专利名称：提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法
技术领域：
本发明涉及农业种植领域，尤其是一种提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法。
背景技术：
甘蓝型油菜Sral5lSica napus L是三种油用油菜(白菜型油菜、芥菜型油菜、甘蓝 型油菜)中籽粒产量最高的种类，目前在我国长江游流域大量种植，是我国最重要的油料作物。甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率是种质资源创新的一个关键，在甘蓝型油菜小孢子培养过程中，产胚率低的原因很多归咎与植株的基因型，在国内外甘蓝型油菜小孢子培养中，一般情况每个花蕾的产胚量只有几十个，有的甚至只有几个。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高甘蓝型油菜花粉小孢子产胚率的方法，它能显著提高甘蓝型油菜花粉小孢子产胚率，以克服现有技术的不足。本发明是这样实现的提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法，将甘蓝型油菜的播种时间提前，比当地油菜正常播种季节提前3 10天，并在播种前先施加底肥；从田间播种到开花期期间保持土壤水分充裕，在开花前30 40天重施追肥I次；在开花期 时进行田间取蕾，选取植株长势旺、分枝多、主花序及一次分枝上的花蕾足够多的花蕾进行取蕾，取花蕾上从外到内第3 4环的花蕾；将取得的花蕾用B5-13培养基分离出游离小孢子，然后用含有200mg/L秋水仙素的NLN-13培养基将游离小孢子分装成15蕾/皿，首先在32°C下暗培养24小时，然后更换成不含秋水仙素的NLN-13培养基，继续在32°C暗培养48小时后转移到25°C暗培养10 15天，即可获得诱导出来的胚状体。所述的底肥以有机肥为主，在有机肥中增施磷、钾、硼肥，施加量为有机肥2500 3500公斤/亩,过磷酸韩75 85公斤/亩,氯化钾或硫酸钾20 30公斤/亩及硼砂I I. 5公斤/亩。所述的追肥为尿素为20公斤/亩、复合肥20公斤/亩、清粪水2500 3000公斤/亩及堆渣肥2000 2500公斤/亩。将游离小孢子在培养皿中培养25 28天，将培养基更换为新的NLN-13培养基，然后在3°C的冰箱内保存15 150d，这样的方式可以解决现有技术中胚状体或苗越夏难的问题。该方式包括胚状体从保存时间到换液次数，以及最长保存时间全部技术，都极大减少人力、财力和物力，提高利用甘蓝型油菜小孢子培养创新种质资源的效率，对于创新种质资源、尤其是特优和特异种质资源具有重要作用。为了进一步验证本发明的实验效果，进行了如下实验
I、材料与方法
I. I、试验时间及地点
试验设在地处重庆北碚地区，平均海拔260m，年平均气温14. 50C，无霜期平均265d，年平均降水量1200_。属岩盆地地貌，试验地为西南大学校内农场，位于重庆市北碚区天生路，施肥、管理比较方便，土壤为黄壤土。I. 2试验设计
试验设4个处理，包括方案I、方案2、方案3及常规方案(对照)，每个处理面积49. Im2,处理重复2次。方案I、方案2及方案3中施肥、取蕾及培养的具体内容对应实施例I、实施例2及实施例3。表I
权利要求
1.一种提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法，其特征在于将甘蓝型油菜的播种时间提前，比当地油菜正常播种季节提前3 10天，并在播种前先施加底肥；从田间播种到开花期期间保持土壤水分充裕，在开花前30 40天重施追肥I次；在开花期时进行田间取蕾，选取植株长势旺、分枝多、主花序及一次分枝上的花蕾足够多的花蕾进行取蕾，取花蕾上从外到内第3 4环的花蕾；将取得的花蕾用B5-13培养基分离出游离小孢子，然后用含有200mg/L秋水仙素的NLN-13培养基将游离小孢子分装成15蕾/皿，首先在32°C下暗培养24小时，然后更换成不含秋水仙素的NLN-13培养基，继续在32°C暗培养48小时后转移到25°C暗培养10 15天，即可获得诱导出来的胚状体。
2.根据权利要求I所述的提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法，其特征在 于所述的底肥以有机肥为主，在有机肥中增施磷、钾、硼肥，施加量为有机肥2500 3500公斤/亩，过磷酸韩75 85公斤/亩,氯化钾或硫酸钾20 30公斤/亩及硼砂I I. 5公斤/亩。
3.根据权利要求I所述的提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法，其特征在于所述的追肥为尿素为20公斤/亩、复合肥20公斤/亩、清粪水2500 3000公斤/亩及堆渣肥2000 2500公斤/亩。
4.根据权利要求I所述的提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法，其特征在于将游离小孢子在培养皿中培养25 28天，将培养基更换为新的NLN-13培养基，然后在3°C的冰箱内保存15 150d。
全文摘要
本发明公开了一种提高甘蓝型油菜花粉小孢子培养产胚率的方法，将甘蓝型油菜的播种时间提前，比当地油菜正常播种季节提前5～10天，并在播种前先施加底肥；从田间播种到开花期期间保持土壤水分充裕，在开花前30～40天重施追肥1次；在开花期时进行田间取蕾，选取植株长势旺、分枝多、主花序及一次分枝上的花蕾足够多的花蕾进行取蕾，取花蕾上从外到内第3～4环的花蕾；将取得的花蕾用B5-13培养基分离出游离小孢子，经过培养后，即可获得诱导出来的胚状体。结果每个花蕾的产胚量都超过了500个胚。本发明的方法简单，容易实施，成本低廉，使用效果好。
文档编号A01C21/00GK102640704SQ20121016196
公开日2012年8月22日 申请日期2012年5月23日 优先权日2012年5月23日
发明者李加纳, 李超, 杨斌, 林茂, 殷家明, 肖华贵, 饶勇 申请人:贵州省油料研究所