无菌苗法筛选高必需氨基酸且抗镉的水稻品种的制作方法

文档序号:12656289阅读:来源:国知局

技术特征:

1.无菌苗法筛选高必需氨基酸及抗镉的水稻品种,其特征在于具体方法为:步骤一:无菌苗法筛选高必需氨基酸水稻品种,具体步骤为:

(1-1):材料准备,聚丙烯塑料碗,口径为14-16cm,15个;

微生物摇瓶培养膜,规格15.5cm×16.5cm,15张;

纱布,规格10cm×10cm,60块;

封口膜;

75%的酒精200ml;

5%的福尔马林200ml;

0.15%的复合肥溶液200ml;

灭菌水400ml;

(1-2):选择益丰3321、益丰3317、益丰3315、益丰14-24、益丰45为培育的水稻品种,所有的水稻品种均取自湖南永益农业科技发展有限公司;按照4分法每种称10g进行分种;

(1-3):浸种,浸种之前汰除悬浮水面的空瘪粒,浸种4-8小时;

(1-4):器材的灭菌处理,将15个聚丙烯塑料碗,60块纱布,2瓶共计400ml的灭菌水一同放入高压蒸汽灭菌锅内,在121℃下灭菌20-30min;

(1-5)水稻种子消毒,消毒过程在超净工作台内进行,对每种水稻种子用75%的酒精浸种30秒,浸毕,将酒精倒入废液缸,然后对每种水稻种子用5%的福尔马林浸泡5分钟,浸毕,用灭菌水洗3次;

(1-6):播种,每个塑料碗内垫4层纱布,再倒入0.15%复合肥溶液,每个水稻品种播3碗,每碗播种50粒;

(1-7):封膜,将透气性培养膜盖住碗口,其边缘用胶带粘封,防止边缘漏气;

(1-8):无菌苗培养,将封好膜的塑料碗,置于25℃光照养箱内培养,光照模式为明暗各12时,培养15天;

(1-9):取样并进行前处理,取根颈部以上的秧苗,在80-100℃下烘至恒重,研磨、粉碎过60目筛,检测氨基酸前再烘干至恒重;

(1-10):测定无菌苗中17种氨基酸含量,计算氨基酸总量和8种必需氨基酸之和;必需氨基酸的测定参照GB7649-87《谷物籽粒氨基酸测定的前处理方法》、GB/T5009.124-2003《食品中氨基酸的测定》确定,再通过高效液相色谱对无菌苗氨基酸含量进行测定,采用柱前衍生反向高压液相色谱的方法测无菌苗中氨基酸的含量,即先将提取的无菌苗中氨基酸样品在分离前进行水解、衍生,然后用反相色谱分离,最后用荧光检测器检测,普通方法测定得到其无菌苗中的氨基酸组成及其含量、必需氨基酸含量,通过数据分析及研究筛选出高必需氨基酸的水稻品种;

(1-11):测定结果的分析与研究,无菌苗氨基酸含量的分析:把实验所选择的益丰3321、益丰3317、益丰3315、益丰14-24、益丰45五种水稻测定的氨基酸组成及其含量、必需氨基酸含量通过数据分析及研究筛选出高必需氨基酸的水稻品种;

步骤二:采用无菌苗法筛选抗镉水稻品种;具体的步骤与步骤一中无菌苗法筛选高必需氨基酸水稻品种的步骤大体相同,不同之处在于在培养过程中,在复合肥溶液中按3mg/L加入氯化镉,培养15天,且培养完成后截取无菌苗水面以上的部分进行检测,含镉最少的即为抗镉水稻品种;

步骤三:用筛选出的高必需氨基酸水稻品种和抗镉水稻品种作为亲本,杂交培养出高必需氨基酸及抗镉水稻品种。

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