一种四季桂组培快繁方法
【专利摘要】本发明为一种四季桂组培快繁的方法。该方法通过组织培养离体的四季桂外植体，诱导其在培养瓶中生长发根，从而大大提高其增殖系数，缩短育苗周期，达到快速繁育的目的。本技术的实施包括以下具体步骤：取四季桂当年生半木质化或木质化茎尖，用75％的酒精和0.1％的升汞进行消毒；将消毒后的外植体接种于初代培养基中；培养10～20天后，将长势健壮未染菌的外植体转移至继代培养基中继续培养；待腋芽萌发生长至1～2cm左右，将外植体转入生根培养基；将诱发出不定根的无菌苗进行3-5天的炼苗后，移栽至含营养土的塑料钵内，温室培养后获得成苗。
【专利说明】一种四季桂组培快繁方法
【技术领域】
[0001]本发明属于农林业【技术领域】，具体涉及一种四季桂组培快繁的方法。
【背景技术】
[0002]桂花的常规扦插因受季节时间、地区环境差异和桂花生长速度等因素的限制，存在生根慢、生长慢、扩繁周期长和扩繁倍数低等缺陷，尤其对于一些珍贵的优良品种，由于来源稀缺而导致迟迟不能推广。利用植物组织培养技术来弥补常规育苗的不足，对于来源稀缺的珍贵桂花品种的推广具有极大的应用价值。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于利用植物离体再生的特性，通过组织培养构建四季桂的离体再生系统，从而达到增加桂花扩繁增殖倍数，减少生根所需时间，提高产量。
[0004]本技术的实施包括以下具体步骤:
[0005](I)外植体的选取和消毒:取四季桂当年生的茎尖，剪成小段后，用酒精和升汞进行消毒；
[0006](2)初代培养:配制初代培养基并灭菌，将消毒后的外植体在无菌操作台上接种于初代培养基中，在光照培养室进行培养，每天光照14小时，温度控制在为20?26°C ；
[0007](3)增殖继代培养:初代培养10?20天后，将未染菌的外植体转移至继代培养基中继续培养；
[0008](4)生根培养:继代培养I个月左右，将腋芽萌发长度超过Icm的外植体转移至生根培养基中继续培养；
[0009](5)炼苗移栽:生根20天后，将生根的培养瓶移至大棚并敞开瓶口，炼苗3?5天后，将瓶苗移出培养瓶洗净附着的培养基，最后移至装有营养土的塑料钵中。
【具体实施方式】
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[0010](I)外植体的选取和消毒:选取当年生半木质化或木质化的四季桂茎尖，取回后用肥皂清洗2?3遍，再用流水冲洗0.5?I小时，之后在无菌操作台上用消过毒的镊子和解剖刀将外植体切成I?2厘米长的小段，每段至少含一个腋芽，用消毒的纱布包裹住以75%的酒精处理10?30秒，再用0.1 %的升汞处理3?10分钟，最后用无菌水漂洗3?6遍。
[0011](2)初代培养:将消毒处理后的外植体在无菌操作台上接入初代培养基中，在光照培养室进行培养，每天光照14小时，温度控制在为20?26°C ;培养基成份为B5基础培养基+3%的蔗糖+0.7%的琼脂粉，pH为5.8，并添加10%的桂花叶浸出物，培养基配制好后进行高压灭菌；所述桂花叶浸出物用新鲜桂花叶1g在研钵中研磨碎后，加入10ml水混合后用滤纸过滤，取滤液。
[0012](3)增殖继代培养:初代培养10?20天后，将未染菌的外植体转移至继代培养基中继续培养，每两周更新一次培养基，继代时截去底端褐化部分I?2mm ;继代培养基的成份是在初代培养基的基础上添加I?2mg/L的6-苄氨基嘌呤和0.2?0.5mg/L的吲哚丁酸。
[0013](4)生根培养:继代培养I个月左右，将腋芽萌发长度超过Icm的外植体转移至生根培养基中继续培养，生根培养时，先进行5?10天左右的暗培养，再移至光照培养室进行正常培养；生根培养基的成份是在初代培养基的基础上添加I?2mg/L的萘乙酸和2?3mg/L的B引哚丁酸。
[0014](5)炼苗移栽:生根20天后，将生根的培养瓶移至大棚并敞开瓶口进行炼苗，炼苗时在瓶内喷洒10%的多菌灵，保持其湿度不低于70%，炼苗3?5天后，将瓶苗移出培养瓶洗净附着的培养基，最后移至装有营养土的塑料钵中；营养土宜采用肥沃的黄土并添加少量陶粒，移栽前的营养土要用多菌灵浇透。
[0015]需要说明，根据上述说明书的阐述，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行变更和修改。因此，本发明并不局限于上面所述的【具体实施方式】，对本发明的一些等同修改和变更也应当在本发明的权利要求的保护范围。同时，本说明书中使用的一些特定的术语并不对本发明构成任何限制。
【权利要求】
1.一种四季桂组培快繁的方法，其主要技术实施步骤为: (1)外植体的选取和消毒:取四季桂当年生的茎尖，剪成小段后，用酒精和升汞进行消毒； (2)初代培养:配制初代培养基并灭菌，将消毒后的外植体在无菌操作台上接种于初代培养基中，在光照培养室进行培养，每天光照14小时，温度控制在为20?26°C ； (3)增殖继代培养:初代培养10?20天后，将未染菌的外植体转移至继代培养基中继续培养； (4)生根培养:继代培养1个月左右，将腋芽萌发长度超过1cm的外植体转移至生根培养基中继续培养； (5)炼苗移栽:生根20天后，将生根的培养瓶移至大棚并敞开瓶口，炼苗3-5天后，将瓶苗移出培养瓶洗净附着的培养基，最后移至装有营养土的塑料钵中。
2.如权利要求1所述的四季桂组织培养快繁方法，其特征在于:选取当年生半木质化或木质化的四季桂茎尖，取回后用肥皂清洗2?3遍，在用流水冲洗0.5?1小时，之后在无菌操作台上用75%的酒精处理10?30秒，再用0.1%的升汞处理3?10分钟，最后用无菌水漂洗3?6遍。
3.如权利要求1所述的四季桂组织培养快繁方法，其特征在于:初代培养基成份为B5基础培养基+3%的蔗糖+0.7%的琼脂粉，pH为5.8，并添加10%的桂花叶浸出物，培养基配制好后进行高压灭菌。
4.如权利要求1所述的四季桂组织培养快繁方法，其特征在于:继代培养基的成份是在初代培养基的基础上添加1?2mg/L的6-苄氨基嘌呤和0.2?0.5mg/L的吲哚丁酸；生根培养基的成份是在初代培养基的基础上添加1?2mg/L的萘乙酸和2?3mg/L的吲哚丁酸。
5.如权利要求1所述的四季桂组织培养快繁方法，其特征在于:在生根培养时，先进行5?10天的暗培养，再移至光照培养室进行正常培养。
6.如权利要求1所述的四季桂组织培养快繁方法，其特征在于:炼苗时在瓶内喷洒10%多菌灵，保持其湿度不低于70%，移栽前的营养土要用多菌灵浇透。
【文档编号】A01H4/00GK104351048SQ201410556952
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】王迅, 蔡金术, 谢云军, 向盈, 曹莉 申请人:深圳文科园林股份有限公司