一种枯草芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明为一种枯草芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用，涉及微生物筛选【技术领域】，具体提供了一株从蔬菜大棚的土壤中筛选到的枯草芽孢杆菌FX1，保藏编号CCTCC NO：M2014563。所述菌株具有很强的抑菌效果，可广泛应用于植物病害的防治。所述菌株对黄瓜白粉病的防治效率高达95.5%，对草莓白粉病的防治效率高达94.8%，对葡萄褐斑病的防治效率高达83.2%。除了植物白粉病和褐斑病外，所述枯草芽孢杆菌FX1还对由镰刀菌和立枯丝核菌引起的植物黄腐病和果腐病均有明显的拮抗作用，防治效率能达到80%以上，前景广阔。CCTCC NO:M201456320141112
【专利说明】一种枯草芽孢杆菌及其在植物病害防治中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物筛选【技术领域】，具体涉及一种枯草芽孢杆菌及其在植物病害防 治中的应用。
【背景技术】
[0002] 随着植物种类的不断增多，植物栽培方式的不断多样化，植物病害日趋严重，而传 统的化学防治方法存在着许多弊端，比如：化学农药的大量使用引起了严重的环境污染，农 产品的农药残留也越来越严重，病菌抗药性产生速度也越来越快等一系列对人民生活有害 的影响。在当今倡导低碳经济、环保节约型社会中，寻求能保护人类生活又可增产的新技术 十分适应当今社会的发展。
[0003] 生物防治是利用一种生物或其产物对付另外一种生物的方法，分为以虫治虫、以 菌治虫、以菌治菌三大类。它利用了生物物种间的相互关系，以一种或一类生物或其产物抑 制另一种或另一类生物。生物防治的方法有很多，微生物防治就是其中一种。微生物防治 主要是利用有益的微生物，通过生物间的竞争作用、抗生作用、寄生作用、溶菌作用及诱导 抗性等，来抑制某些病原物的存活和活动，其优越性在于资源丰富、选择性强、无残留、无污 染、成本低，兼防兼治、增产增收、保持生态平衡，起到长效的作用。
[0004] 用于生物防治的微生物主要包括真菌、细菌、放线菌和酵母菌等很多生物种群，其 中真菌主要包括木霉、毛壳菌、青霉菌、菌根真菌等，细菌主要包括芽孢杆菌、假单胞菌、土 壤放射杆菌等。其中，芽孢菌的抑菌范围很广，包括根部病害、枝干病害、叶华部病害和和收 获后果品病害，如棉花枯萎病、黄萎病、立枯病等。由于其具有内生芽孢，抗逆性强，营养需 求简单，繁殖速度快，并在植物根圈易于定殖，所以被广泛应用于植物病害的生物防治中。 目前应用于生防的芽孢杆菌种类主要有枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘 芽孢杆菌和短小芽孢杆菌等。
[0005] 利用拮抗微生物防治植物病害是当今植物病理学界十分活跃的研究领域之一。实 践证明，引进对病原菌有拮抗作用的细菌防治植物病害，是一种经济有效且无副作用的防 治途径。在植物的生长环境中有丰富的微生物种类，开发有益芽孢杆菌潜力很大，但生防芽 孢杆菌防病效果有时不稳定，不同区域筛选到的芽孢杆菌其防病效果差异很大，所以开发 更多有益的芽孢杆菌是研制生防菌剂的重点之一。
【发明内容】
[0006] 本发明为解决现有技术问题，提供了一种枯草芽孢杆菌及其应用。所述枯草芽孢 杆菌是从蔬菜大棚的土壤中筛选分离到的，具有很强的抑菌效果，能有效防治植物病害。
[0007] 本发明一方面涉及一种枯草芽抱杆菌FXl (Bacillus subtilis FX1)，已于2014年 11月12日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2014563。
[0008] 本发明一方面涉及一种生防制剂，包含上述枯草芽孢杆菌FX1。
[0009] 本发明还涉及上述生防制剂在植物病害防治中的应用。
[0010] 所述植物病害为黄瓜白粉病、草莓白粉病、葡萄褐斑病、植物黄腐病和果腐病中的 任意一种。
[0011] 所述生防制剂在植物病害防治中的应用，具体方法为将生防制剂稀释0-700倍， 优选500-700倍。
[0012] 本发明从蔬菜大棚的土壤中筛选到了一株新型枯草芽孢杆菌FX1。所述菌株具有 很强的抑菌效果，可广泛应用于植物病害的防治。所述菌株对黄瓜白粉病的防治效率高达 95. 5%，对草莓白粉病的防治效率高达94. 8%，对葡萄褐斑病的防治效率高达83. 2%。除 了植物白粉病和褐斑病外，所述枯草芽孢杆菌FXl还对由镰刀菌和立枯丝核菌引起的植物 黄腐病和果腐病均有明显的拮抗作用，防治效率能达到80%以上，前景广阔。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合具体实施例进一步阐述本发明。对于实施例中所用到的具体方法或材 料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选 择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。
[0014] 实施例1菌株筛选与分离
[0015] 1、土样稀释液的制备：
[0016] 从海阳北城阳村蔬菜大棚取回土壤，称取0. 5g 土壤样品溶于4. 5ml无菌水中制成 1 :10的土壤溶液，然后从中吸取0. 5ml 土壤溶液置于4. 5ml无菌水中，制成1 :100的土壤 溶液，以此方法类推，制备I =IO6-IO7的土壤稀释溶液。
[0017] 2、菌株分离与纯化：
[0018] 取3-4个适宜浓度的稀释液0. Iml均匀涂布于营养琼脂培养基上；37°C培养2d后 取出，挑取单个菌落继续分离纯化，直至每个平板上长出的菌落形态颜色一致，即为单一菌 株。
[0019] 采用上述方法， 申请人:共筛选出12株菌，分别命名为FX1、FX2、FX3、……FX12。
[0020] 3、病原菌对峙实验：
[0021] 在PDA平板中心处接种直径约为5mm的单丝壳白粉菌（该菌为黄瓜白粉病的主要 病原菌之一，是由发明人苑伟伟于2013年6月筛选自青岛市城阳区惜福镇黄瓜种植大棚 中）菌饼；在PDA平板的四个角上分别接种等量的菌株FX1、FX2、FX3、……FX12,30°C培养 3天后，观察对峙效果。根据抑制圈的大小进行筛选， 申请人:共得到四株对单丝壳白粉菌具 有较强抑制作用的菌株，分别为FX1、FX4、FX6和FX10。
[0022] 实施例2黄瓜白粉病防治效果验证实验
[0023] 1、菌液制备
[0024] 将筛选到的四株菌FX1、FX4、FX6、FX10分别接种于营养肉汤培养基，30°C培养2-3 天，得到活菌含量为l〇 8_l〇9cfu/ml的菌液。
[0025] 2、实验过程
[0026] 1)实验组：分别使用相同用量的FX1、FX4、FX6、FX10四株菌喷洒黄瓜叶片；每株菌 设三个处理组，每个处理组为随机选择的两垄黄瓜，共100棵，各处理组之间设置保护行。
[0027] 在黄瓜的生长中期，将上述菌液分别加水稀释500倍后，均匀喷洒在各处理组的 黄瓜叶片上；每次喷洒间隔7天，连用三次；最后一次喷洒完菌液10天后，检查各处理组黄 瓜白粉病的发病情况。
[0028] 2)对照组：使用不含菌的营养肉汤培养基喷洒黄瓜叶片，其他操作与实验组均相 同。
[0029] 3、结果分析
[0030] 病害分级标准：0级无病斑；1级：病斑面积占叶面积的1/4以下；2级：病斑面积 占叶面积的1/4-2/4 ;3 :病斑面积占叶面积的2/4-3/4 ;4级：病斑面积占叶面积的3/4以 上。
[0031] 病情指数=[Σ (病级值X该级发病叶数V(调查总叶数X最高病级 值）]X100%
[0032] 防治效率的计算公式=[1_(处理的病情指数/对照的病情指数）]X 100%。
[0033] 以SPSS统计软件对实验数据进行分析，结果如表1所示：
[0034] 表1黄瓜白粉病防治试验
[0035]
【权利要求】
1. 一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，保藏编号为CCTCC N0:M2014563。
2. -种生防制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的枯草芽孢杆菌。
3. 权利要求2所述的生防制剂在植物病害防治中的应用。
4. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的植物病害为白粉病、褐斑病、黄腐病 和果腐病中的任意一种。
5. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的应用是将生防制剂稀释0-700倍。
6. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的应用是将生防制剂稀释500-700倍。
【文档编号】A01N63/00GK104403970SQ201410699358
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月27日 优先权日:2014年11月27日
【发明者】苑伟伟, 王鹏, 唐波, 朱彩彩, 甄丽, 刘鲁民 申请人:青岛蔚蓝生物集团有限公司