一种提高裸鼹鼠繁殖率的方法与流程

本发明涉及及动物繁殖技术领域，具体涉及一种提高裸鼹鼠繁殖率的方法。

背景技术：

裸鼹鼠是迄今发现的唯一像蜜蜂、蚂蚁等昆虫一样营真社会性生活的哺乳类动物，群落中只有一只雌性裸鼹鼠和1-3只雄鼠处于统治地位可以繁殖后代。裸鼹鼠营真社会性繁殖方式不利于裸鼹鼠遗传质量控制，也制约着裸鼹鼠封闭群与近交系种群的建立。为了建立标准化实验动物种群，研究组尝试打破裸鼹鼠营真社会性群落的繁殖方式，建立了按雌雄1:1比例交配(雌鼠10月龄以上，雄性12月龄以上)的繁殖方式，这种繁殖方式有助于控制裸鼹鼠遗传和微生物质量，使裸鼹鼠成为标准化的实验动物。其中，裸鼹鼠能否正常繁殖，主要取决于准确发现其发情并且及时配种。

前期本实验室采用原始群落繁殖方式进行繁殖，每个群落约有几十只裸鼹鼠组成，其中只有一只雌鼠能够繁殖，其他雌鼠不能繁殖，这种繁殖方式繁殖效率很低，造成裸鼹鼠繁殖能力很低。而在前期按照小鼠封闭群繁殖方式进行培育时，发现不同窝别雌雄鼠在合笼时会相互撕咬，有超过1/3的配对个体无法正常繁殖。为此，我们通过探索裸鼹鼠发情期行为表现及特点、合笼时间与交配判断方法等，建立了繁殖率较高的裸鼹鼠发情及交配判断技术。

技术实现要素：

本发明的目的在于服现有技术的不足，提供了一种提高裸鼹鼠繁殖率的方法。

本发明的主要技术方案是：

本发明的目的在于提供一种提高裸鼹鼠繁殖率的方法，包括：

1)裸鼹鼠行为学初筛：筛选出为期1-3天的时间内出现精神萎靡不振、饮食减少、异常烦躁的雌性裸鼹鼠；

2)裸鼹鼠阴门状态复筛：对步骤1)筛选出的雌性裸鼹鼠的肛门和尿道外部之间的淡红色横杠状缝隙进行检测，筛选出横杆颜色加深、缝隙张开、可见明显红肿、形成凸起的2瓣，并有透明液体粘连的雌性裸鼹鼠；

3)阴道涂片检测：将步骤2)的雌性裸鼹鼠进行阴道涂片检测确定雌性裸鼹鼠是否处于发情期；

4)雌雄鼠合笼：选择个体相当且同笼来源的雄性裸鼹鼠放入上述处于发情期的雌性裸鼹鼠饲养笼中1:1合笼，若裸鼹鼠存在相互嗅探，用头去部摩擦对方的生殖器的行为说明雌性裸鼹鼠处于发情期可以交配，非发情期动物放到一起容易打架、撕咬；

5)雌雄鼠交配：关闭光照，通过监控系统观察裸鼹鼠合笼行为活动，若观察到雌雄性裸鼹鼠生殖器官接触持续数秒钟以上，则交配成功。

进一步的，步骤3)中所述阴道涂片检测的判断标准如下：

a)发情前期：涂片为云雾状结晶，扁平上皮细胞；

b)发情期：涂片为典型羊齿状结晶，主梗直而粗，角化上皮细胞聚集；

c)发情后期：涂片白细胞居多，少量角化上皮细胞，树枝形态较模糊，分支少而稀疏成金鱼草状；

d)发情间期：涂片角化细胞不断减少，白细胞不断增多，转化为以白细胞为主，偶见扁平上皮细胞，椭圆形或菱形物，透光度大。

进一步的，步骤5)中所述监控系统为红外线监控装置和视频摄像跟踪系统。

本发明通过对裸鼹鼠行为学观察、阴门状态观察、阴道涂片检测，准确判断裸鼹鼠是否处于发情期，并进一步选择同笼来源的雄性裸鼹鼠放入雌性裸鼹鼠饲养笼中1:1合笼，进行交配行为观察，从而达到鉴定其交配与否的目的。

本发明的繁殖方法操作简单，发情、交配判断准确，裸鼹鼠妊娠成功率高。

附图说明

图1为裸鼹鼠发情期与非发情期阴门状态对比；其中，a)为未发情雌鼠；b)为发情雌鼠；

图2为裸鼹鼠发情周期阴道涂片判断标准；其中，a)为发情前期；b)为发情期；c)为发情后期；d)为发情间期。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

以下实施例中实验操作所用的裸鼹鼠均为中国人民解放军第二军医大学实验动物中心2014年至2016年饲养的裸鼹鼠种群，进行如下操作：

实施例1

1)裸鼹鼠行为学初筛：

筛选出为期1-3天的时间内出现精神萎靡不振、饮食减少、异常烦躁的雌性裸鼹鼠；在非发情期时，雌性裸鼹鼠生活状态并无特点可循；

2)裸鼹鼠阴门状态复筛

对步骤1)筛选出的雌性裸鼹鼠的肛门和尿道外部之间的淡红色横杠状缝隙进行检测，未发情的雌鼠肛门和尿道外部之间有淡红色横杠状缝隙(图1a)，发情期的雌鼠该横杆颜色加深，缝隙张开，可见明显的红肿，形成凸起的2瓣，并有透明液体粘连(图1b)；

3)阴道涂片检测

将步骤2)的雌性裸鼹鼠个体进行宫颈黏液涂片后再进行HE染色，确定裸鼹鼠是否处于发情期；具体步骤为：将裸鼹鼠保定，翻转起尾巴露出阴道口，然后用吸少量生理盐水滴入阴道口，挤压裸鼹鼠腰部使粘液随生理盐水流出，吸入滴管中，滴到载玻片上，涂片自然干燥，滴加瑞式-吉姆萨液染色，1min后滴加等量的磷酸缓冲液，轻轻摇晃玻片，使两液体混合均匀，持续10-15min流水洗去染液，涂片风干后显微镜下观察细胞形态；

裸鼹鼠发情周期阴道涂片判断标准如下：

①发情前期：涂片为云雾状结晶，扁平上皮细胞(图2a)；

②发情期：涂片为典型羊齿状结晶，主梗直而粗，角化上皮细胞聚集(图2b)；

③发情后期：涂片白细胞居多，少量角化上皮细胞，树枝形态较模糊，分支少而稀疏成金鱼草状(图2c)；

④发情间期：涂片角化细胞不断减少，白细胞不断增多，转化为以白细胞为主，偶见扁平上皮细胞，椭圆形或菱形物，透光度大(图2d)。

4)雌雄鼠合笼

不同笼饲养的动物放到一起容易打架、撕咬，因此应选择个体相当且同笼来源的雄性裸鼹鼠放入雌性裸鼹鼠饲养笼中1:1合笼，如裸鼹鼠存在相互嗅探，用头部去摩擦对方的生殖器的行为说明两者可以交配；

5)交配行为观察

关闭光照，采用红外线监控装置及视频摄像跟踪系统，观察裸鼹鼠合笼行为活动，如果观察到雌雄性裸鼹鼠生殖器官接触持续10秒钟以上证明交配成功。

经过观察发现，所饲养的裸鼹鼠采用上述方法判断雌性裸鼹鼠发情期，共观察到130只雌裸鼹鼠处于发情期。发情裸鼹鼠合笼后有交配行为的有112只，该112只全部怀孕，正确率为100％。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。