7]所述人参皂苷单体为Rgl和Rf以及Re和Rb2。
[0048]—种人参皂苷同分异构体识别方法，首先利用本发明方法获得人参皂苷单体为Rgl和Rf以及Re和Rb2的电子诱导和碰撞裂解谱图，将获得的谱图进行比对，筛选出特异性碎片离子，做为人参皂苷单体的标记碎片离子，用于识别和区分人参皂苷同分异构单体。
[0049]本发明的有益效果:
[0050]本发明在人参皂苷的结构确定中引入电子诱导裂解技术，通过电荷诱导裂解和自由基诱导裂解两种裂解方式的结合，使不同类型的人参皂苷单体在电荷诱导裂解中产生了特异性的碎片离子。利用该方法可以实现不同类型的人参皂苷单体的识别，以及人参属药材中提取物的分析，可以对市场上人参皂苷以及人参皂苷单体的真假鉴定。
【附图说明】
[0051 ]图1为人参皂苷Rgl和Rf负离子模式下[M-Η]—的碰撞裂解质谱图。
[0052]图2为人参皂苷Rgl和Rf负离子模式下[M-Η]—的电子诱导裂解质谱图。
[0053]图3为人参皂苷Rb2和Re负离子模式下[M-Η]—的碰撞裂解质谱图。
[0054]图4为人参皂苷Rb2和Re负离子模式下[M-Η]—的电子诱导裂解质谱图。
[0055]图5为人参皂苷Rf和Fll正离子模式下[M+H]+的电子诱导裂解质谱图。
【具体实施方式】
[0056]下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。
[0057]实施例1
[0058](I)样品前处理:称取适量的人参皂苷异构单体(如Rgl和Rf以及Re和Rb2)，用甲醇(农残基)和水(去离子水，>18.2兆欧)的配置成浓度为0.5uM的溶液。
[0059](2)质谱条件:采用傅立叶变化离子回旋共振质谱仪。利用电喷雾，流速设定为30uL/hr的，分别采用正负两种模式进行离子化，毛细管电压设为3kV，传输毛细管的温度为220°C。采用前端四极杆进行母离子选择，质量宽度设为5m/z，离子聚集时间设置为l-2s。采用宽带模式进行数据采集，质量范围设为50-1000。
[0060](3)电子诱导裂解和碰撞裂解:采用加热空心阴极产生电子，偏压设置为-1OV?-15V之间，提取极电压设置为11?14V。电子辐射时间:正离子模式下设置为0.2s，为了增加电子与负离子的相互作用，在负离子模式下，电子的辐射时间设置为5s。空白谱图偏压设置为0V，保证无自由辐射电子，其余参数不变。碰撞裂解时，采用碰撞能设为10-25V。通过碰撞裂解和电子诱导裂解获得碎片离子信息，如图1?图5;
[0061](4)谱图解析:碎片离子确认采用精确质量数测量，母离子质荷比内标法校准质量数，精确度设定为5ppm。对同分异构单体电子诱导裂解单体产生的碎片离子进行归属;通过比较标准人参皂苷单体中特异性碎片离子的质荷比和丰度，可以对人参皂苷同分异构单体进行有效的识别方法。通过图1可见，对于Rgl和Rf两种人参皂苷单体，其碰撞裂解质谱图完全一致，利用碰撞裂解不能识别两种异构单体的类型;通过图2可见，对于Rgl和Rf两种人参皂苷单体，其电子诱导裂解质谱图具有明显的差别，Rf产生特异性离子(B2b和C2b)，利用电子诱导裂解能够明显的识别两种异构单体的类型；通过图3可见，对于Rb2和Re两种人参皂苷单体，其碰撞裂解质谱图完全一致，利用碰撞裂解不能识别两种异构单体的类型;通过图4可见，对于Rb2和Re两种人参皂苷单体，其电子诱导裂解质谱图具有4处明显的差别，利用电子诱导裂解能够对两种异构单体的类型进行识别;通过图5可见，对于Rf和Fll两种人参皂苷单体，其电子诱导裂解质谱碎片离子具有明显的差别(Fll具有475.3779碎片离子，Rf无此碎片离子，且中性丢失离子存在2个质量数差别)，利用电子诱导裂解能够识别两种异构单体的类型。由以上应用可见，基于傅立叶变换离子回旋共振电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法能够应用于人参皂苷同分异构单体的识别和结构分析。
[0062]实施例1
[0063](I)样品前处理:称取适量的人参皂苷异构单体(如Rgl和Rf以及Re和Rb2)，用甲醇(农残基)和水(去离子水，>18.2兆欧)的配置成浓度为0.5uM的溶液。
[0064](2)质谱条件:采用傅立叶变化离子回旋共振质谱仪。利用电喷雾，流速设定为30uL/hr的，分别采用正负两种模式进行离子化，毛细管电压设为3kV，传输毛细管的温度为220°C。采用前端四极杆进行母离子选择，质量宽度设为5m/z，离子聚集时间设置为l-2s。采用宽带模式进行数据采集，质量范围设为50-1000。
[0065](3)电子诱导裂解和碰撞裂解:采用加热空心阴极产生电子，偏压设置为-1OV?-15V之间，提取极电压设置为11?14V。电子辐射时间:正离子模式下设置为0.2s，为了增加电子与负离子的相互作用，在负离子模式下，电子的辐射时间设置为5s。空白谱图偏压设置为0V，保证无自由辐射电子，其余参数不变。碰撞裂解时，采用碰撞能设为10-25V。通过碰撞裂解和电子诱导裂解获得碎片离子信息，如图1?图5;
[0066](4)谱图解析:碎片离子确认采用精确质量数测量，母离子质荷比内标法校准质量数，精确度设定为5ppm。对同分异构单体电子诱导裂解单体产生的碎片离子进行归属;通过比较标准人参皂苷单体中特异性碎片离子的质荷比和丰度，可以对人参皂苷同分异构单体进行有效的识别方法。通过图1可见，对于Rgl和Rf两种人参皂苷单体，其碰撞裂解质谱图完全一致，利用碰撞裂解不能识别两种异构单体的类型;通过图2可见，对于Rgl和Rf两种人参皂苷单体，其电子诱导裂解质谱图具有明显的差别，Rf产生特异性离子(B2b和C2b)，利用电子诱导裂解能够明显的识别两种异构单体的类型；通过图3可见，对于Rb2和Re两种人参皂苷单体，其碰撞裂解质谱图完全一致，利用碰撞裂解不能识别两种异构单体的类型;通过图4可见，对于Rb2和Re两种人参皂苷单体，其电子诱导裂解质谱图具有4处明显的差别，利用电子诱导裂解能够对两种异构单体的类型进行识别;通过图5可见，对于Rf和Fll两种人参皂苷单体，其电子诱导裂解质谱碎片离子具有明显的差别(Fll具有475.3779碎片离子，Rf无此碎片离子，且中性丢失离子存在2个质量数差别)，利用电子诱导裂解能够识别两种异构单体的类型。由以上应用可见，基于傅立叶变换离子回旋共振电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法能够获得人参皂苷同分异构单体的特异性碎片离子即标记碎片离子。
[0067]上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
【主权项】
1.傅立叶变换离子回旋共振质谱仪在人参皂苷同分异构单体识别中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人参皂苷同分异构单体为Rgl和Rf以及Re和Rb2。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，识别过程中，通过电子诱导裂解产生电荷诱导型裂解碎片和自由诱导型裂解碎片。4.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述电子诱导裂解的条件为:偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V;电子福射时间:正离子模式下为0.2s，在负离子模式下，电子的辐射时间设置为5s;空白谱图偏压设置为0V。5.—种基于傅立叶变换离子回旋共振电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法，其特征在于， 样品前处理； 呙子化； 电子诱导裂解，或电子诱导裂解和碰撞裂解； 将不同人参皂苷单体的电子诱导裂解谱图进行比对;或将同一人参皂苷单体的电子诱导裂解图谱与其相应的碰撞裂解图谱进行比对，进而识别和区分人参皂苷同分异构单体。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述离子化过程中，采用电喷雾离子化，流速设定为30uL/hr，分别采用正负两种模式进行离子化，毛细管电压设为3kV，传输毛细管的温度为220°C; 或采用前端四极杆进行母离子选择，质量宽度设为5m/z，离子聚集时间设置为l-2s。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述电子诱导裂解过程中，偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V;电子福射时间:正离子模式下为0.2s，在负离子模式下，电子的辐射时间设置为5s;空白谱图偏压设置为0V。8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述电子诱导裂解和碰撞裂解处理过程中:碰撞裂解采用的碰撞能为10-25V;所述电子诱导裂解的条件为:偏压为-1OV?-15V，提取极电压为11?14V；电子福射时间:正尚子模式下为0.2s，在负尚子模式下，电子的福射时间设置为5s;空白谱图偏压设置为0V。9.一种基于傅立叶变换离子回旋共振电子诱导裂解质谱筛选人参皂苷同分异构单体特异性碎片离子的方法，其特征在于， 样品前处理； 离子化； 电子诱导裂解和碰撞裂解； 将同一人参皂苷单体的电子诱导裂解图谱与其相应的碰撞裂解图谱进行比对，筛选出特异性碎片离子，作为人参皂苷单体的标记碎片离子。10.傅立叶变换离子回旋共振质谱仪在筛选人参皂苷同分异构单体特异性碎片离子中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种基于电子诱导裂解质谱的人参皂苷同分异构单体识别方法。采用电子诱导裂解技术，克服了人参皂苷同分异构单体因在液相色谱中保留时间相同、电喷雾质谱母离子质荷比相同和碰撞裂解中产生碎片离子相同，而造成的不能进行准确识别的缺点。该方法产生的碎片离子结合了电荷驱动裂解和自由基驱动裂解的特点，对于即便存在结构相似度较高的人参皂苷单体，仍然能够产生具有明显的特异性的碎片离子，实现了一次串联质谱完成复杂异构单体确认，可以用于人参以及其衍生产品中人参皂苷单体的快速和准确识别。
【IPC分类】G01N30/72
【公开号】CN105572273
【申请号】CN201610037769
【发明人】陈相峰
【申请人】山东省分析测试中心
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月20日