一种超临界流体色谱‑气相色谱‑质谱测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法与流程

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种超临界流体色谱-气相色谱-质谱测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法。

背景技术：

酚类物质在烟草以及烟气中广泛存在，并且和烟叶色泽，品质以及烟气生理强度等方面密切相关，是烟草工业中一类重要的化合物。卷烟中的多酚化合物因为沸点较高，在燃烧时不会直接进入烟气中，大部分都会分解成为简单酚类化合物进气烟气中。然而，有关烟气中的简单酚类化合物的报道大部分是负面的，例如：对呼吸道粘膜有强烈的刺激作用；引起辣味，涩味等，影响卷烟的口感；甚至还有辅助促癌作用。因此，卷烟烟气中的酚类化合物是有害成分，烟气中酚类物质的分析检测也成为国内外烟草行业研究的热点方向之一。

常用的分析方法包括气相色谱法、气相色谱-质谱联用法(GC/MS)、液相色谱法(HPLC)、超高效液相色谱法(UPLC)，液相色谱-质谱-质谱联用法(LC/MS/MS)等。然而这些方法测定的卷烟烟气中酚类化合物都很少，主要是由于烟气中化学成分种类繁多，非常复杂、超出了单柱色谱的分离能力，许多化合物无法完全分离，影响了检索结果的可靠性。因此要实现烟气中的酚类化合物准确分析，必须另辟蹊径。

技术实现要素：

本发明提供了一种SFC-GC-MS测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法，处理温度低，在分离过程中挥发性成分不会损失；经SFC分离后的各段馏分用GC-MS分析，各段之间化合物基本不重叠，同时解决了GC-MS的峰容量有限的问题。结果令人满意，分离出的酚类香气成分数量远远多于直接进样分析，为卷烟主流烟气中酚类香气成分的测定提供了新方法，对评价吸烟对健康的危害、促进低危害卷烟的研发具有重要意义。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种SFC-GC-MS测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法，包括样品制备和分析，具体如下步骤：

(A)烟气捕集：按照ISO模式抽吸卷烟，采用转盘式吸烟机，采用92mm玻璃纤维滤片收集20支卷烟的总粒相物；

(B)样品提取：将步骤A得到的滤片加入到超临界流体萃取柱中，经超临界流体萃取后得样品；

(C)SFC分段：将步骤B得到的萃取液进入到SFC分离系统，由泵输送流动相经SFC分离，按保留时间连续切割分成3-5段馏分，每段馏分自动收集到气相色谱瓶中；

(D)GC-MS分析：将步骤C得到的各段馏分分别进入到气相色谱系统，质谱检测。

本发明技术方案中步骤B所述的超临界流体萃取条件如下：

超临界流体萃取的萃取釜温度为30～65℃，萃取压力为200～400bar，静态萃取20～40min，动态萃取30～60min，夹带剂为无水乙醇，流速0.01～0.2mL/min。

本发明技术方案中步骤C所述的SFC条件如下：

超临界流体色谱采用10mm×150mm，5μm的Silica 2-EP色谱柱，流动相为质量比为50～90/10～50的二氧化碳/甲醇，流动相流速为20～30mL/min，每次进样200～500μL。

本发明技术方案中步骤D所述的GC-MS条件如下：

毛细管柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度为250℃；载气：高纯氦(纯度≥99.999％)，流速1.0mL/min；进样方式：分流进样，进样量为2μL，分流比30:1；程序升温条件：初始温度50℃，保持5min，然后2℃/min升至80℃，再3℃/min升至230℃，保持16min，最后12℃/min升至250℃，保持20min。

质谱条件：电离方式：EI+；离子化电压：70ev；扫描范围：35-450amu；离子源温度：230℃；传输线温度：260℃。

谱图检索：WILEY、NIST08谱库进行检索。

本发明与现有技术相比，其有益效果为：

1、由于SFC的流动相主要是CO₂，只含有少量的有机溶剂(一般小于10％)经SFC分离纯化后的样品，CO₂从排除口排出，各段馏分不需浓缩，可直接进入GC-MS分析。

2、对于低含量的样品，可让经SFC分离的各段馏分多次累加，积累到理想分析量后再进入气相色谱分析，在实现样品高效净化的同时大大提高了分析灵敏度

3、处理温度低，在分离过程中挥发性成分不会损失；经SFC分离后的各段馏分用GC-MS分析，各段之间化合物基本不重叠，同时解决了GC-MS的峰容量有限的问题，能够鉴定出更多种类的酚类化合物。

附图说明

图1为本发明一种SFC-GC-MS测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法中卷烟主流烟气样品的SFC图。

图2为本发明一种SFC-GC-MS测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法中卷烟主流烟气样品不经超临界流体色谱分段直接用GC-MS分析气相色谱图(A)；经超临界流体色谱分段后第一段馏分(B1)、第二段馏分(B2)、第三段馏分(B3)用GC-MS分析气相色谱图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明要求所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

实施例1

一种SFC-GC-MS测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法，包括以下步骤：

(A)烟气捕集：按照ISO模式抽吸卷烟，采用转盘式吸烟机，采用92mm玻璃纤维滤片收集20支卷烟的总粒相物；

(B)样品提取：将步骤A得到的滤片加入到超临界流体萃取柱中，超临界流体萃取的萃取釜温度为55℃，萃取压力为300bar，静态萃取20min，动态萃取40min，夹带剂为无水乙醇，流速0.01mL/min，经超临界流体萃取后得样品；

(C)SFC分段：将步骤B得到的萃取液进入到SFC分离系统，超临界流体色谱采用10mm×150mm，5μm的Silica 2-EP色谱柱，流动相为质量比为90/10的二氧化碳/甲醇，流动相流速为30mL/min，每次进样500μL。按保留时间连续切割分成3段馏分，每段馏分自动收集到气相色谱瓶中；

(D)GC-MS分析：将步骤C得到的各段馏分分别进入到气相色谱系统，质谱检测。毛细管柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度为250℃；载气：高纯氦(纯度≥99.999％)，流速1.0mL/min；进样方式：分流进样，进样量为2μL，分流比30:1；程序升温条件：初始温度50℃，保持5min，然后2℃/min升至80℃，再3℃/min升至230℃，保持16min，最后12℃/min升至250℃，保持20min。

质谱条件：电离方式：EI+；离子化电压：70ev；扫描范围：35-450amu；离子源温度：230℃；传输线温度：260℃；谱图检索：WILEY、NIST08谱库进行检索。

对于市售某品牌卷烟样品，样品直接进样用GC-MS分析共鉴定出了15种酚类化合物；而样品经SFC分段后再用GC-MS分析共鉴定出了26种酚类化合物。

实施例2

一种SFC-GC-MS测定卷烟主流烟气中酚类化合物的方法，包括以下步骤：

(A)烟气捕集：按照ISO模式抽吸卷烟，采用转盘式吸烟机，采用92mm玻璃纤维滤片收集20支卷烟的总粒相物；

(B)样品提取：将步骤A得到的滤片加入到超临界流体萃取柱中，超临界流体萃取的萃取釜温度为55℃，萃取压力为300bar，静态萃取30min，动态萃取40min，夹带剂为无水乙醇，流速0.01mL/min，经超临界流体萃取后得样品；

(C)SFC分段：将步骤B得到的萃取液进入到SFC分离系统，超临界流体色谱采用10mm×150mm，5μm的Silica 2-EP色谱柱，流动相为质量比为88/12的二氧化碳/甲醇，流动相流速为30mL/min，每次进样500μL。按保留时间连续切割分成3段馏分，每段馏分自动收集到气相色谱瓶中；

(D)GC-MS分析：将步骤C得到的各段馏分分别进入到气相色谱系统，质谱检测。毛细管柱DB-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度为250℃；载气：高纯氦(纯度≥99.999％)，流速1.0mL/min；进样方式：分流进样，进样量为2μL，分流比30:1；程序升温条件：初始温度50℃，保持5min，然后2℃/min升至80℃，再3℃/min升至230℃，保持16min，最后12℃/min升至250℃，保持20min。

质谱条件：电离方式：EI+；离子化电压：70ev；扫描范围：35-450amu；离子源温度：230℃；传输线温度：260℃；谱图检索：WILEY、NIST08谱库进行检索。

对于市售某品牌卷烟样品，样品直接进样用GC-MS分析共鉴定出了16种酚类化合物；而样品经SFC分段后再用GC-MS分析共鉴定出了28种酚类化合物。

实施例3

与实施例1相同，在相同条件下平行测定5次(同批次处理)，主要考察保留时间和总峰面积值，试验结果表明RSD均小于4.7％。同时选取了其中6种化合物进行了加标回收率实验，传统方法的回收率在86-110％之间，本方法的回收率在90-105％之间，本方法的回收率明显高。