专利名称：通过组织培养获得菩提树再生植株的方法及其培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及通过组织培养获得菩提树再生植株的方法及其培养基。
背景技术：
菩提树(Ficusrel igiosa Linn.)是桑科(Moraceae)榕属(Ficus)的常绿或半常绿大乔木，原产印度，别名菩提榕、印度菩提树等。菩提树具有速生、长寿两大特点，可高达20m，树干挺拔健壮，树形优美，枝叶繁茂，叶互生。叶片深绿色具光泽，革质，全缘，三角状卵形，基部圆形或微心形，在尖端处常有长长的尾巴。非常优雅，是优良的风景树。其高大挺拔，冬夏不凋，给人以神圣、肃穆之感，被视为“圣树”。菩提树除作为圣树供人敬仰之外， 还有很广泛的用途。如菩提树可作为园林绿化和行道树的重要树种，枝干富含的白色乳汁可制硬性树胶，树皮汁液漱口可治牙痛，菩提树叶片可在上面绘画写字并制成书签，花人药可发汗并解热镇痛，果实晾干后可做成佛珠使用。菩提树的繁殖多以扦插繁殖为主，亦可用种子繁殖，目前需要研究并推广一套高效的菩提树快繁和育苗技术。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种用于获得菩提树再生植株的培养基。本发明所提供的用于获得菩提树再生植株的培养基，是作为生根培养基，由下述质量份的营养成分组成大量元素以NH4NO3计825份、微量元素以KI计0. 83份、铁盐以FeSO4 · 7H20计 37. 3份、有机成分以烟酸计0. 5份、吲哚丁酸0. 2份-0. 5份或0. 2份或0. 3份或0. 5份、蔗糖20000份和活性炭500份-3000份或500份或2000份或3000份；所述大量元素由下述质量份的物质组成NH4NO3 825 份、KNO3 950 份、KH2PO4 85 份、CaCl2 · 2H20 220 份和 MgSO4 · 7H20 185 份；所述微量元素由下述质量份的物质组成KI 0. 83 份、Nei2MoO4 ·2Η20 0. 25 份、H3BO3 6. 2 份、CuSO4 ·5Η20 0. 025 份、MnSO4 .H2O 16. 9 份、CoCl2 · 6Η20 0. 025 份和 ZnSO4 · 7Η20 8. 6 份；所述铁盐由下述质量份的物质组成Na2EDTA · 2Η20 27. 8 份和 FeSO4 · 7Η20 37. 3 份；所述有机成分由下述质量份的物质组成烟酸0. 5份、肌醇100份、盐酸硫胺素0. 1份、盐酸吡哆醇0. 5份和甘氨酸2. 0份。所述营养成分中所述大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、吲哚丁酸、蔗糖和活性炭均独立包装。所述培养基由以下成分组成NH4NO3^KN03>KH2PO4,CaCl2 ·2H20,MgSO4 ·7Η20,ΚΙ,Na2MoO4 ·2Η20、H3BO3、CuSO4 ·5Η20、MnSO4 · H20、CoC12 · 6H20、ZnSO4 · 7H20、Na2EDTA · 2H20、FeSO4 · 7H20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、
盐酸吡哆醇、甘氨酸、喷哚丁酸、蔗糖、活性炭和水；以上成分在所述培养基中浓度分别为NH4NO3 0. 825g/L、KNO3 0. 95g/L、KH2PO4 0. 085g/L、CaCl2 · 2H20 0. 22g/L、 MgSO4 · 7H20 0. 185g/L、KI 0. 83mg/L, Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · H2O 16. 9mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L、 Na2EDTA · 2H20 27. 8mg/L, FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、吲哚丁酸 0. 2mg/L_0· 5mg/L 或 0. 2mg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 5mg/L、蔗糖 20g/L 和活性炭 0. 5g/L_3g/L 或 0. 5g/L 或 2. Og/L 或 3g/L。本发明的另一个目的是提供一种用于获得菩提树再生植株的固体培养基。本发明所提供的用于获得菩提树再生植株的固体培养基，是由凝固剂和上述用于获得菩提树再生植株的培养基配成的固体培养基。所述凝固剂的用量使上述用于获得菩提树再生植株的培养基形成固体即可；所述凝固剂在所述固体培养基中的浓度为7g/L_8g/L或7g/L或8g/L ；所述凝固剂为琼脂。所述培养基的pH值为5. 7-6. 0或5. 7或5. 75或6. 0。本发明的又一个目的是提供一种获得菩提树再生植株的方法。本发明所提供的获得菩提树再生植株的方法，包括如下步骤将菩提树再生芽接种到所述用于获得菩提树再生植株的固体培养基上进行生根培养，即得到菩提树再生植株。所述菩提树再生芽是通过包括以下步骤的方法得到的用诱导培养基诱导培养菩提树芽，得到菩提树再生芽；所述诱导培养基由以下成分组成NH4N03>KN03>KH2PO4,CaCl2 ·2H20,MgSO4 ·7Η20,ΚΙ,Na2MoO4 ·2Η20、H3BO3、CuSO4 ·5Η20、 MnSO4 · H20、CoC12 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、
盐酸吡哆醇、甘氨酸、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、活性炭和水；以上成分在所述诱导培养基中浓度分别为NH4NO3 1.65g/L、KN03 1. 90g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0· 44g/L、MgS04 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/ L、MnSO4 · H2O 16. 9mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L、Na2EDTA · 2H20 27. 8mg/L、FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L,6-苄基腺嘌呤 2. Omg/L-2. 5mg/L 或 2. Omg/L 或 2. 3mg/ L 或 2. 5mg/L、萘乙酸 0. lmg/L-0. 5mg/L 或 0. lmg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 5mg/L、赤霉素 0. 5mg/ L-l. 5mg/L 或 0. 5mg/L 或 1. Omg/L 或 1. 5mg/L、蔗糖 30g/L 和活性炭 1. 5g/L_3. Og/L 或 1. 5g/ L 或 2. Og/L 或 3. Og/L ；所述诱导培养基的pH值为5. 7-6. 0或5. 7或5. 8或6. 0。所述方法在得到菩提树再生芽之后，还包括将所述菩提树再生芽接种到增殖培养基上进行增殖培养的步骤；所述增殖培养基由以下成分组成
NH4N03>KN03>KH2PO4,CaCl2 ·2H20,MgSO4 ·7Η20,ΚΙ,Na2MoO4 ·2Η20、H3BO3、CuSO4 ·5Η20、 MnSO4 · H20、CoC12 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、
盐酸吡哆醇、甘氨酸、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、活性炭和水；以上成分在所述增殖培养基中浓度分别为NH4NO3 1.65g/L、KN03 1. 90g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0· 44g/L、MgS04 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/ L、MnSO4 · H2O 16. 9mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L、Na2EDTA · 2H20 27. 8mg/L,FeS04 ·7Η20 37. !3mg/L、烟酸0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素0. lmg/L、盐酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. 0mg/L、6-苄基腺嘌呤 2. Omg/L-2. 5mg/L 或 2. Omg/L 或 2. 3mg/L 或 2. 5mg/L、萘乙酸 0. lmg/L-0. 2mg/L 或 0. lmg/L 或 0. 2mg/L、赤霉素 Omg/L-O. 5mg/L 或 Omg/L 或 0. 2mg/L 或 0. 5mg/L、蔗糖 30g/L 和活性炭 1. 5g/L_3. Og/L 或 1. 5g/L 或 2. Og/L 或 3. Og/ L；所述增殖培养基的pH值为5. 7-6. O或5. 7或5. 8或6. O。所述菩提树外植体为菩提树新生芽。所述诱导培养是在温度为25°C _35°C、光强2000LuX-4000LuX、光周期为16小时光照/8小时黑暗、湿度为50% -70%的条件下培养20天-30天。所述增殖培养是在温度为25°C _35°C、光强2000LuX-4000LuX、光周期为16小时光照/8小时黑暗、湿度为50% -70%的条件下培养20天-30天。所述生根培养是在温度为25V _35°C、光强2000LuX-4000LuX、光周期为16小时光照/8小时黑暗、湿度为50% -70%的条件下培养20天-30天至长出10 20条根。也可在长出10 20条根后，剪切其顶芽，再经20天-30天培养至根系发达，并长出大量的侧芽。将侧芽剪切下和之前剪切的顶芽直接接入所述生根培养基，循环培养。本发明所提供的用于获得菩提树再生植株的培养基针对性强，适用性好，原始外植体诱导率达100 %，繁殖系数最高达26，生根率达100 %，移栽成活率达95 %以上。达到了仅采用少量外植体材料既能实现大批量扩繁菩提树苗的目的。菩提树在扩繁过程中，周期过长会导致苗矮小瘦弱，长势差。本发明提出的待组培苗生根后剪切其顶芽的方法，可以诱导出更多的更强壮的丛芽，大大降低了对原始外植体的需求量，并提高了其繁殖率和苗木质量，从而降低了育苗成本，并在短的周期内生产出更多的苗木。本发明所提供的通过组织培养获得菩提树再生植株的方法，具有不受地区，气候与季节限制，便于大规模生产。菩提树主要靠扦插和种子繁殖，繁殖率低并且受到各种限制，组培技术解决了这一问题。
图1为带腋芽茎段经诱导培养得到的再生芽。图2为再生芽经增殖培养得到的丛芽。图3为丛芽经生根培养后的生根状况。图4为洗干净根部培养基的组培苗。图5为将组培苗移栽到温室中的生长状况。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、通过组织培养获得菩提树再生植株 方法I一、外植体消毒取菩提树(公众可从中国科学院植物研究所获得，记载过该材料的非专利文献是陈仁利，周铁锋.菩提树的主要特征及其栽培技术[J].林业实用技术，2008，5:53 3 54.)新生芽为外植体，浸泡于流水悬冲Ih后，在无菌条件下，用无菌水冲洗1次，用70%的酒精消毒20s后转入无菌水中浸泡lmin，再用2%的次氯酸钠溶液消毒細化后转于的次氯酸钠溶液消毒細in，然后用无菌水冲洗3次，剪切成2cm 3cm带有1 2个腋芽的茎段于无菌滤纸上吸干水分。二、芽诱导培养将步骤一灭菌后的新生芽茎段接种在诱导培养基上，在温度为25°C，光强 2000LUX，光周期为16小时光照/8小时黑暗，湿度为50%的条件下培养30天，诱导出再生芽(图1)。实验设三次重复，结果取平均值，每个重复设10个外植体。再生芽诱导率(<% )=实际形成再生芽数/接种外植体数X 100%。结果再生芽诱导率为100%。所述诱导培养基由以下成分组成NH4N03>KN03>KH2PO4,CaCl2 ·2H20,MgSO4 ·7Η20,ΚΙ,Na2MoO4 ·2Η20、H3BO3、CuSO4 ·5Η20、 MnSO4 · H20、CoC12 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、
盐酸吡哆醇、甘氨酸、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、活性炭和水；以上成分在所述诱导培养基中浓度分别为NH4NO3 1.65g/L、KN03 1. 90g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0· 44g/L、MgS04 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、 MnSO4 .H2O 16. 9mg/L、CoCl2 ·6Η20 0. 025mg/L、ZnS04 ·7Η20 8. 6mg/L,Na2EDTA ·2Η20 27. 8mg/ L、FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、6-苄基腺嘌呤2. Omg/L、萘乙酸0. lmg/L、赤霉素0. 5mg/L、蔗糖 30g/L和活性炭1. 5g/L ；所述诱导培养基的pH值为5. 7。三、增殖培养将步骤二得到的再生芽转接种于增殖培养基中，在温度为25°C，光强2000LUX，光周期为16小时光照/8小时黑暗，湿度为50%的条件下培养30天，继代2次至分化形成5 26倍、芽长3 5cm的丛芽(见图2和表1)。实验设三次重复，结果取平均值，每个重复设10个再生芽。平均每个再生芽的繁殖系数为13。再生芽繁殖系数的定义为每个再生芽长出的从芽总数。表1不同编号的再生芽在增殖培养基上培养后得到的丛芽数
权利要求
1.一种用于获得菩提树再生植株的培养基，由下述质量份的营养成分组成大量元素以NH4NO3计825份、微量元素以KI计0. 83份、铁盐以!^eSO4 ·7Η20计37. 3份、 有机成分以烟酸计0. 5份、吲哚丁酸0. 2份-0. 5份或0. 2份或0. 3份或0. 5份、蔗糖20000 份和活性炭500份-3000份或500份或2000份或3000份； 所述大量元素由下述质量份的物质组成NH4NO3 825 份、KNO3 950 份、KH2PO4 85 份、CaCl2 · 2Η20 220 份和 MgSO4 · 7Η20185 份； 所述微量元素由下述质量份的物质组成KI 0. 83 份、Na2MoO4 · 2Η20 0. 25 份、H3BO3 6. 2 份、CuSO4 · 5Η20 0. 025 份、MnSO4 · H2O 16. 9 份、CoCl2 · 6Η20 0. 025 份和 ZnSO4 · 7Η20 8. 6 份； 所述铁盐由下述质量份的物质组成 Na2EDTA · 2Η20 27. 8 份和 FeSO4 · 7Η20 37. 3 份； 所述有机成分由下述质量份的物质组成烟酸0. 5份、肌醇100份、盐酸硫胺素0. 1份、盐酸吡哆醇0. 5份和甘氨酸2. 0份。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于 所述培养基由以下成分组成NH4N03、KNO3> KH2PO4, CaCl2 · 2H20、MgSO4 · 7Η20、ΚΙ、Na2MoO4 · 2Η20、H3BO3> CuSO4 · 5Η20、 MnSO4 · H20、CoC12 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、喷哚丁酸、蔗糖、活性炭和水； 以上成分在所述培养基中浓度分别为NH4NO3 0. 825g/L、KNO3 0. 95g/L、KH2PO4 0. 085g/L、CaCl2 · 2H20 0. 22g/L、MgSO4 · 7H20 0. 185g/L、KI 0. 83mg/L, Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、 MnSO4 .H2O 16. 9mg/L、CoCl2 ·6Η20 0. 025mg/L、ZnS04 ·7Η20 8. 6mg/L,Na2EDTA ·2Η20 27. 8mg/ L、FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、吲哚丁酸 0. 2mg/L_0. 5mg/L 或 0. 2mg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 5mg/L、 蔗糖 20g/L 和活性炭 0. 5g/L-3g/L 或 0. 5g/L 或 2. Og/L 或 3g/L。
3.一种用于获得菩提树再生植株的固体培养基，是由凝固剂和权利要求1或2所述的培养基配成的固体培养基。
4.根据权利要求3所述的固体培养基，其特征在于所述凝固剂在所述固体培养基中的浓度为7g/L-8g/L或7g/L或8g/L ； 所述凝固剂为琼脂。
5.根据权利要求1-4中任一所述的培养基，其特征在于 所述培养基的PH值为5. 7-6. 0或5. 7或5. 75或6. 0。
6.一种获得菩提树再生植株的方法，包括如下步骤将菩提树再生芽接种到权利要求3-5中任一所述的培养基上进行生根培养，即得到菩提树再生植株。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述菩提树再生芽是通过包括以下步骤的方法得到的 用诱导培养基诱导培养菩提树芽，得到菩提树再生芽； 所述诱导培养基由以下成分组成NH4N03、KNO3> KH2PO4, CaCl2 · 2H20、MgSO4 · 7Η20、ΚΙ、Na2MoO4 · 2Η20、H3BO3> CuSO4 · 5Η20、 MnSO4 · H20、CoC12 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、活性炭和水； 以上成分在所述诱导培养基中浓度分别为NH4NO3 1. 65g/L、KNO3 1. 90g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、 MnSO4 .H2O 16. 9mg/L、CoCl2 ·6Η20 0. 025mg/L、ZnS04 ·7Η20 8. 6mg/L,Na2EDTA ·2Η20 27. 8mg/ L、FeSO4 · 7H20 37. 3mg/L、烟酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. 0mg/L、6-苄基腺嘌呤 2. Omg/L-2. 5mg/L 或 2. Omg/L 或 2. ;3mg/L 或 2. 5mg/ L、萘乙酸 0. lmg/L-0. 5mg/L 或 0. lmg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 5mg/L、赤霉素 0. 5mg/L_l. 5mg/L 或 0. 5mg/L 或 1. Omg/L 或 1. 5mg/L、蔗糖 30g/L 和活性炭 1. 5g/L_3. Og/L 或 1. 5g/L 或 2. Og/L 或 3. Og/L ；所述诱导培养基的pH值为5. 7-6. O或5. 7或5. 8或6. O。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于所述方法在得到菩提树再生芽之后，还包括将所述菩提树再生芽接种到增殖培养基上进行增殖培养的步骤；所述增殖培养基由以下成分组成NH4N03、KNO3> KH2PO4, CaCl2 · 2H20、MgSO4 · 7Η20、ΚΙ、Na2MoO4 · 2Η20、H3BO3> CuSO4 · 5Η20、 MnSO4 · H20、CoC12 · 6Η20、ZnSO4 · 7Η20、Na2EDTA · 2Η20、FeSO4 · 7Η20、烟酸、肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、甘氨酸、6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、赤霉素、蔗糖、活性炭和水； 以上成分在所述增殖培养基中浓度分别为NH4NO3 1. 65g/L、KNO3 1. 90g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/ L、MnSO4 · H2O 16. 9mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 7H20 8. 6mg/L、Na2EDTA · 2H20 27. 8mg/L,FeS04 ·7Η20 37. !3mg/L、烟酸0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0. lmg/L、盐酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、6-苄基腺嘌呤 2. Omg/L-2. 5mg/L 或 2. Omg/L 或 2. 3mg/L 或 2. 5mg/L、萘乙酸 0. lmg/L-0. 2mg/L 或 0. lmg/L 或 0. 2mg/L、赤霉素 Omg/L-O. 5mg/L 或 Omg/L 或 0. 2mg/L 或 0. 5mg/L、蔗糖 30g/L 和活性炭 1. 5g/L_3. Og/L 或 1. 5g/L 或 2. Og/L 或 3. Og/ L；所述增殖培养基的pH值为5. 7-6. O或5. 7或5. 8或6. O。全文摘要
本专利公开了通过组织培养获得菩提树再生植株的方法及其培养基。本发明提供了一种用于获得菩提树再生植株的培养基，由下述质量份的营养成分组成大量元素以NH4NO3计825份、微量元素以KI计0.83份、铁盐以FeSO4·7H2O计37.3份、有机成分以烟酸计0.5份、吲哚丁酸0.2份-0.5份或0.2份或0.3份或0.5份、蔗糖20000份和活性炭500份-3000份或500份或2000份或3000份。本发明所提供的用于获得菩提树再生植株的培养基针对性强，适用性好，原始外植体诱导率达100％，繁殖系数最高达26，生根率达100％，移栽成活率达95％。
文档编号A01H4/00GK102257962SQ20111015421
公开日2011年11月30日 申请日期2011年6月9日 优先权日2011年6月9日
发明者吴杰, 王亮生, 舒庆艳 申请人:中国科学院植物研究所