专利名称：一种人工创制新型甘蓝型油菜的方法
技术领域：
本发明涉及作物育种技术领域，特别是涉及一种甘蓝型油菜(2i^4x-AAC038)的人工 合成新途径，具体是利用甘蓝(2n=2x=C°C°=18)和芥菜型油菜(211=^=^8^=34)种间 杂交人工合成新型甘蓝型油菜(2r^4x二A，A，C，C，-38)的方法。
背景技术：
油菜作为世界上主要油料作物之一，不仅是重要的食用油源和蛋白质饲料，而且也是 重要的工业原料和蜜源植物。我国是最早进行油菜栽培的国家之一，但过去主要进行的是 白菜型油菜栽培。在上个世纪20世纪30年代，甘蓝型油菜开始从朝鲜、日本和英国引进 并进行栽培，现已广泛分布于全国各地，尤以长江流域各省油菜主产区分布最为集中，成 为我国最重要的油料作物之一。随着人民物质生活水平的提高及油菜育种研究工作的不断 深入，人们对油菜育种目标提出了更高的要求，选育高含油量、低芥酸、低硫甙的高产优 质多抗的油菜优良品种成为当前油菜育种的主攻目标。但是，目前我国油菜大面积栽培的 甘蓝型油菜最初从国外引入，引入的时间短，在生产上所用的"双低"(低芥酸、低硫甙) 常规品种和杂交品种的遗传来源也来自于国外。因此，我国甘蓝型油菜种内遗传基础狭窄， 种内资源也随着部分品种的大量推广日益枯竭。针对这种情况，利用芸薹属种间关系研究， 通过远缘杂交导入其它种(属)有利基因，从而拓宽甘蓝型油菜遗传育种基因库，越发显得 重要。
芸薹属由白菜(B. ca即estris L. ， 2n=AA=20)、甘蓝(B. oleracea L. 2n=CC=18)、黑 芥(B. nigra L， 2n=BB=16) 3个基本种和甘蓝型油菜(B. napus L., 2n=AAC038)、埃塞俄 比亚芥(B. carinata Braun L. 2n=BBCC=34)、芥菜(B. juncea Czern&Coss L., 2n=AABB=3 6) 3个复合种组成。甘蓝型油菜主要是通过甘蓝和白菜种间天然杂交，染色体加倍后形成 的，这也成为目前人工合成甘蓝型油菜、创造新的种质资源的主要途径。通过该种途径人 工合成甘蓝型油菜存在杂交亲和难、杂种后代(合成的甘蓝型油菜)遗传稳定进度较慢、 遗传变异幅度较小等缺陷，由于其亲本组成为甘蓝和白菜，两个亲本都是菜用型作物，因 此难以选择到优良的植株性状。另外，目前在育种上还存在两种选育新型甘蓝型油菜途径， 即通过甘蓝型油菜和白菜型油菜、甘蓝型油菜和芥菜型油菜种间杂交，分别在后代中选育获得甘蓝型油菜；这两种途径杂交亲和性较好，工作简单，但是该两种途径的亲本之一是 本身就是天然的甘蓝型油菜，因此其大量分离后代中获得的甘蓝型油菜遗传基础相对狭 窄，虽然国内外也通过这种方式获得了大量在生产上使用的新材料和新品种，但是这些材 料和天然甘蓝型油菜相比较，其遗传距离相对较近，不利于亚基因组间杂种优势的利用。
迄今为止，将甘蓝和芥菜型油菜优良性状集中获得新型甘蓝型油菜的人工合成新途 径，尚未见报道。
发明内容
鉴于以上现有技术存在的缺陷，为了获得新的甘蓝型油菜合成途径，丰富甘蓝型油菜 遗传资源库，促进甘蓝型油菜遗传育种研究，本发明的目的在于提供一种人工创制新型甘 蓝型油菜的方法，该方法的技术路线是通过生物技术和常规实验手段有机结合，获得新型 甘蓝型油菜。
本发明人工创制新型甘蓝型油菜的方法，依次通过下列步骤实现
(1) 将甘蓝和芥菜型油菜进行种间杂交，用质量百分比浓度为10M的NaCl盐水涂抹 柱头+蕾期授粉，通过幼胚挽救技术获得杂种S。，并建立杂种无性系群体，Sn基因型为 2n=3x=ABC=27;
(2) 将杂种S。进行自交，蕾期辅助授粉，通过幼胚挽救技术克服其自交不亲和性获 得自交后代S"并建立其无性系群体；
(3) 将步骤(2)幼胚挽救获得的无性系群体移栽大田，进行自交，蕾期辅助授粉，
获得自交后代S2;
(4) 将获得的Sa进行自交，获得S:,;对S3进行自交获得S4;从获得的54开始进行形
态学和细胞学鉴定，在高世代材料54或S5中选育新型甘蓝型油菜。
上述方法步骤中，甘蓝为羽衣甘蓝、结球甘蓝或芥兰等。 上述方法步骤中，幼胚挽救技术、建立无性系群体等相关技术均为现有技术，在后面 的实施例中将对本发明方法作进一步详细描述。
图1为人工创制新型甘蓝型油菜的方法流程图。
本发明的优点是
以芥菜型油菜和甘蓝进行种间杂交的杂交亲和性高于白菜和甘蓝的杂交亲和性，易获 得种间杂种；同时，该途径合成新型甘蓝型油菜和以白菜和甘蓝种间杂交人工直接合成甘 蓝型油菜相比，以芥菜型油菜代替了白菜型油菜，能够将芥菜型油菜抗旱、抗寒，株型优良等优点导入到甘蓝型油菜中，其遗传稳定速度快，性状变异范围大，容易选到优良性状 的甘蓝型油菜。另外，该途径获得的甘蓝型油菜AC染色体组染色体分别来自于芥菜型油 菜和甘蓝，与现有的甘蓝型油菜遗传基础差异较大，更有利于甘蓝型亚基因组杂种优势的 利用，提高油菜生产水平。
具体实施例方式
下面结合具体的实施例来说明本发明所提供方法，所述的实施例是为了更好地解释本 发明，而不是对本发明权利要求保护范围的限制，所有基于本发明基本思想的修改和变动， 都属于本发明请求保护范围。
实施例1:
在2-4月油菜处于盛花期时，选取生长健壮的芥菜型油菜为母本，摘除已经开花和过 小的花蕾，对近卜2d将开的花蕾去雄，用质量百分比浓度为10c/。的NaCl涂抹柱头，等盐 水自然风干后授以从羽衣甘蓝健壮植株所取的花粉，授粉后迅速用纸袋套袋，防止外来花 粉传入。第二天重复授粉。
授粉后20d左右，取未成熟的幼嫩胚珠，在无菌条件下用75%的酒精表面消毒后，再 用质量百分比浓度为10%-15%的次氯酸钠消毒15-20分钟，然后接种到MS培养基上，待 其萌发后，转接到快繁培养基上进行快速繁殖，获得无性系。10-11月份左右，将无性系 转接到MS培养上，待其生根后移栽大田，并进行精细管理。
在第二年3月份左右，待鉴定为真杂种的无性系开花后，选取具有少量花粉的植株进 行强制自交(人工辅助授粉)，授粉后15-20天左右，取其胚珠进行幼胚挽救(操作步骤见上 段)，获得Si群体的无性系。
对S,群体植株仍然采用人工辅助授粉的方式进行自交，获得S2。以后继续对获得的 后代进行自交，其群体随着自交代数的增加，其自交结实率大幅度提高。到S4时，其自交 结实率趋于正常，不再需要进行辅助授粉。
从S4起，对获得的材料进行细胞学、形态学的鉴定和选择，选出染色体数目趋近于 38条，形态趋近于甘蓝型油菜的植株进行遗传育种研究。
实施例2:甘蓝选用结球甘蓝，同时进行上述实例操作。
实施例3:甘蓝选用芥兰，同时进行上述实例操作。
权利要求
1、一种人工创制新型甘蓝型油菜的方法，其特征在于依次通过下列步骤实现(1)将甘蓝和芥菜型油菜进行种间杂交，用质量百分比浓度为10％的NaCl盐水涂抹柱头+蕾期授粉，通过幼胚挽救技术获得杂种S0，并建立杂种无性系群体，S0基因型为2n＝3x＝ABC＝27；(2)将杂种S0进行自交，蕾期辅助授粉，通过幼胚挽救技术克服其自交不亲和性获得自交后代S1，并建立其无性系群体；(3)将步骤(2)幼胚挽救获得的无性系群体移栽大田，进行自交，蕾期辅助授粉，获得自交后代S2；(4)将获得的S2进行自交，获得S3；对S3进行自交获得S4；从获得的Sx开始进行形态学和细胞学鉴定，在高世代材料S4或S5中选育新型甘蓝型油菜。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，甘蓝为羽衣甘蓝、结球甘蓝或芥兰。
全文摘要
一种人工创制新型甘蓝型油菜的方法，将甘蓝和芥菜型油菜优良性状集中获得新型甘蓝型油菜。以芥菜型油菜和甘蓝进行种间杂交的杂交亲和性高于白菜和甘蓝的杂交亲和性，易获得种间杂种，同时，能够将芥菜型油菜抗旱、抗寒，株型优良等优点导入到甘蓝型油菜中，其遗传稳定速度快，性状变异范围大，容易选到优良性状的甘蓝型油菜。另外，该途径获得的甘蓝型油菜AC染色体组染色体分别来自于芥菜型油菜和甘蓝，与现有的甘蓝型油菜遗传基础差异较大，更有利于甘蓝型亚基因组杂种优势的利用，提高油菜生产水平。
文档编号A01H1/04GK101513168SQ20091010355
公开日2009年8月26日 申请日期2009年4月7日 优先权日2009年4月7日
发明者周清元, 李加纳, 殷家明 申请人:西南大学