一种双甲脒含量的检测方法
【专利摘要】一种双甲脒含量的检测方法，包括以下步骤：A、取双甲脒标准品，制备系列浓度标准溶液，用高效液相色谱方法进行检测，分别获得系列浓度标准溶液高效液相色谱图，并获得双甲脒标准曲线；B、取待检样品，制备试样溶液，用高效液相色谱方法进行检测，获得其高效液相色谱图；C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得待检样品中双甲脒的含量；步骤A和B所用的高效液相色谱方法的色谱条件为：填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈?磷酸溶液，流动相流速为0.5?1.5ml/min，柱温20?40℃，检测波长250?350nm。本发明提出一种双甲脒含量的检测方法，采用高效液相色谱法，简便快速、通用性强，出峰快，省时省力，经济环保。
【专利说明】
一种双甲脒含量的检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及分析化学检测技术领域，尤其涉及一种双甲脒含量的检测方法。
【背景技术】
[0002] 双甲脒(C19H23N3)，为N-甲基-双(2，4-二甲苯亚胺甲基)胺，分子结构为：
[0004] 双甲脒是一种中等毒性的广谱杀螨剂，以触杀作用为主，兼有胃毒、熏蒸、拒食、驱 避作用，对植物有一定渗透内吸性，对幼若螨、成螨和螨卵有效，对其他一些杀螨剂产生抗 性的害螨有效，速效性好，持效性强。主要用于果树、花卉、草莓和其他农业及园艺作物防治 螨类，特别对柑桔螨类有较好的效果。也用于防治棉铃虫、红铃虫。双甲脒是杀螨剂中药效 较好的品种。
[0005] 检测双甲脒的常见方法有气相色谱法、气相色谱一质谱法和双甲脒分子印迹整体 柱检测法。气相色谱法需要对双甲脒进行衍生化，样品处理过程比较繁琐;传统液相色谱法 流动相中，有机溶剂使用比例大，且噪声大，基线不平稳，检测结果重现性不好;气相色谱-质谱法仪器设备要求较高，价格昂贵，一般的实验室难以承受；印迹柱适用于目标物选择性 分离，但通用性差，聚合物在有机溶剂中的溶胀收缩效应会降低聚合物的稳定性，且聚合物 整体介质的孔径分布范围很宽，柱效低；因此建立快速高效的双甲脒分析方法势在必行。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提出一种双甲脒含量的检测方法，采用高效液相色谱法，简便 快速、通用性强，出峰快，省时省力，经济环保。
[0007] 为达此目的，本发明采用以下技术方案：
[0008] -种双甲脒含量的检测方法，包括以下步骤：
[0009] A、取双甲脒标准品，制备系列浓度标准溶液，用高效液相色谱方法进行检测，分别 获得系列浓度标准溶液高效液相色谱图，根据高效液相色谱图的峰面积及标准溶液的浓度 获得双甲脒标准曲线；
[0010] B、取待检样品，制备试样溶液，用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高 效液相色谱图；
[0011] C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得 待检样品中双甲脉的含量；
[0012] 步骤A和B所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅 胶，流动相为乙腈-磷酸溶液，流动相流速为0.5-1.51111/1^11，柱温20-40°(：，检测波长250- 350nm〇
[0013]优选的，所述流动相中磷酸溶液的浓度为0.05%-2%。
[0014] 优选的，所述流动相中乙腈的质量分数为35%-65%。
[0015] 优选的，步骤A中系列浓度标准溶液的制备为:精密称取标准品，使用有机溶剂进 行溶解并定容，过滤，制备获得系列浓度标准溶液。
[0016] 优选的，步骤B中试样溶液的制备为:精密称取待检样品，使用有机溶剂进行溶解 并定容，过滤，获得试样溶液。
[0017] 优选的，所述有机溶剂为正己烷、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、正丙醇、异丙醇、 二甲苯、丙酮或甲苯中的任一种。
[0018] 优选的，所述有机溶剂为正己烷、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、正丙醇或异丙醇 中的任一种。
[0019] 优选的，所述色谱条件中，进样量为5-20yL。
[0020] 本发明的有益效果:采用高效液相色谱法，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱， 通用性强;样品处理稀释一步到位，快速简便;流动相降低了有机溶剂的使用比例，出峰快， 省时省力，经济环保；
[0021 ]该方法具有样品处理方便快捷、检测灵敏度高、重现性好、出峰快、线性好、成本低 廉、通用性好，适合原料生产单位使用。
【附图说明】
[0022] 图1是本发明采用高效液相色谱方法检测待检试样获得的色谱图；
[0023] 图2是说明书中试验例中用气相色谱法检测双甲脒溶液获得的色谱图。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合附图并通过【具体实施方式】来进一步说明本发明的技术方案。
[0025] -种双甲脒含量的检测方法，包括以下步骤：
[0026] A、取双甲脒标准品，制备系列浓度标准溶液，用高效液相色谱方法进行检测，获得 系列浓度标准溶液高效液相色谱图，获得双甲脒标准曲线；
[0027] B、取待检样品，制备试样溶液，用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高 效液相色谱图；
[0028] C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得 待检样品中双甲脉的含量；
[0029] 步骤A和B所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅 胶，流动相为乙腈与磷酸溶液的混合物，流动相流速为0.5-1.5ml/min，柱温为20-40 °C，检 测器为紫外检测器，检测波长200_350nm。
[0030] 本发明对所述高效液相色谱仪没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的高效 液相色谱仪即可。在本发明中，所述高效液相色谱检测中的填充剂为十八烷基硅烷键合硅 胶;所述高效液相色谱检测中的流动相为乙腈与磷酸溶液的混合物，所述磷酸溶液的浓度 优选为0.05-2%，更优选为0.1-0.3 %，所述乙腈乙腈的质量分数为35%-65 %，更优选为 50 %-60 % ;所述流动相流速为0.5-1.5ml/min，优选为lml/min;所述柱温为20-40°C，优选 为25-35°C;所述检测器为紫外检测器，检测波长为200-350nm，优选为250-300nm。更进一 步，高效液相色谱法检测进样量为5_20μ1，优选为10-20μ1。使用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充柱，通用性强，传统液相色谱法流动相中，有机溶剂使用比例大，且噪声大，基线不平 稳，检测结果重现性不好，本发明的流动相降低了有机溶剂的使用比例，出峰快，省时省力， 经济环保。
[0031] 在本发明中，所述双甲脒标准曲线的制备原理无特殊的要求，按照本领域技术人 员熟知的标准曲线制作原理和方法制备即可，本发明优选:称取标准品，用有机溶剂溶解并 定容过滤，配制成高质量浓度的标准母液，再将所述标准母液用有机溶剂按梯度稀释法稀 释成系列浓度的双甲脒标准溶液，将所述系列浓度的双甲脒标准溶液按照上述所述的高效 液相色谱条件进行高效液相色谱检测，分别得到系列浓度双甲脒标准溶液的高效液相色谱 图，根据所述高效液相色谱图和双甲脒标准溶液的浓度，以双甲脒标准溶液的高效液相色 谱图的峰面积为纵坐标，以其对应的双甲脒标准溶液的质量浓度为横坐标，得到标准曲线。
[0032] 所述的系列浓度双甲脒标准溶液，在本发明中系列浓度的双甲脒标准溶液的浓度 优选为〇 · 〇l_2mg/ml，更优选为0 · 0l-lmg/ml，最优选为0 · 07mg/ml、0 · 08mg/ml、0 · 09mg/ml、 0·lmg/ml、0·2mg/ml、0·3mg/ml、0·4mg/ml〇
[0033] 由于双甲脒在酸性溶液中易分解，本发明没有采用常规的流动相作为稀释液，而 是采用了溶解双甲脒用的有机溶剂作为稀释液。
[0034]所述的溶解和稀释双甲脒用的有机溶剂为正己烷、乙腈、Ν，Ν_二甲基甲酰胺、甲 醇、正丙醇、异丙醇、二甲苯、丙酮、甲苯中的一种，优选正己烷、乙腈、Ν，Ν-二甲基甲酰胺、甲 醇、正丙醇、异丙醇，更优选为乙腈、Ν，Ν-二甲基甲酰胺。
[0035]本发明实验结果表明，本发明提供的方法得到标准曲线的相关系数R为0.9999,这 说明本发明提供的方法中，双甲脒的峰面积与其质量浓度间存在良好的线性关系，从而使 得到的双甲脒溶液含量的检测结果具有较高的准确度。
[0036]双甲脒标准曲线制备完成后，取待检样品，制备试样溶液，在本发明中，所述的试 样溶液的制备，优选将待检样品用有机溶剂溶解、定容、过滤制备试样溶液，在本发明中，所 述溶解用有机溶剂为正己烷、乙腈、Ν，Ν-二甲基甲酰胺、甲醇、正丙醇、异丙醇、二甲苯、丙 酮、甲苯中的一种，优选正己烷、乙腈、Ν，Ν-二甲基甲酰胺、甲醇、正丙醇、异丙醇，更优选为 乙腈、Ν，Ν-二甲基甲酰胺。
[0037] 制备试样溶液后，按照上述所述的高效液相色谱条件用高效液相色谱方法进行检 测，获得试样溶液的高效液相色谱图。
[0038] 根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，按外标法计算获得待 检样品中双甲脒的含量。
[0039]为了进一步说明本发明，下面结合具体实施例对本发明提供的一种检测双甲脒的 方法进行详细地说明，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0040] 实施例1
[0041 ] -种双甲脒的检测方法，包括以下步骤：
[0042] Α、取双甲脒标准品，用Ν，Ν-二甲基甲酰胺溶解，并定容过滤，配制0.07mg/ml、 0 · 08mg/ml、0 · 09mg/ml、0 · lmg/ml、0 · 2mg/ml、0 · 3mg/ml、0 · 4mg/ml系列浓度标准溶液，用高 效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图，获得双甲脒标准曲 线；
[0043] B、取待检样品0.08g，使用N，N_二甲基甲酰胺溶液进行溶解、稀释并定容、过滤，其 中选用50ml容量瓶进行定容，采用0.45μπι的滤膜过滤，制备试样溶液，用高效液相色谱方法 进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；
[0044] C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得 待检样品中双甲脉的含量；
[0045] 步骤Α和Β所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅 胶，流动相为乙腈与磷酸溶液的混合物，磷酸溶液浓度为0.2%，乙腈的质量分数57%，流动 相流速为lml/min，柱温为20-40°C，检测器为紫外检测器，检测波长270nm。
[0046] 实施例2
[0047] -种双甲脒的检测方法，包括以下步骤：
[0048] A、取双甲脒标准品，用N，N-二甲基甲酰胺溶解，并定容过滤，配制0.07mg/ml、 0 · 08mg/ml、0 · 09mg/ml、0 · lmg/ml、0 · 2mg/ml、0 · 3mg/ml、0 · 4mg/ml系列浓度标准溶液，用高 效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图，获得双甲脒标准曲 线；
[0049] B、取待检样品O.Olg，使用N，N_二甲基甲酰胺溶液进行溶解、稀释并定容、过滤，其 中选用50ml容量瓶进行定容，采用0.45μπι的滤膜过滤，制备试样溶液，用高效液相色谱方法 进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；
[0050] C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得 待检样品中双甲脉的含量；
[0051] 步骤Α和Β所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅 胶，流动相为乙腈与磷酸溶液的混合物，磷酸溶液浓度为0.2%，乙腈的质量分数65%，流动 相流速为lml/min，柱温为20-40°C，检测器为紫外检测器，检测波长300nm。
[0052] 实施例3
[0053] 一种双甲脒的检测方法，包括以下步骤：
[0054] A、取双甲脒标准品，用N，N-二甲基甲酰胺溶解，并定容过滤，配制0.07mg/ml、 0 · 08mg/ml、0 · 09mg/ml、0 · lmg/ml、0 · 2mg/ml、0 · 3mg/ml、0 · 4mg/ml系列浓度标准溶液，用高 效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图，获得双甲脒标准曲 线；
[0055] B、取待检样品0.16g，使用N，N_二甲基甲酰胺溶液进行溶解、稀释并定容、过滤，其 中选用100ml容量瓶进行定容，采用0.45μπι的滤膜过滤，制备试样溶液，用高效液相色谱方 法进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；
[0056] C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得 待检样品中双甲脉的含量；
[0057]步骤Α和Β所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅 胶，流动相为乙腈与磷酸溶液的混合物，磷酸溶液浓度为0.1 %，乙腈的质量分数60%，流动 相流速为lml/min，柱温为20-40°C，检测器为紫外检测器，检测波长350nm。
[0058] 实施例4
[0059] 一种双甲脒的检测方法，包括以下步骤：
[0060] A、取双甲脒标准品，用N，N-二甲基甲酰胺溶解，并定容过滤，配制0.07mg/ml、 Ο · 08mg/ml、0 · 09mg/ml、0 · lmg/ml、0 · 2mg/ml、0 · 3mg/ml、0 · 4mg/ml系列浓度标准溶液，用高 效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图，获得双甲脒标准曲 线；
[0061] B、取待检样品0.08g，使用N，N-二甲基甲酰胺溶液进行溶解、稀释并定容、过滤，其 中选用50ml容量瓶进行定容，采用0.45μπι的滤膜过滤，制备试样溶液，用高效液相色谱方法 进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；
[0062] C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得 待检样品中双甲脉的含量；
[0063] 步骤Α和Β所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅 胶，流动相为乙腈与磷酸溶液的混合物，磷酸溶液浓度为0.2%，乙腈的质量分数35%，流动 相流速为1.5ml/min，柱温为20-40°C，检测器为紫外检测器，检测波长250nm。
[0064] 实施例5
[0065] -种双甲脒的检测方法，包括以下步骤：
[0066] A、取双甲脒标准品，用N，N-二甲基甲酰胺溶解，并定容过滤，配制0.07mg/ml、 0 · 08mg/ml、0 · 09mg/ml、0 · lmg/ml、0 · 2mg/ml、0 · 3mg/ml、0 · 4mg/ml系列浓度标准溶液，用高 效液相色谱方法进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图，获得双甲脒标准曲 线；
[0067] B、取待检样品0.08g，使用N，N_二甲基甲酰胺溶液进行溶解、稀释并定容、过滤，其 中选用50ml容量瓶进行定容，采用0.45μπι的滤膜过滤，制备试样溶液，用高效液相色谱方法 进行检测，获得试样溶液的高效液相色谱图；
[0068] C、根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得 待检样品中双甲脉的含量；
[0069] 步骤Α和Β所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅 胶，流动相为乙腈与磷酸溶液的混合物，磷酸溶液浓度为0.05%，乙腈的质量分数35%，流 动相流速为〇.5ml/min，柱温为20-40°C，检测器为紫外检测器，检测波长270nm。
[0070] 经上述多次检测试验验证，本发明提供的高效液相色谱法检测双甲脒原料及其制 剂含量、有关物质，该方法样品处理方便快捷;检测限为〇.〇2μg/ml、定量限为0.07μg/ml，检 测灵敏度高；重复进样结果的RSD = 0.03%，重现性好;在测定范围内拟合回归曲线，r = 0.9999,线性好。
[0071] 试验例
[0072] 本发明人对比采用本发明检测双甲脒含量的方法与采用气相方法检测双甲脒含 量的方法的快捷性和结果准确性。
[0073] 检测样品为12.5%的双甲脒溶液，由佛山市南海东方澳龙公司提供，检测样品的 高效液相色谱法按照实施例1进行，气相色谱法参照《中华人民共和国兽药典》2010年版一 部第28-29页关于《双甲脒溶液》质量标准项下含量测定方法。
[0074] 检测获得的高效液相色谱见图1所示，用本发明检测双甲脒溶液，出峰时间为 4.155min，而用气相色谱法检测双甲脒溶液，其获得的色谱图见图2所示，其出峰时间在 13min左右，说明本发明出峰快。检测更速度，节约检测时间。同时经过计算，二者检测获得 的双甲脒溶液的含量分别为96.8% (高效液相色谱法)和97.3(气相色谱法），无显著差异， 更进一步说明本发明检测结果准确，可适用于正常质量检测。
[0075]以上结合具体实施例描述了本发明的技术原理。这些描述只是为了解释本发明的 原理，而不能以任何方式解释为对本发明保护范围的限制。基于此处的解释，本领域的技术 人员不需要付出创造性的劳动即可联想到本发明的其它【具体实施方式】，这些方式都将落入 本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于:包括以下步骤： A、 取双甲脒标准品，制备系列浓度标准溶液，用高效液相色谱方法进行检测，分别获得 系列浓度标准溶液高效液相色谱图，根据高效液相色谱图的峰面积及标准溶液的浓度获得 双甲脒标准曲线； B、 取待检样品，制备试样溶液，用高效液相色谱方法进行检测，获得试样溶液的高效液 相色谱图； C、 根据获得的试样溶液的高效液相色谱图和双甲脒标准曲线，用外标法计算获得待检 样品中双甲脒的含量； 步骤A和B所用的高效液相色谱方法的色谱条件为:填充柱为十八烷基硅烷键合硅胶， 流动相为乙腈-磷酸溶液，流动相流速为0.5-1.5ml/min，柱温20-40 °C，检测波长250-350nm〇2. 根据权利要求1所述的一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于:所述流动相中磷酸 溶液的浓度为0.05 %-2 %。3. 根据权利要求1所述的一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于:所述流动相中乙腈 的质量分数为35%-65%。4. 根据权利要求1所述的一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于：步骤A中系列浓度 标准溶液的制备为:精密称取标准品，使用有机溶剂进行溶解并定容，过滤，制备获得系列 浓度标准溶液。5. 根据权利要求1所述的一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于：步骤B中试样溶液 的制备为:精密称取待检样品，使用有机溶剂进行溶解并定容，过滤，获得试样溶液。6. 根据权利要求4或5所述的一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于:所述有机溶剂 为正己烷、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、正丙醇、异丙醇、二甲苯、丙酮或甲苯中的任一 种。7. 根据权利要求6所述的一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于:所述有机溶剂为正 己烷、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、正丙醇或异丙醇中的任一种。8. 根据权利要求1所述的一种双甲脒含量的检测方法，其特征在于:所述色谱条件中， 进样量为5-20yL。
【文档编号】G01N30/06GK106093268SQ201610729186
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年8月26日
【发明人】李成应, 陈静虹, 林孝崇, 徐奇清, 陶映娴, 付良凯
【申请人】佛山市南海东方澳龙制药有限公司