一种基于电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及分析检测领域，特别涉及一种基于电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法。
【背景技术】
[0002]人参皂苷，属于一种固醇类天然产物，是人参属药材中主要的活性成分。研究表明，人参皂苷能够影响和改变多种肿瘤细胞的增殖，分化和凋亡，具有多重的生物效能。人参皂苷的成分复杂，有很多同分异构单体存在。不同类型的人参皂苷在生物活性以及功效方面有较大的差别，人参皂苷单体的类型也可以做为区分不同的人参属药材的标志性化合物。如Rf存在于人参中，而其同分异构体拟人参皂苷Fll存在于西洋参中，其含量差别可以做为区分人参和西洋参的生物标志物。人参皂苷的结构确认比较复杂，到目前为止，据报道且能够确定化学式的人参皂苷大约有100余种。市场上的各种人参以及其相应的衍生产品非常复杂，开发人参皂苷的结构分析方法对于市场上人参类相关产品的种类鉴定，真假判断，保障人参产品的安全使用，具有非常重要的意义。
[0003]在人参皂苷结构确认的方法中，质谱方法起着非常重要的作用。人参皂苷可以通过液相色谱分离后，进行质谱分析，以便进一步的结构确认。对于不同的人参皂苷，由于其在液相色谱中保留时间不同，分子量不同，可以通过保留时间和母离子的质荷比进行有效的区分。但是人参皂苷存在诸多的同分异构单体，由于其结构相似，在液相色谱中保留时间也非常接近，难以实现完全的分离，而同分异构体，在离子化后形成的母离子的质荷比则完全一样(如Rf和Fll)，因此不能准确地判断人参皂苷单体的类型。利用串联质谱技术可以为人参皂苷的结构确认提供进一步的信息。碰撞裂解是串联质谱中一种常用的离子活化方法。但是，由于碰撞裂解属于“慢热”型离子活化技术，通常会首先导致整个化合物结构中最弱键首先会断裂，给出的结构信息相对较少，结构接近的同分异构的碰撞裂解质谱图往往非常接近，难以保证人参皂苷异构单体的准确区分。
【发明内容】
[0004]本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种基于电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体的识别方法。本发明利用高分辨离子回旋共振质谱仪结合电子诱导裂解活化技术，发明了一种人参皂苷同分异构体的特异性碎片离子结构识别技术，并应用于人参皂苷异构单体的区分。
[0005]基于傅立叶变化离子回旋共振质谱仪的电子激发的裂解技术，包括电子捕获裂解，电子转移裂解和电子诱导裂解等技术对于整个母离子体系引入电子。通过不同能量的电子和母离子的相互作用，可以产生多种类型的碎片离子。如电子诱导裂解中，对于气相体系引入>10eV的自由电子，电子和母离子作用会产生电荷诱导型裂解碎片和自由诱导型裂解碎片，并且可以应用于单电荷/多电荷体系和正/负母离子体系。初步的研究结果表明，对于人参皂苷异构单体而言，电子诱导裂解能够比碰撞裂解产生更多的结构信息碎片离子。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
[0007]傅立叶变换离子回旋共振质谱仪在人参皂苷同分异构单体识别中的应用。
[0008]优选的，所述人参皂苷同分异构单体为Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0009]优选的，识别过程中，通过电子诱导裂解产生电荷诱导型裂解碎片和自由诱导型裂解碎片。
[0010]更优选的，所述电子诱导裂解的条件为:偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V；电子福射时间:正尚子模式下为0.2s，在负尚子模式下，电子的福射时间设置为5s;空白谱图偏压设置为0V。
[0011]本发明还提供了一种基于傅立叶变换离子回旋共振电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法，包括如下步骤:
[0012]样品前处理；
[0013]离子化；
[0014]电子诱导裂解，或电子诱导裂解和碰撞裂解；
[0015]将不同人参皂苷单体的电子诱导裂解谱图进行比对;或将同一人参皂苷单体的电子诱导裂解图谱与其相应的碰撞裂解图谱进行比对，进而识别和区分人参皂苷同分异构单体。
[0016]优选的，所述人参皂苷同分异构单体为Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0017]优选的，所述离子化过程中，采用电喷雾离子化，流速设定为30uL/hr，分别采用正负两种模式进行离子化，毛细管电压设为3kV，传输毛细管的温度为220°C;
[0018]优选的，所述离子化过程中，采用前端四极杆进行母离子选择，质量宽度设为5m/z，离子聚集时间设置为1-2s。
[0019]优选的，所述电子诱导裂解过程中，偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V;电子福射时间:正尚子模式下为0.2s，在负尚子模式下，电子的福射时间设置为5s;空白谱图偏压设置为0V。
[0020]优选的，所述电子诱导裂解和碰撞裂解处理过程中:碰撞裂解采用的碰撞能为10-25V;所述电子诱导裂解的条件为:偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V；电子福射时间:正尚子模式下为0.2s，在负尚子模式下，电子的福射时间设置为5s ；空白谱图偏压设置为OV0
[0021 ]更优选的，具体步骤如下:
[0022]—种基于傅立叶变换离子回旋共振电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法，步骤如下:
[0023](I)样品前处理:称取适量的人参皂苷异构单体(如Rgl和Rf以及Re和Rb2)，用甲醇(农残基)和水(去离子水，>18.2兆欧)的配置成浓度为0.5uM的溶液。
[0024](2)质谱条件:采用傅立叶变化离子回旋共振质谱仪。利用电喷雾，流速设定为30uL/hr的，分别采用正负两种模式进行离子化，毛细管电压设为3kV，传输毛细管的温度为220°C。采用前端四极杆进行母离子选择，质量宽度设为5m/z，离子聚集时间设置为l-2s。采用宽带模式进行数据采集，质量范围设为50-1000。
[0025](3)电子诱导裂解和碰撞裂解:采用加热空心阴极产生电子，偏压设置为-1OV?-15V之间，提取极电压设置为11?14V。电子辐射时间:正离子模式下设置为0.2s，为了增加电子与负离子的相互作用，在负离子模式下，电子的辐射时间设置为5s。空白谱图偏压设置为0V，保证无自由辐射电子，其余参数不变。碰撞裂解时，采用碰撞能设为10-25V。
[0026](4)谱图解析:碎片离子确认采用精确质量数测量，母离子质荷比内标法校准质量数，精确度设定为5ppm。分别对于碰撞裂解和电子诱导裂解谱图中碎片离子的类型和丰度进行比较，确定电子诱导裂解的碎片离子的归属。
[0027]本发明还提供了一种基于傅立叶变换离子回旋共振电子诱导裂解质谱筛选人参皂苷同分异构单体特异性碎片离子的方法，其特征在于，
[0028]样品前处理；
[0029]离子化；
[°03°]电子诱导裂解和碰撞裂解；
[0031]将同一人参皂苷单体的电子诱导裂解图谱与其相应的碰撞裂解图谱进行比对，筛选出特异性碎片离子，作为人参皂苷单体的标记碎片离子。
[0032]优选的，所述人参皂苷同分异构单体为Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0033]优选的，所述离子化过程中，采用电喷雾离子化，流速设定为30uL/hr，分别采用正负两种模式进行离子化，毛细管电压设为3kV，传输毛细管的温度为220°C;
[0034]优选的，所述离子化过程中，采用前端四极杆进行母离子选择，质量宽度设为5m/z，呙子聚集时间设置为1-2s。
[0035]优选的，所述电子诱导裂解和碰撞裂解处理过程中:碰撞裂解采用的碰撞能为10-25V;所述电子诱导裂解的条件为:偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V；电子福射时间:正尚子模式下为0.2s，在负尚子模式下，电子的福射时间设置为5s ；空白谱图偏压设置为OV0
[0036]更优选的，具体步骤如下:
[0037](I)样品前处理:称取适量的人参皂苷异构单体(如Rgl和Rf以及Re和Rb2)，用甲醇(农残基)和水(去离子水，>18.2兆欧)的配置成浓度为0.5uM的溶液。
[0038](2)质谱条件:采用傅立叶变化离子回旋共振质谱仪。利用电喷雾，流速设定为30uL/hr的，分别采用正负两种模式进行离子化，毛细管电压设为3kV，传输毛细管的温度为220°C。采用前端四极杆进行母离子选择，质量宽度设为5m/z，离子聚集时间设置为l-2s。采用宽带模式进行数据采集，质量范围设为50-1000。
[0039](3)电子诱导裂解和碰撞裂解:采用加热空心阴极产生电子，偏压设置为-1OV?-15V之间，提取极电压设置为11?14V。电子辐射时间:正离子模式下设置为0.2s，为了增加电子与负离子的相互作用，在负离子模式下，电子的辐射时间设置为5s。空白谱图偏压设置为0V，保证无自由辐射电子，其余参数不变。碰撞裂解时，采用碰撞能设为10-25V。
[0040](4)谱图解析:碎片离子确认采用精确质量数测量，母离子质荷比内标法校准质量数，精确度设定为5ppm。分别对于碰撞裂解和电子诱导裂解谱图中碎片离子的类型和丰度进行比较，确定电子诱导裂解的碎片离子的归属，筛选出特异性碎片离子，做为人参皂苷单体的标记碎片离子。
[0041]傅立叶变换离子回旋共振质谱仪在筛选人参皂苷同分异构单体特异性碎片离子中的应用。
[0042]优选的，所述人参皂苷同分异构单体为Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0043]优选的，识别过程中，通过电子诱导裂解产生电荷诱导型裂解碎片和自由诱导型裂解碎片。
[0044]更优选的，所述电子诱导裂解的条件为:偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V；电子福射时间:正尚子模式下为0.2s，在负尚子模式下，电子的福射时间设置为5s;空白谱图偏压设置为0V。
[0045]上述方法用于获得不同的人参皂苷异构体的电子诱导裂解和碰撞裂解质谱图。
[0046]所述方法在人参皂苷单体同分异构体中的应用。
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