、快速的样品前处理方法，将此前处理方法结合HPLC-MS/ MS应用于蔬菜/水果中杀线威及杀线威肟残留量的同时检测，杀线威和杀线威肟的平均回 收率分别为92.0%~96.8%和90.5~95.1%，平均相对标准偏差（RSD)分别为1.0%~ 4.3%和1.7~3.1%，检出限分别为0.00211^/1^和0.00111^/1^，具有操作简便、快速、准确、 灵敏度高及重复性好的优点。本发明的方法能满足我国、美国、欧盟对杀线威在蔬菜/水果 中安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技 术支撑。
【附图说明】
[0032]图1:50ng/mL杀线威和杀线威辣椒基质标液的色谱图。
[0033] 图2:不含杀线威和杀线威肟的辣椒空白样品的色谱图。
[0034] 图3:杀线威辣椒基质标准工作曲线不意图。
[0035] 图4:杀线威辣椒基质标准工作曲线不意图。