专利名称：植物克隆脱毒快速繁殖技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物的繁殖培育方法，尤指一种以克隆方式繁殖植物的方法。
利用克隆技术可实现优良无性系或单株迅速繁殖推广，并且不改变其遗传性，即保持原有的优良性不变。比如，1个兰花茎尖经过一年克隆繁殖可以获得400万株具有相同遗传性的健康植株，这是其他任何方法都难以实现的。又如花叶芋这种植物，常规繁殖每年仅几倍到几十倍，克隆技术每年可繁殖出几万至数百万倍的小植株。这种繁殖速度对于珍贵、优、新植物品种是非常有意义的。尤其是在市场竞争激烈的今天，在短时间内获得大量商品价格较高的苗木，无疑将会给生产者带来巨额利润。
植物克隆技术虽然具有上述的诸多优点，但实施上却有一些技术困难点，比如如果克隆母植物带有病原菌(真菌、细菌、或病毒)，则克隆出来的植物同样带有这些病原菌，会使植株生长不旺或夭折；另外克隆试管苗移植入土壤如果方法不正确，也会对植物造成损伤甚至导致死亡。
本发明的技术方案是一种植物克隆脱毒繁殖技术，包括如下步骤h.配制培养基；i.选择健壮无病虫母株；j.接种前进行表面灭菌；k.实施接种；l.放到培养室培养；m.移载到移植基质中驯化培养；n.栽植于土壤中。
在本发明的步骤a中是选择配制应用最多的MS培养基，其组成是在配制1升(1000毫升)培养基时，加硝酸铵1.65±0.01克、硝酸钾1.9±0.1克、氯化钙0.44±0.01克、硫酸镁0.37±0.01克、磷酸二氢钾0.17±0.01克、碘化钾0.83±0.01毫克、硼酸5.2±0.1毫克、硫酸镁22.3±0.1毫克、硫酸锌3.6±0.1毫克、钼酸钠0.25±0.01毫克、硫酸铜0.025±0.001毫克、氯化钴0.025±0.001毫克、硫酸铁27.8±0.1毫克、蔗糖30±5克和琼脂7±5克，其余为水，其他生长调节物质要根据植物的种类和培养目的而确定。
步骤c中的灭菌的具体操作方法是先用自来水冲洗十几分钟，有泥的应刷去。冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10～15秒钟消毒；接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗两次，再用10％的漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3～4次，带有茸毛不易湿润消毒的材料可加些洗衣粉；上述操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件进行。
步骤d的接种操作中先用解剖刀切取所需部位，通常几毫米大小，培育无病毒苗则应在1毫米以下，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到培养瓶上培养。工具用完即应在95％酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染，操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦拭一遍。
步骤e的培养室培养是将植物材料接种后放到培养室培养，培养室是花卉材料培养生长的场所，培养时的照度约为3000勒克斯，培养室的温度采取昼夜恒温培养，保持在25℃±2℃，也有采取昼夜变温培养的，夜晚温度可低些，每天日光灯照明12-16小时。
步骤f移载到移植基质中驯化培养的操作是在克隆试管苗开始移出时，仍罩上玻璃瓶，或盖上薄膜袋，上开几个小孔，1周后去掉，有喷雾条件则更理想，开始7-10天要遮荫，以后逐渐见阳光，移植基质为沙与蛭石各半，要排水、通风，隔一天浇一次营养液，2-3周后经驯化锻炼苗即可移至培养土中栽植。
本发明的优点利用本发明技术所生产的克隆苗木，可去病原菌(真菌、细菌、病毒)，并繁殖与保存去病原菌的植物，从而达到复壮和提高品质的效果。因此，克隆苗不带任何病毒(病害)，植株生长旺盛，具有丰产性，增产30％以上，同时减少农药使用量，既降低了生产成本，又减少了污染。克隆苗属无性繁殖，能够维持杂种F1代的优势，保证母种的优良性状，繁殖三倍体与多倍体植物，种苗纯正，避免有性繁殖而导致的品种退化，克隆苗没有童年期，具有早产、早熟性，花卉提前开花，花朵变大，果树提前进入结果期。加速引种和优良品种的推广进程，便于名、特、新、优品种的推广和对珍稀濒危植物的挽救。如彩色椒种籽每克500元，是黄金的三倍，靠种籽繁殖推广既慢且易退化，果树采取有性繁殖(嫁接、扦插等)一个新品种需10余年才能普及，而克隆技术，一个生长点，一年可培育数千万株，有些植物利用种籽繁殖周期长，有性繁殖难，直至灭绝，克隆技术不仅可以挽救濒危物种，而且可带来巨大商机，获得丰厚的利润。使用面广蔬菜、果树、花卉、园林、药材、林业等所有植物均可克隆，脱毒快繁。在克隆培养中可意外得到突变体、多倍体及观赏价值较高的植株，是培育新品种的得力手段，便于安排各种理化诱变因子，克服不亲和性杂交胚的早期败育，利用花药、花粉培育单倍体植株及突变枝条或花朵培育，便于体细胞融合，远缘杂交等培育新品种。有利于国际间与地区间种质交流。可在较小空间内用少量外植体生产大量植株，对自然繁殖率低或不能满足需求的植物进行快速繁殖，便于种质资源保存，幼苗可离体保存，例如要保存800个品种的葡萄种质，需占地15亩，若利用克隆试管苗保存，每个品种重复6个只需1m2即可。节约种量，直接为社会增效，许多作物以食用部分作种，如1万亩藕，每年需藕种400-500万斤，利用克隆快速繁殖可节约400-500万斤种藕。克隆苗成本低0.05-0.10元/株，如果量大成本更低，低于同类产品60％。在国内外市场上具有很强的市场竞争力。花卉组织培养是在人工控制的条件下培养花卉，是一种花卉现代工厂生产新技术。
植物克隆即无菌培养，也就是要求培养的材料不带有杂菌。从田间或温室等地切取花卉材料时，应选择健壮无病虫母株，取幼嫩、分生能力强的部位，以利生长。取来的材料虽经选择，外部总还有不少杂菌。为此，接种前应进行表面灭菌。通常先用自来水冲洗十几分钟，有泥的应刷去。冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10～15秒钟消毒。接着用无菌水(经高压灭菌的蒸馏水)冲洗两次，再用10％的漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3～4次。带有茸毛不易湿润消毒的材料可加些洗衣粉。上述操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件进行。经过表面灭菌的材料，用无菌滤纸将水吸掉。再用解剖刀切取所需部位，通常几毫米大小，培育无病毒苗则应在1毫米以下，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到培养瓶上培养。工具用完即应在95％酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染。操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦拭一遍。
植物材料接种后放到培养室培养。培养室是花卉材料培养生长的场所，一般几到十几平方米皆可。高度约为2米左右，空间小，可节省控温能源。培养材料放在培养架上培养。培养架可有木材或金属制成，有4-5层，每层高40-50厘米，日光灯装在上方。架长1.2米左右，与40瓦日光灯长一致，宽80-90厘米。每一层可装两支日光灯，这样培养时的照度约为3000勒克斯。培养室的温度大多采取昼夜恒温培养，保持在25℃±2℃，也有采取昼夜变温培养的，夜晚温度可低些，这应根据花卉生长需要而定。每天日光灯照明12-16小时。
克隆试管苗由于人工提供各方面优越条件，一般生长发育好，根系也多，可往往由于没掌握其特性，造成移栽时成活率不高。这是因为试管苗在瓶中湿度很高的条件下培养，人为提供蔗糖等碳源，植物材料是处一起异养生活状态，可以说比温室生长的花卉还要娇嫩得多。而突然从瓶中移到土壤让其过自养生活，往往由于变化太剧烈而造成损伤甚至死亡。为此，克隆试管苗开始移出时，仍罩上玻璃瓶，或盖上薄膜袋，上开几个小孔，1周后去掉。有喷雾条件则更理想。开始7-10天要遮荫，以后逐渐见阳光。移植基质以沙与蛭石各半为好，要排水、通风好，隔一天浇一次营养液。这样逐步锻炼，让其适应环境。2-3周后经驯化锻炼苗即可移至培养土中栽植。
权利要求
1.一种植物克隆脱毒快速繁殖技术，其特征是实施该技术的方法包括如下步骤a.配制培养基；b.选择健壮无病虫母株；c.接种前进行表面灭菌；d.实施接种；e.放到培养室培养；f.移载到移植基质中驯化培养；g.栽植于土壤中。
2.根据权利要求1所述的植物克隆脱毒繁殖技术，其特征是步骤a中选择配制应用最多的MS培养基，其组成是在配制1升培养基时，加硝酸铵1.65±0.01克、硝酸钾1.9±0.1克、氯化钙0.44±0.01克、硫酸镁0.37±0.01克、磷酸二氢钾0.17±0.01克、碘化钾0.83±0.01毫克、硼酸5.2±0.1毫克、硫酸镁22.3±0.1毫克、硫酸锌3.6±0.1毫克、钼酸钠0.25±0.01毫克、硫酸铜0.025±0.001毫克、氯化钴0.025±0.001毫克、硫酸铁27.8±0.1毫克、蔗糖30±5克和琼脂7±5克，其余为水，其他生长调节物质要根据植物的种类和培养目的而确定。
3.根据权利要求1所述的植物克隆脱毒快速繁殖技术，其特征是步骤c中的灭菌的具体操作方法是先用自来水冲洗十几分钟，有泥的应刷去。冲洗干净后，用70％的酒精浸泡10～15秒钟消毒；接着用无菌水冲洗两次，再用10％的漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3～4次，带有茸毛不易湿润消毒的材料可加些洗衣粉；上述操作皆应在接种箱或超净工作台等无菌环境条件进行。
4.根据权利要求1所述的植物克隆脱毒快速繁殖技术，其特征是步骤d的接种操作中先用解剖刀切取所需部位，通常几毫米大小，培育无病毒苗则应在1毫米以下，然后用解剖针或枪式镊子将材料接种到培养瓶上培养。工具用完即应在95％酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具带菌造成交叉污染，操作时应穿工作服、戴工作帽，事先洗净手，后再用酒精棉擦拭一遍。
5.根据权利要求1所述的植物克隆脱毒快速繁殖技术，其特征是步骤e的培养室培养是将植物材料接种后放到培养室培养，培养室是花卉材料培养生长的场所，培养时的照度约为3000勒克斯，培养室的温度采取昼夜恒温培养，保持在25℃±2℃，也有采取昼夜变温培养的，夜晚温度可低些，每天日光灯照明12-16小时。
6.根据权利要求1所述的植物克隆脱毒快速繁殖技术，其特征是步骤f移载到移植基质中驯化培养的操作是在克隆试管苗开始移出时，仍罩上玻璃瓶，或盖上薄膜袋，上开几个小孔，1周后去掉，有喷雾条件则更理想，开始7-10天要遮荫，以后逐渐见阳光，移植基质为沙与蛭石各半，要排水、通风，隔一天浇一次营养液，2-3周后经驯化锻炼苗即可移至培养土中栽植。
全文摘要
本发明涉及植物的繁殖培育方法,尤指一种以克隆方式繁殖植物的方法,其特征是实施该技术的方法包括如下步骤:a.配制培养基;b.选择健壮无病虫母株;c.接种前进行表面灭菌;d.实施接种;e.放到培养室培养;f.移载到移植基质中驯化培养;g.栽植于土壤中。本发明解决了目前植物克隆技术未根除病原菌以及克隆试管苗移植入土壤如果方法不当造成植物损伤甚至导致死亡的技术问题,可使克隆出来的植物更加健壮旺盛,移载成活率大幅提高。
文档编号A01G7/00GK1356030SQ0114512
公开日2002年7月3日 申请日期2001年12月30日 优先权日2001年12月30日
发明者张健 申请人:张健