专利名称：一种龙芽楤木组织培养方法
技术领域：
本发明属于生物工程技术领域，涉及植物组织培养技术，具体地说是一种龙芽楤木组织培养方法。
背景技术：
龙芽楤木Aralia elata(Miq.)seem.是五加科楤木属落叶灌木或小乔木，又称刺嫩芽等。刺嫩芽是著名的山野菜，营养丰富，又有较高的药用价值，日本人把它称为“天下第一”山珍。近年来，刺嫩芽市场消费量日益剧增。由于人们一直把采集野生资源作为刺嫩芽的主要生产手段，加之农业用地的迅速扩张，野生资源受到严重破坏。衣抚泉等在《农业与技术》2000年第五期上报道采集野生刺嫩芽大棚培养利用技术；中国部分生产单位采用野生植株移栽的方法营造经济林，取得了一定成效，但仍破坏野生资源，且成本高，不易形成规模；也有采用播种育苗的方法，但种子采集较困难，并且发芽率不易控制，生长周期长，见效慢，播种后植株性状不一致，王胜等在《黑龙江农业》2001年上报道播种育苗方法的发芽率仅为37％。利用组织培养方法进行苗木繁殖已经成为较为常见的技术，如葡萄、杨树、柑桔等等，但每一种植物的组织培养无论是培养基类型选择、激素种类及配比，还是材料选取、消毒方法、培养条件等都有不同的要求。
发明内容
本发明针对上述问题，采用组织培养的办法，寻求一种投资少，见效快，效益高的刺嫩芽生产技术，通过组织培养技术，快速繁殖龙芽楤木苗木，保持龙芽楤木植株的优良性状，生产出适合营造经济林的龙芽楤木苗木，目的是提供一种龙芽楤木组织培养方法。
本发明是按以下步骤和方法进行的。
一、龙芽楤木外植体的选择和消毒选择龙芽楤木当年形成的粗1～2厘米左右的越冬枝条，以休眠芽刚刚萌发茎尖作外植体。选晴天下午将材料剪回，室内培养至刚刚萌发，用解剖刀将芽带一块木质部切下来。先用自来水冲洗干净，在超净工作台上用75％酒精消毒30～40秒。倒出酒精后，立即用无菌水冲一遍。然后用5％次氯酸钠溶液消毒7～10分钟，再用无菌水冲洗3～4次备用。
二、接种用准备的无菌干滤纸吸去经选择和消毒的龙芽楤木外植体残留水分，在超净工作台上剥取茎尖。操作时左手拿镊子把带木质部的萌芽夹住，将芽伸到解剖镜下，右手持解剖刀依次剥去休眠芽鳞片和大部分幼叶，将具有2～3片幼叶的茎尖接种到琼脂固化MS+NAA1.0+GA0.2+BA1.0的分化培养基上。如外植体取材较大，也可用肉眼观察，将试材放于无菌干燥滤纸上用解剖刀切取。每瓶可接种3～5个茎尖，茎尖朝上，保持在25±1℃温度下，先暗培养15～20天，再在2000LUX条件下每天光照12小时，培养20～25天。这样，可有效防止褐变，在较小愈伤组织上直接分化出7～10个组织苗。
三、转接继代培养将分化出的组织苗剪下，进行培养。培养条件是温度25±1℃，2000～3000LUX光照每天12小时，接种到MS+NAA1.0+GA0.2+BA1.0或MS+IAA0.5+GA0.5+BA1.0的培养基上，35～45天转接一次，可以得到大量分化组培苗。
四、生根培养在1/2MS+NAA0.5～1.0+GA0～0.2+BA0～0.1+ASP300+GLU450的培养基上，对组培苗进行生根培养。培养条件是温度25±1℃，3000LUX光照每天12小时，35～45天形成生根小植株，成活率90％以上。
应用本发明，可以快速繁殖龙芽楤木组培苗木。本发明取材量小，操作容易，分化指数高。通过培养可快速生产小植株，是一种投资少，见效快，效益高的刺嫩芽苗木生产技术。可以保持龙芽楤木植株的优良性状，并可大规模生产。本发明的应用，可有效地保护野生资源，具有良好的生态效益。
具体实施例方式①选材、消毒和接种选取当年形成的粗1.8厘米左右的越冬龙芽楤木枝条，以休眠芽刚刚萌发茎尖作外植体。于晴天下午将材料剪回，室内培养至刚刚萌发，用解剖刀将芽带一块木质部切下来，先用自来水冲洗干净，再用75％酒精消毒约30秒。倒出酒精后，立即用无菌水冲一遍，然后用5％次氯酸钠溶液消毒8分钟，最后用无菌水冲洗4次。用准备的无菌干滤纸吸去残留水分，在超净工作台上剥取茎尖，操作时左手拿镊子将带木质部的萌芽夹住，右手持解剖针或解剖刀依次剥去休眠芽鳞片和大部分幼叶将具有2～3片幼叶的茎尖接种到琼脂固化的MS+NAA1.0+GA0.2+BA1.0培养基上。
②培养条件外植体接种到培养基上后，置于25℃±1℃培养箱中培养，先暗培养15天，再在2000Lux条件下每天光照12小时培养，25天转接，每瓶平均分化出8个组织苗。
③转接继代培养在MS+NAA1.0+BA1.0+GA0.2的分化培养基上，置于25℃±1℃培养箱中培养，2500Lux条件下每天光照12小时，40天转接一次，得到大量分化组培苗。
④生根培养在1/2MS+NAA1.0+GA0.2+BA0.1+ASP300+GLU450的培养基上进行生根培养，培养条件是25℃±1℃，3000Lux条件下每天光照12小时，42天长0.5厘米的根平均超过4.5条，4.5条是试验时，总根数除以总苗数。
⑤生根后在25℃、3000LUX下驯化移栽于保护地内，成活率达90％。
权利要求
1.一种龙芽楤木组织培养方法，其特征是包括龙芽楤木外植体的选择和消毒，接种，转接继代培养，生根培养四个过程；选择龙芽楤木当年形成的1～2厘米左右的越冬枝条，以休眠芽刚刚萌发茎尖作外植体，选晴天下午将材料剪回，室内培养至刚刚萌发，用解剖刀将芽带一块木质部切下来，用自来水冲洗干净，在超净工作台上用75％酒精消毒30～40秒；用准备的无菌干滤纸吸去经选择和消毒的龙芽楤木外植体残留水分，在超净工作台上剥取茎尖，操作时左手拿镊子把带木质部的萌芽夹住，将芽伸到解剖镜下，右手持解剖刀依次剥去休眠芽鳞片和大部分幼叶，将具有2～3片幼叶的茎尖接种到琼脂固化MS+NAA1.0+GA0.2+BA1.0的分化培养基上，保持在25±1℃温度下，先暗培养再光照下培养后，得到组织苗；把组织苗接种到MS+NAA1.0+GA0.2+BA1.0或MS+IAA0.5+GA0.5+BA1.0的培养基上，得到分化组培苗；在1/2MS+NAA0.5～1.0+GA0～0.2+BA0～0.1+ASP300+GLU450的培养基上，对组培苗进行生根培养。
2.根据权利要求1所述的龙芽楤木组织培养方法，其特征是倒出酒精后，立即用无菌水冲一遍，然后用5％次氯酸钠溶液消毒7～10分，再用无菌水冲洗3～4次备用；外植体取材较大的，可用肉眼观察，将试材放于无菌干燥滤纸上用解剖刀切取，每瓶可接种3～5个茎尖，茎尖朝上，先暗培养15～20天，再在2000LUX条件下每天光照12小时，培养20～25天，在较小愈伤组织上直接分化出7～10个组织苗；将分化出的组织苗剪下，在温度25±1℃，2000～3000LUX光照下，每天12小时培养，接种到培养基上35～45天转接一次，可以得到大量分化组培苗；在温度25±1℃，3000LUX光照下，每天12小时，35～45天形成生根小植株。
全文摘要
本发明属于生物工程技术领域，是一种龙芽楤木组织培养方法。本发明选择龙芽楤木当年形成的1～2厘米左右的越冬枝条，以休眠芽刚刚萌发茎尖作外植体，在超净工作台上剥取茎尖，把具有2～3片幼叶的茎尖接种到琼脂固化的分化培养基上。再将分化出的组织苗剪下，进行继代培养，得到大量分化组培苗，最后在培养基上对组培苗进行生根培养。应用本发明，可以快速繁殖龙芽楤木组培苗木。本发明取材量小，操作容易，分化指数高，是一种投资少，见效快，效益高的刺嫩芽生产技术。可以保持龙芽楤木植株的优良性状，并可大规模生产。本发明的应用，可有效地保护野生资源，具有良好的生态效益。
文档编号A01H4/00GK1465229SQ02144659
公开日2004年1月7日 申请日期2002年11月29日 优先权日2002年11月29日
发明者陈国双, 邵庆春 申请人:中国科学院长春地理研究所