专利名称：：用于防治植物病害的补骨脂酚的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种化合物，特别是涉及一种用于防治植物真菌病害的补骨脂酚。技术背景植物病害是农业生产的大敌，据联合国粮农组织(FAO)统计，每年因植物遭受病害造成的减产平均损失为总产量的10%15%。目前防治植物病害的主要手段为化学杀菌剂。但由于化学农药潜在的对人类健康的危害、对环境的污染、对非靶标生物的影响、植物病原菌抗性的发展及人类健康、环保意识的增强，使得化学农药的发展受到了来自各方面的限制。研制开发与推广应用安全、高效的生物农药己成为现代农药的主流，由于植物杀菌剂来源于自然，具有对人、畜安全，不污染环境，不易引起抗药性，在自然环境中易于降解等优点，因此研究与开发安全性高的植物源农药，具有广阔的社会应用前景。天然有效成分补骨脂酚(Bakuchiol)以及化学合成的类似物，对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等多种常见植物病害具有很好的抑菌活性。补骨脂酚新功能的发现，可以为具有自主知识产权的植物源生物农药的开发提供理论依据。同时，补骨脂酚作为先导化合物创制新药可以把植物农药和化学农药的优点集于一身，是国内外农药创制的热点之一。
发明内容本发明的目的在于提供一种用于防治植物真菌病害的补骨脂酚，该化合物可作为杀菌剂用于防治多种植物病害，如苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜炭疽病菌和辣椒疫霉病菌等。本发明的目的是通过以下技术方案实现的用于防治植物病害的补骨脂酚，该化合物是将5kg补骨脂种子粉碎，用70%乙醇在室温条件下浸提4次，合并提取液，减压旋转蒸发后得浸膏1200g;将所得浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇进行系统溶剂萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g;四氯化碳部分经硅胶柱，用氯仿和乙酸乙酯进行梯度洗脱，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脱物；氯仿洗脱物再经硅胶柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脱，流份1一25为石油醚和乙酸乙酯洗脱物，经反复纯化得到补骨脂酚。如上所述的用于防治植物病害的补骨脂酚，该补骨脂酚为油状液体，254nm下显紫色荧光，EI-MS给出分子离子峰[M-H]+为m/z=255.2;13C—NMR(CDCl3)d:23.35(C-1)，135.88(C-2)，126.45(C-3)，23.22(C-4)，42.51(C-5)，41.27(C陽6)，127.36(C陽7)，124.80(C-8)，130.92(C-9)，131.281(010)，115.34(C-11)，154.59(C-12)，115.34(C-13)，131.28(C-14),25.67(C-15),145.95(C-16)，111.86(C-17),17.62(C-18);NMR(CDCl3)dppm:1.67(3H，H-1)，5.11(1H，J=8.1Hz,H-3)，1.95(2H，H-4)，1.49(2H，H-5)，6.05(1H，J=16.5Hz，H-7)，6.25(1H，J=16.9Hz，H-8)，7.25(1H，J=7.5，H-IO)，6.77(1H，J=8.4Hz，H-ll)，16.77(1H，H-13)，17.25(1H，H-14)，1.19(3H，H-15)，5.86(1H，H-16)，5.02(2H，J=4.2，9.9Hz，H-17)，1.58(3H，H-18);补骨脂酚结构式HO本发明的优点与效果是1.补骨脂酚是天然有效成分，本身作为农用杀菌剂具有高效、低毒、低残留、不易产生抗药性等特点。2.药效高。补骨脂酚、福美胂、银泰、甲基托布津、多菌灵5种原药对苹果腐烂病菌菌丝生长的抑制作用EC5。分别为6.12、8.93、26.18、9.16、10.47mg/L。可见，补骨脂酚的抑菌活性高于防治苹果腐烂病菌的其它药剂。3.杀菌谱广。补骨脂酚对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等多种常见植物病害均具有很好的抑制活性。具体实施方式本发明的化合物补骨脂酚是将5kg补骨脂种子粉碎，用70%乙醇在室温条件下浸提，固液比为l:5g/mL，提取4次，每次3小时，合并提取液，减压旋转蒸发后得浸膏1200g。将所得浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇进行系统溶剂萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g。四氯化碳部分经硅胶柱(100-200目，700g，6.0X80cm)，用氯仿乙酸乙酯(l:0，20:1，10:1，5:l)梯度洗脱，流速2.5mL/min，每50mL为l流份，通过薄层层析检测，合并具有相同Rf值的流份，得到A、B、C、D四部分，A(流份9-52)为氯仿洗脱物。A经硅胶柱(200-300目，70g，2.5X40cm)，用石油醚乙酸乙酯(7:1-1:l)梯度洗脱，流速1.5mL/min，每10mL为1流份，流份1—25为石油醚乙酸乙酯(7:1)洗脱物，经反复纯化得到补骨脂酚(24mg)。实例1:用丙酮或二甲基亚砜将补骨脂酚溶解配成10g/L的粗提物母液。加入适量粗提物母液于5(TC的PDA培养基中，充分混匀，配成粗提物终浓度分别为0.12mg/L、0.6mg/L、3mg/L、15mg/L、75mg/L的含药培养基，以等体积的丙酮或二甲基亚砜加入到PDA培养基中作对照，然后倒入直径90mm培养皿内制成平板，备用。用直径6mm的打孔器从事先在PDA平板上28'C下培养7-12d的各供试病菌菌落边缘处切取菌饼，并移植于上述含不同浓度的粗提物平板和对照平板中央，每次处理重复3次，置28"C下培养7-12d，测量菌落直径。每菌落取相交垂直线方向测其直径，以其均值减去菌饼直径即得菌落净生长直径(CK)，相对抑制率(％)=(对照净生长量一处理净生长量)/对照净生长量XIOO。根据病菌抑制率等有关指标，采用相应的数据分析软件，计算出EC5Q值及EC9。值限。补骨脂酚对几种常见植物病原菌菌丝生长的抑制作用。苹果苹果水稻水稻黄瓜黄瓜小麦辣椒抑制腐烂轮纹稻瘟纹枯炭疽枯萎赤霉疫霉作用病菌病菌病菌病菌病菌病菌病菌病菌EC506.127.2210.6635.3050.2018.124.6641.00(mg/L)EC卯204.50182.1346.30201.10166.0691.0132.25209.10Cmg/L)实例2:试验方法同实例l，补骨脂酚、福美胂、银泰、甲基托布津、多菌灵6种原药对苹果腐烂病菌菌丝生长的抑制作用如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本发明的化合物补骨脂酚，对苹果腐烂病菌(W/^mfl/f)，苹果轮纹病菌(尸一fl/os/ora/H'n.co/fl)，水禾舀禾舀瘟病菌(i^/7'cw/fln'flo，fle)，水禾舀纹枯病菌(朋&o"om'flso/flm'Xw/m)，黄瓜枯萎病菌(Fwsfln'Mwio平jwww)，小麦赤霉病菌(G她ere/Zfl2eae)，黄瓜炭疽病菌(Co//etoWc/iMmorWcw/flre),辣椒疫霉病菌(尸一op/^/ion2c"戶'a')等多种植物病原菌具有很好的抑制活性。权利要求1.用于防治植物病害的补骨脂酚，其特征在于该化合物是将5kg补骨脂种子粉碎，用70％乙醇在室温条件下浸提4次，合并提取液，减压旋转蒸发后得浸膏1200g；将所得浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇进行系统溶剂萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g；四氯化碳部分经硅胶柱，用氯仿和乙酸乙酯进行梯度洗脱，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脱物；氯仿洗脱物再经硅胶柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脱，流份1-25为石油醚和乙酸乙酯洗脱物，经反复纯化得到补骨脂酚。2.根据权利要求1所述的用于防治植物病害的补骨脂酚，其特征在于，该补骨脂酚为油状液体，254nm下显紫色荧光，EI-MS给出分子离子峰[M-H]+为m/z=255.2;13C—NMR(CDCl3)d:23.35(C-1)，135.88(C-2)，126.45(C-3)，23.22(C-4)，42.51(C-5)，41.27(C-6)，127.36(C-7)，124.80(C-8)，130.92(C-9)，131.281(C-10)，115.34(C-11)，154.59(C-12)，115.34(C-13)，131.28(C-14)，25.67(C-15)，145.95(C-16)，111.86(C-17)，17.62(C-18);NMR(CDCl3)dppm:L67(3H，H-l)，5.11(1H，J=8.1Hz，H-3)，1.95(2H，H-4)，1.49(2H，H-5)，6.05(1H，J=16.5Hz，H-7)，6.25(1H，J=16.9Hz，H-8),7.25(1H，J=7,5，H-IO)，6.77(1H，J=8.4Hz，H-ll)，16.77(1H，H-13)，17.25(1H，H-14)，1.19(3H，H-15)，5.86(1H，H-16),5.02(2H，J=4.2，9.9Hz，H-17)，1.58(3H，H-18);补骨脂酚结构式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>全文摘要用于防治植物病害的补骨脂酚，涉及一种化合物，该化合物是将5kg补骨脂种子粉碎，用70％乙醇在室温条件下浸提4次，合并提取液，减压旋转蒸发后得浸膏1200g；将所得浸膏悬浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇进行系统溶剂萃取，得到石油醚部分、四氯化碳部分、氯仿部分、正丁醇部分、水部分；四氯化碳部分经硅胶柱，用氯仿和乙酸乙酯进行梯度洗脱，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脱物；氯仿洗脱物再经硅胶柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脱，流份1-25为石油醚和乙酸乙酯洗脱物，经反复纯化得到补骨脂酚。本发明的化合物对多种植物病原菌具有很好的抑制活性。文档编号C07C39/00GK101219932SQ20081001022公开日2008年7月16日申请日期2008年1月25日优先权日2008年1月25日发明者关丽杰,李海燕,蔡丽丽,双邵,红邵申请人:沈阳化工学院