专利名称：一种具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物农药领域，具体地，本发明涉及ー种具抑制轮纹病菌活性的生物活性物质及其应用。
背景技术：
我国的苹果种植面积很大,轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)引起的苹果轮纹病是危害苹果生产的ー种最为严重的病害之一，且难以防治，目前仍以化学防治为主。苹果轮纹病在我国主要苹果产区都有发生，严重时可对果园造成毁灭性破坏，给苹果产业造成重大损失。苹果的整个生长期均可被轮纹病菌侵染。轮纹病菌还危害苹果树的树体，夺取树体营养，分泌毒素毒害果树，减弱苹果树势，影响树体正常生长，严重的造成枝干枯死，甚至导致整树死亡。不仅如此，患轮纹病的枝干将成为产生再次侵染新生苹果枝条和苹果果实的菌源，导致轮纹病危害的再次发生。轮纹病菌对苹果果实的危害也很大，苹果果实从 接近成熟开始发病，储藏期继续发病，造成大量烂果，导致严重的直接经济损失。据专家报道我国毎年因轮纹病危害造成的直接经济损失就达30亿到50亿元人民币。轮纹病菌除危害苹果外，还能危害梨、桃、李、杏、葡萄、栗树、海棠、山楂等果树，为上述果品生产的重大威胁。轮纹病近年有蔓延加重趋势，2006年首次报道轮纹病菌能够引起bark dieback of European hop hornbean ;2010年首次报道轮纹病菌能够感染SweetOsmanthus Leaf Dieback。一直以来，苹果轮纹病都以化学防治为主。由于苹果的整个生长期均可被轮纹病菌侵染，因此需要频繁的施药。因为长期连续用药，轮纹病菌已经产生了明显的抗药性，使轮纹病的发生越来越重。现在的轮纹病菌已经对常用的多种杀菌剂产生了不同程度的抗药性或耐药性，例如甲基托布津、代森锰锌、炭疽福美、大生M-45等药剂对轮纹病的防治效果均已显著下降了。长期连续用药，不仅引起病菌抗药性，同时可造成果实中农药的残留和生态环境的污染。化学农药对农产品的污染问题已经成为我国农产品质量安全的绊脚石。我们必须清醒地认识到该问题的严重性，切实保障农产品质量安全和环境生态安全。所以亟待研制开发生物药剂。
发明内容
本发明从伞形科植物独活(Angelica pubescens Maxim, f. biserrata)的干燥根中提取纯化了生物活性物质。本发明的目的是提供ー种具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质。本发明的再一目的是提供上述生物活性物质的应用。本发明的再一目的是提供ー种生物农药。根据本发明的具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质，通过包括以下步骤的方法制备
I)称取独活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脱脂I小时；2)然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小时，回收至干；3)用水转移出提取物，萃取得干膏。根据本发明的生物 活性物质，其中，在步骤2)中，こ醇回流三次，过滤，合并滤液。根据本发明的生物活性物质，其中，在步骤3)中，加氯仿萃取两次，回收氯仿，得干膏。根据本发明的生物农药，其中，包含通过以下步骤制备的具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质I)称取独活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脱脂I小时；2)然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小时，回收至干；3)用水转移出提取物，萃取得干膏。根据本发明的具体实施方式
，生物活性物质的提取纯化过程如下称取独活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脱脂I小时，然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小时，共三次，过滤，合并滤液，回收至干。用水转移出堤取物，加氯仿萃取两次，回收氯仿，得干膏。根据以上所述的苹果轮纹病菌的危害特点，应用来源于天然中药材，对人、畜安全，不污染环境的生物药剂防治更有其突出的优势。因此本发明的具抑制轮纹病菌活性的生物活性物质具有重要的经济效益和生态效益的双重意义。
图I显示了本发明的生物活性物质对苹果轮纹病菌室内毒力測定結果。
具体实施例方式实施例I提取生物活性物质称取独活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小吋，45°C回流脱脂I小时，然后用7-10倍量的75%こ醇回流1-2小时，共三次，过滤，合并滤液，回收至干。用水转移出堤取物，加氯仿萃取两次，回收氯仿，得干膏。实施例2生物活性物质抗轮纹病菌活性检测经山东烟台农业科学研究院植物保护研究所(农业部认证的国内外农药登记田间药效试验承担単位)专家鉴定，上述生物活性物质对苹果轮纹病菌具有抑制作用。试验结果如下表I结果表明，生物活性物质对苹果轮纹病菌菌丝生长具有一定的抑制作用，其500 μ g · ml/1实测抑制生长率达87%以上；最小二乗法统计结果表明，生物活性物质对苹果轮纹病菌毒カ回归方程为y = 4. 1687+0. 6748x，EC50和EC9tl值分别为17. 0536yg*mr\1344. 4308 μ g · mじ1。表ISC对苹果轮纹病菌菌丝生长毒カ
权利要求
1.一种具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质，其特征在于，所述生物活性物质通过包括以下步骤的方法制备 1)称取独活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小时，45°C回流脱脂I小时； 2)然后用7-10倍量的75%乙醇回流1-2小时，回收至干； 3)用水转移出提取物，萃取得干膏。
2.根据权利要求I所述的生物活性物质，其特征在于，在步骤2)中，乙醇回流三次，过滤，合并滤液。
3.根据权利要求I所述的生物活性物质，其特征在于，在步骤3)中，加氯仿萃取两次，回收氯仿，得干膏。
4.权利要求I所述活性物质的应用。
5.一种生物农药，其特征在于，包含通过以下步骤制备的具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质 1)称取独活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡I小时，45°C回流脱脂I小时； 2)然后用7-10倍量的75%乙醇回流1-2小时，回收至干； 3)用水转移出提取物，萃取得干膏。
全文摘要
本发明涉及生物农药领域，具体地，本发明涉及一种具抑制轮纹病菌活性的生物活性物质及其应用。根据本发明的具有抑制轮纹病菌活性的生物活性物质，通过包括以下步骤的方法制备1)称取独活干燥根粗粉，先用6倍量石油醚浸泡1小时，45℃回流脱脂1小时；2)然后用7-10倍量的75％乙醇回流1-2小时，回收至干；3)用水转移出提取物，萃取得干膏。根据本发明的生物活性物质，其中，在步骤2)中，乙醇回流三次，过滤，合并滤液。本发明的具抑制轮纹病菌活性的生物活性物质具有重要的经济效益和生态效益的双重意义。
文档编号A01P3/00GK102657240SQ20121011898
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月21日 优先权日2012年4月21日
发明者王英姿, 都晓伟, 黄其满 申请人:中国农业科学院生物技术研究所, 黄其满