白僵菌可湿性粉剂及其应用的制作方法

本发明涉及微生物农药技术领域，尤其涉及一种白僵菌可湿性粉剂及其应用。

背景技术：

由于化学农药长期大量使用，造成害虫抗药性增强，同时又会杀死害虫天敌，从而造成农作物害虫频频成灾。采用基于昆虫病原微生物的生物杀虫剂替代化学农药成为害虫综合防控技术的重要手段。

玉米螟(Ostrinia furnacalis Guenée)，属于鳞翅目，螟蛾科，又叫玉米钻心虫，主要为害玉米、高粱、谷子等，也能为害棉花、甘蔗、大麻、向日葵、水稻、甜菜、甘蔗豆类等作物，玉米螟分布广泛，危害严重，生态适应性强，属于世界性害虫。玉米螟主要以幼虫为害，破坏茎秆组织，侵害花苞、雄穗及雌穗，受害玉米长势衰弱，茎秆易折，雌穗发育不良，影响结实。玉米螟是我国玉米生产中最重要的害虫之一，一般发生年份可使玉米减产10％左右，大发生年份所造成的产量损失在30％以上，甚至绝收。

二化螟(Chilo suppressalis Walker)，属鳞翅目，螟蛾科，俗名钻心虫、蛀心虫、蛀秆虫等，是我国水稻上危害最为严重的常发性害虫之一。二化螟除为害水稻外，还能为害茭白、玉米、高粱、甘蔗、油菜、蚕豆、麦类以及芦苇、稗、李氏禾等杂草。二化螟幼虫通过蛀害水稻叶鞘、心叶、稻茎等部位造成枯鞘、枯心苗、白穗等危害，在成熟期则会造成半枯穗状虫 伤株，导致严重减产，二化螟一般可导致水稻减产5％-10％，严重的高达20％-30％。

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是目前国内广泛应用的昆虫病原真菌之一，可侵染15个目149个科的700多种昆虫及蜱螨类，具有致病性强、杀虫范围广、对害虫天敌安全、不易产生抗药性、环境友好等优点，已经在全国范围内广泛应用，但在防治过程中仍存在剂型单一、劳动效率低、杀虫速度慢、杀虫效率低等缺点。

粉剂是将真菌孢子或菌丝与填充剂等混合加工而成的剂型，虽能克服杀虫真菌不耐贮藏的问题，但施用劳动效率低，受环境影响大，田间应用不稳定，此外，粉剂还容易随风飘散，产生粉尘，污染环境。

可湿性粉剂容易加工、药害低、毒性小，利于运输、贮藏、使用安全方便并具有良好的生物活性。但白僵菌可湿性粉剂国内的研究进展比较缓慢，究其原因主要为白僵菌可湿性粉剂在贮存过程中容易失去活力，同时一些助剂会对孢子的活性产生不利影响。因此，如何选择合适的助剂，在提高其使用便利性的同时，提高其活性同时延长产品的货架期就成为要解决的主要问题。

有鉴于此，提出本发明。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种白僵菌可湿性粉剂，助剂及配比选择合理，各质量指标良好，活性高，对玉米螟和水稻二化螟具有良好的防治效果，同时使用方便，贮存时间长，成本低，对人畜安全，环境相容性好。

本发明的另一目的在于提供上述白僵菌可湿性粉剂在防治玉米螟和水稻二化螟方面的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种白僵菌可湿性粉剂，按重量份数计，所述白僵菌可湿性粉剂包括白僵菌孢子粉45-55份、载体15-20份、润湿剂3-5份、分散剂2-4份、乳化剂4-6份、吸附剂13-17份和调节剂4-6份。

可选地，所述载体为硅藻土。

可选地，所述润湿剂为拉开粉BX或K12。

可选地，所述分散剂为NP-10或NNO。

可选地，所述乳化剂为AEO-3或吐温T-20。

可选地，所述吸附剂为氧化铝或活性炭。

可选地，所述调节剂为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠。

进一步地，白僵菌可湿性粉剂包括白僵菌孢子粉50份、载体18份、润湿剂4份、分散剂3份、乳化剂5份、吸附剂15份和调节剂5份。

可选地，按重量份数计，所述白僵菌可湿性粉剂包括白僵菌孢子粉45-55份、硅藻土15-20份、拉开粉BX 3-5份、NP-10 2-4份、AEO-3 4-6份、活性炭13-17份和磷酸二氢钾4-6份。

优选地，按重量份数计，所述白僵菌可湿性粉剂包括白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、拉开粉BX 4份、NP-10 3份、AEO-3 5份、活性炭15份和磷酸二氢钾5份。

优选地，所述白僵菌为球孢白僵菌菌株EHM-068，分类命名为球孢白僵菌(Beauveria Bassiana)，已于2016年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.12110。

优选地，所述白僵菌可湿性粉剂中白僵菌孢子含量不小于250亿/克，且孢子萌发率≥90％。

上述白僵菌可湿性粉剂在防治玉米螟和水稻二化螟方面的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明提供的白僵菌可湿性粉剂，助剂选择及配比合理，各质量指标良好，活性高，对玉米螟和水稻二化螟具有良好的防治效果，同时使用方便，贮存时间长，成本低，对人畜安全，环境相容性好。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为不同载体混合物中白僵菌孢子的萌发率；

图2为不同润湿剂对白僵菌孢子的润湿时间；

图3为不同分散剂下白僵菌孢子的分散悬浮率。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供的白僵菌可湿性粉剂，按重量份数计，所述白僵菌可湿性粉剂包括白僵菌孢子粉45-55份、载体15-20份、润湿剂3-5份、分散剂2-4份、乳化剂4-6份、吸附剂13-17份和调节剂4-6份。

本发明中，白僵菌孢子粉典型但非限定性含量为：45份、46份、47份、48份、49份、50份、51份、52份、53份、54份或55份。

作为本发明的可选实施方式，所述载体为硅藻土。

本发明中，载体典型但非限定性含量为：15份、16份、17份、18份、19份或20份。

作为本发明的可选实施方式，所述润湿剂为拉开粉BX或K12。

本发明中，润湿剂典型但非限定性含量为：3份、4份或5份。

作为本发明的可选实施方式，所述分散剂为NP-10或NNO。

本发明中，分散剂典型但非限定性含量为：2份、3份或4份。

作为本发明的可选实施方式，所述乳化剂为AEO-3或吐温T-20。

本发明中，乳化剂典型但非限定性含量为：3份、4份或5份。

作为本发明的可选实施方式，所述吸附剂为氧化铝或活性炭。

本发明中，吸附剂典型但非限定性含量为：13份、14份、15份、16份或17份。

作为本发明的可选实施方式，所述调节剂为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠。

本发明中，调节剂典型但非限定性含量为：4份、5份或6份。

作为本发明的可选实施方式，按重量份数计，所述白僵菌可湿性粉剂包括白僵菌孢子粉45-55份、硅藻土15-20份、拉开粉BX 3-5份、NP-10 2-4份、AEO-3 4-6份、活性炭13-17份和磷酸二氢钾4-6份。

作为本发明的一种实施方式，按重量份数计，所述白僵菌可湿性粉剂包括白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、拉开粉BX 4份、NP-10 3份、AEO-35份、活性炭15份和磷酸二氢钾5份。

本发明中，所述白僵菌为球孢白僵菌菌株。

作为本发明的一种实施方式，所述白僵菌为球孢白僵菌菌株EHM-068，分类命名为球孢白僵菌(Beauveria Bassiana)，已于2016年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.12110。球孢白僵菌菌株EHM-068的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明中，所述白僵菌可湿性粉剂中白僵菌孢子含量不小于250亿/克，且孢子萌发率≥90％。

实验例1 载体的筛选

不同载体：硅藻土、凹凸棒土、高岭土和白炭黑

试验方法：将球孢白僵菌分生孢子粉分别与硅藻土、凹凸棒土、高岭土和白炭黑四种不同的供试载体，按照重量份数1:1的比例均匀混合，置于低温冷库内，在温度为(3±1)℃、相对湿度为5％条件下，黑暗贮存，每月取定量混合粉末于孢子萌发液中，(25±1)℃、120r/min震荡培养24h后测定孢子萌发率，以相同条件下贮存的白僵菌纯孢子粉作对照，每次测定5个试样，共测定5个月。

四种不同载体与白僵菌孢子均匀混合贮存5个月，其孢子萌发率变化见表1和图1。

表1 不同载体混合物中白僵菌的孢子萌发率

表1为不同载体混合物中白僵菌的孢子萌发率。图1为不同载体混合物中白僵菌孢子的萌发率。从表1和图1中可以看出，在贮存1个月后，四种不同载体的混合物中白僵菌的孢子萌发率都超过了80％，其中，以硅藻土作为载体与纯孢子粉的孢子萌发率超过了90％，孢子萌发率影响不大；但是随着贮存时间的延长，混合物中白僵菌孢子萌发率开始下降，贮存2 个月后，分别以凹凸棒土、高岭土和白炭黑为载体的三种混合物中白僵菌孢子萌发率下降明显，至贮存5个月时，这三种混合物中白僵菌孢子萌发率均低于51％，而以硅藻土为载体的混合物中白僵菌孢子萌发率还能维持在85％以上，与对照组的纯孢子粉无明显差异。因此，硅藻土为白僵菌初筛的最佳载体。

实验例2 润湿剂的筛选

不同润湿剂：Morwet EFW、MF-5(甲基萘磺酸盐甲醛缩合物)、K12(十二烷基硫酸钠)和拉开粉BX(二异丁基萘磺酸钠)

试验方法：取标准硬水100mL±1mL，注入250mL烧杯中，将此烧杯置于25±1℃的恒温水浴中，使其液面与水浴的水平面平齐。待硬水至25±1℃时，称取5g±0.1g的试样(润湿剂与白僵菌按1:10比例均匀混合)，置于表面皿上，将全部试样从与烧杯口齐平的位置一次性均匀地倾倒在该烧杯的液面上，但不要过分地扰动液面，加试样时立即用秒表计时，直至试样全部润湿为止，记下润湿时间。如此重复5次，取平均值作为各样品的润湿时间，以不加湿润剂的白僵菌纯孢子粉作为对照。

不同润湿剂对白僵菌孢子的润湿时间见图2。

从图2中可以看出，拉开粉BX和K12两种润湿剂的润湿时间都在120秒内，拉开粉BX的润湿时间仅为97秒，Morwet EFW和MF-5的润湿时间都比较长，分别为247秒和305秒。因此，润湿剂拉开粉BX和K12可为初筛备用润湿剂。

实验例3 分散剂的筛选

不同分散剂：Morwet D425、NP-10(壬基酚聚氧乙烯醚)、NNO(亚甲基双萘磺酸钠)、木质素磺酸钙和木质素磺酸钠。

称取适量试样(精确至0.0002g)，置于盛有50mL的标准硬水(30±1℃)的250mL烧杯中，用手摇荡作圆周运动，约每分钟120次，进行2min，将 该悬浮液在同一温度的水浴中放置13min，然后用30±1℃的标准硬水将其全部洗入100mL量筒中，并稀释至刻度，盖上塞子，以量筒底部为轴心，使量筒在1min内上下颠倒30次。打开塞子，再垂直放入无振动的恒温水浴中，放置30min。用吸管在10s-15s内将内容物的9/10(即90mL)悬浮液移出，不要摇动或搅起量筒内的沉降物，确保吸管的顶端总是在液面下几毫米处。把留在量筒底部的10mL悬浮液用蒸馏水洗250mL烧杯中，加热，将水蒸发近干，于50℃烘箱烘至恒重，取出烧杯称重。重复5次，最后计算平均数。以不加湿润剂的白僵菌纯孢子粉作为对照。

其中：悬浮率X＝10/9*(M1-M2)/M1*100％

M1：所取试样有效成分质量，g

M2：留在量筒底部10mL悬浮液中有效成分质量，g

不同分散剂下白僵菌孢子的分散悬浮率见图3。

从图3中可以看出：分散剂Morwet D425对白僵菌孢子的分散率最低，仅为36％，木质素磺酸钙和木质素磺酸钠对白僵菌孢子的悬浮率也都在50％以下，分散剂NNO对白僵菌孢子的分散率达到了71％，分散剂NP-10对白僵菌孢子的分散率最高，达到了85％。因此，将NNO和NP-10两种分散剂作为白僵菌可湿性粉剂初筛备用分散剂。

实施例1

白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、拉开粉BX 4份、NP-10 3份、AEO-35份、活性炭15份和磷酸二氢钾5份。

实施例2

白僵菌孢子粉45份、硅藻土20份、拉开粉BX 4份、NP-10 4份、吐温T-20 6份、活性炭17份和磷酸二氢钾4份。

实施例3

白僵菌孢子粉55份、硅藻土15份、拉开粉BX 5份、NP-10 2份、吐温T-20 4份、活性炭13份和磷酸二氢钾6份。

实施例4

白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、K12 4份、NNO 3份、吐温T-20 5份、活性炭15份和磷酸二氢钠5份。

实施例5

白僵菌孢子粉50份、硅藻土16份、K12 5份、NNO 2份、AEO-3 4份、氧化铝17份和磷酸二氢钾6份。

对比例1

白僵菌孢子粉30份、硅藻土40份、拉开粉BX 8份、NP-10 8份、AEO-38份、活性炭4份和磷酸二氢钾2份。

对比例2

白僵菌孢子粉70份、硅藻土10份、拉开粉BX 2份、NP-10 1份、AEO-33份、活性炭12份和磷酸二氢钾2份。

对比例3

白僵菌孢子粉50份、高岭土18份、Morwet EFW 4份、木质素磺酸钙3份、农乳400号5份、活性炭15份和磷酸二氢钾5份。

对比例4

白僵菌孢子粉50份、凹凸棒土18份、MF-5 4份、Morwet D425 3份、AEO-3 5份、活性炭15份和磷酸二氢钾5份。

效果例1

对实施例1-5和对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂，分别进行不同质量指标测定。

质量指标测定：

1)润湿性测定

取标准硬水100mL±1mL，注入250mL烧杯中，将此烧杯置于25℃±1℃的恒温水浴中，使其液面与水浴的水平面平齐。待硬水至25℃±1℃时，称取5g±0.1g的试样(试样应为有代表性的均匀粉末，而且不允许成团、结块)，置于表面皿上，将全部试样从与烧杯口齐平的位置一次性均匀地倾倒在该烧杯的液面上，但不要过分地扰动液面。加试样时立即用秒表记时，直至试样全部润湿为止，记下润湿时间。如此重复5次，取其平均值，作为该样品的润湿时间。

2)悬浮率测定

称取适量试样(精确至0.0002g)，置于盛有50mL的标准硬水(30±1℃)的250mL烧杯中，用手摇荡作圆周运动，约每分钟120次，进行2min，将该悬浮液在同一温度的水浴中放置13min，然后用30±1℃的标准硬水将其全部洗入100mL量筒中，并稀释至刻度，盖上塞子，以量筒底部为轴心，使量筒在1min内上下颠倒30次。打开塞子，再垂直放入无振动的恒温水浴中，放置30min。用吸管在10s-15s内将内容物的9/10(即90mL)悬浮液移出，不要摇动或搅起量筒内的沉降物，确保吸管的顶端总是在液面下几毫米处。把留在量筒底部的10mL悬浮液用蒸馏水洗250mL烧杯中，加热，将水蒸发近干，于50℃烘箱烘至恒重，取出烧杯称重。重复5次，最后计算平均数。

悬浮率X＝10/9*(M1-M2)/M1*100％

M1：所取试样有效成分质量，g

M2：留在量筒底部10mL悬浮液中有效成分质量，g

3)细度测定

称取20g试样(精确至0.1g)，置于250mL烧杯，加入80mL自来水，用玻璃棒搅动，使其完全湿润。用自来水将烧杯中润湿的试样稀释至约 150mL，搅拌均匀，然后全部倒入润湿的200目标准筛中，用自来水洗涤烧杯，洗涤水也倒入筛中，直至烧杯中粗颗粒完全移至筛中为止。用直径为9-10mm的橡皮管导出的平缓自来水流冲洗筛上试样，水流速度控制在4-5L/min，橡皮管末端出水口保持与筛缘平齐为度。在筛选过程中，保持水流对准筛上的试样，使其充分洗涤(如试样中有软团块可用玻璃轻压，使其分散)，一直洗到通过试验筛的水清亮透明为止。再将试验筛移至盛有的容器中，上下移动洗涤筛缘始终保持在水面之上，重复至2min内无物料过筛为止。弃去过筛物，将筛中残余物，先冲至一角再转移至已恒重的100mL烧杯中。静置，待烧杯中颗粒沉降至底部后，倾去大部分水，加热，将残余物蒸发近干，于100℃烘箱中烘至恒重，取出烧杯置于干燥器中冷却至室温，称重。重复5次，最后计算平均数。

细度X＝10/9*(M1-M2)/M1*100

M1：可湿性粉剂试样的质量，g；

M2：烧杯中残余物的质量，g

4)水分测定

白僵菌可湿性粉剂含水量一般要采用105℃烘干法。采用105℃烘干法时，先将铝盒清洗干净并烘干，称白僵菌可湿性粉剂10克左右，105℃烘4-6个小时后，进行第一次称重，然后放进烘箱继续烘半个小时，进行第二次称重，两次质量差不大于3毫克即可，如果大于3毫克要继续烘干。重复5次，最后计算平均数。

绝对含水量，即以重量百分数表示白僵菌可湿性粉剂含水量。白僵菌可湿性粉剂含水量以白僵菌可湿性粉剂中所含水分重量占烘干后白僵菌可湿性粉剂重量的百分数表示。

计算公式如下:

白僵菌可湿性粉剂含水量(重量％)＝(原白僵菌可湿性粉剂重量-烘干后白僵菌可湿性粉剂重量)/烘干白僵菌可湿性粉剂重量×100％＝水重/烘干后白僵菌可湿性粉剂重量×100％

5)pH值测定

将冲洗干净的玻璃电极和饱和甘汞电极插入试样溶液中(称取1g试样于100mL烧杯中，加入100mL水，剧烈搅拌1min，静置1min)，测其pH值。至少平行测定三次，测定结果的绝对差值应小于0.1，取其算术平均值即为试样的pH值。

6)起泡性测定

称取一定量的试样，加到盛有100mL水的量筒中，搅拌均匀后静置5min，测定悬浮于顶部泡沫的体积。

7)贮存稳定性测定

将球孢白僵菌可湿性粉剂，置于(3±1)℃下黑暗贮存，3个月后取定量可湿性粉剂于孢子萌发液中，(25±1)℃、120r/min震荡培养24h后测定孢子萌发率。重复5次，最后计算平均数。

白僵菌可湿性粉剂的质量指标见表2。

表2 白僵菌可湿性粉剂的质量指标

实施例1-5和对比例1-4的白僵菌可湿性粉剂的质量指标评价见表3。

表3 不同白僵菌可湿性粉剂的质量指标评价

从表3中可以看出，实施例1-5的各质量指标均符合标准，对比例1的起泡性和贮存稳定性不符合标准，对比例2的润湿时间、悬浮率、细度、pH值和贮存稳定性不符合标准，对比例3的水分、起泡性和贮存稳定性均不符合标准，对比例4的润湿时间、细度、水分、pH值、起泡性和贮存稳定性均不符合标准。

效果例2

将实施例1白僵菌可湿性粉剂用于玉米螟的防治，观察对玉米螟的防治效果。

1)试验时间和地点：

试验时间为2015年6月

试验地点为吉林省公主岭市南崴子镇

2)试验制剂：实施例1制备的白僵菌可湿性粉剂，性状：白色粉末，无特殊气味；白僵菌颗粒剂；化学农药呋喃丹颗粒剂。

3)试验方法：

选取面积为15亩玉米田作为玉米螟田间防效的试验田，试验设三个处理，每个处理3次重复，随机排列；处理一采用白僵菌颗粒剂撒施玉米心叶内施用；处理二采用实施例1提供的白僵菌可湿性粉剂，用100倍的水稀释后喷雾施用；处理三采用化学农药呋喃丹颗粒剂撒施玉米心叶内施用，对照组不用任何防治措施，处理一至处理三的防治剂量均为80g/亩。

4)调查方法：

对于玉米螟的防效调查，采用秋后调查、每个处理随机调查5点，每点调查100株玉米植株，调查指标为活虫数、蛀孔数、被害株数。

5)试验结果：

虫口减退率、虫孔减退率、被害株减退率和防治效果按照如下公式进行计算：

虫口减退率按公式(1)计算：

式中：Y-------虫口减退率，％；

Y1------对照区虫口率，％；

Y2------处理区虫口率，％。

虫孔减退率按公式(2)计算：

式中：Z-------虫孔减退率，％；

Z1------对照区虫孔率，％；

Z2------处理区虫孔率，％。

被害株减退率按公式(3)计算：

式中：X-------被害株减退率，％；

X1------对照区被害株率，％；

X2------处理区被害株率，％。

平均防治效果按公式(4)计算：

式中：E------平均防治效果，％；

X------被害株减退率，％；

Y------虫口减退率，％；

Z------虫孔减退率，％。

各处理防治玉米螟的试验结果见表4。

表4 各处理防治玉米螟的试验结果

注:表中同一列数据后标相同小写(大写)字母者表示经Duncan氏新复极差测验，在P_0.05(P_0.01)水平上差异不显著，下表同。

从表4中可以看出，三个处理在活虫数、蛀孔数、被害株数3个方面明显低于对照组，其中处理二白僵菌可湿性粉剂对玉米螟的虫口减退率、虫孔减退率、被害株减退率及防治效果方面均高于白僵菌颗粒剂且差异显著；白僵菌可湿性粉剂对玉米螟的虫口减退率低于化学农药呋喃丹，而在对玉米螟的虫孔减退率方面却高于化学农药呋喃丹，但两者对玉米螟的被害株减退率及防治效果方面差异不显著；说明白僵菌可湿性粉剂对玉米田玉米螟具有很好的防治效果。

效果例3

将实施例1白僵菌可湿性粉剂用于水稻二化螟的防治，观察对水稻二化螟的防治效果。

1)试验时间和地点：

试验时间为2016年6-7月

试验地点为吉林省东丰县啦啦河镇

2)试验制剂：实施例1制备的白僵菌可湿性粉剂，性状：白色粉末，无特殊气味；生物农药阿维菌素；化学农药杀虫单。

3)试验方法：

在吉林省东丰县啦啦河镇选取水稻田作为水稻二化螟田间防效的试验基地，水稻田面积为1000m²，共设置四个处理，每个处理3次重复，随机排列。处理一和处理二采用50倍液的白僵菌可湿性粉剂，处理一喷施量为每公顷250g，处理二每公顷500g，处理三采用生物农药阿维菌素(250ml/公顷)喷施，处理四采用化学农药杀虫单(1000g/公顷)喷施，处理一至四用背负式喷雾器向稻田茎叶均匀喷雾，对照组不用任何防治措施。

4)调查方法：

试验6月30、7月7日分别进行施药防治水稻二化螟，于7月25日调查二化螟危害的枯心率、枯鞘率、白穗率。

5)试验结果：

枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效的计算公式如下：枯心率防效按公式(1)计算：

式中：Y-------枯心率防效，％；

Y1------对照区枯心率，％；

Y2------处理区枯心率，％。

枯鞘率防效按公式(2)计算：

式中：Z-------枯鞘率防效，％；

Z1------对照区枯鞘率，％；

Z2------处理区枯鞘率，％。

白穗率防效按公式(3)计算：

式中：X-------白穗率防效，％；

X1------对照区白穗率，％；

X2------处理区白穗率，％。

平均防治效果

平均防治效果按公式(4)计算：

式中：E------平均防治效果，％；

X------白穗率防效，％；

Y------枯心率防效，％；

Z------枯鞘率防效，％。

各处理防治水稻二化螟的试验结果见表5。

表5 各处理防治水稻二化螟的试验结果

从表5中可以看出，四个处理对水稻二化螟在枯心率、枯鞘率、白穗率方面明显低于对照组，处理三采用的生物农药阿维菌素对水稻二化螟在枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效方面明显高于处理一(白僵菌可湿性粉剂，每公顷250g)且差异显著；但也低于处理二(白僵菌可湿性粉剂，每公顷500g)对水稻二化螟在枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效，且各项指标差异也显著，说明白僵菌可湿性粉剂对水稻二化螟具有较好的防治效果。

尽管与处理四采用化学农药杀虫单相比，处理一、处理二、处理三3个生物农药处理在对水稻二化螟枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效方面偏低且均存在显著差异，但作为生物农药，处理二和处理三对水稻二化螟的平均防效分别为75.39％、70.85％，均超过了70％，效果已经很好。

效果例4

将实施例1-5和对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂用于玉米螟的防治，观察对玉米螟的防治效果。

1)试验时间：2015年6月

试验地点：吉林省公主岭市南崴子镇

2)试验制剂：实施例1-5和对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂

3)试验方法：

在吉林省公主岭市南崴子镇选取玉米田作为玉米螟田间防效的试验田，玉米田面积为15亩，试验设九个处理，每个处理3次重复，随机排列。处理一至处理九采用实施例1-5和对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂，用100倍的水稀释后喷雾施用，对照组不用任何防治措施。处理一至处理九的防治剂量均为80g/亩。

4)调查方法：

对于玉米螟的防效调查，采用秋后调查，每个处理随机调查5点，每点调查100株玉米植株，调查指标为活虫数、蛀孔数、被害株数。

5)试验结果：

实施例1-5和对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂防治玉米螟的试验结果见表6。

从表6可以看出：实施例1-5制成白僵菌可湿性粉剂对玉米螟的防治效果均较好，都在70％以上，其中实施例1制成白僵菌可湿性粉剂对玉米螟的防治效果最高，达到了75.99％；而对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂对玉米螟的防治效果均在55％以下，防治效果很不好。说明白僵菌可湿性粉剂的组分组成和配比对玉米螟的防治效果有一定的影响，本发明提供的白僵菌可湿性粉剂对玉米螟具有良好的防治效果。

表6白僵菌可湿性粉剂对玉米螟的防治效果

效果例5

将实施例1-5和对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂用于水稻二化螟的防治，观察对水稻二化螟的防治效果。

1)试验时间和地点：

试验时间为2016年6-7月

试验地点为吉林省东丰县啦啦河镇

2)试验制剂：实施例1-5和对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂；

3)试验方法：

在吉林省东丰县啦啦河镇选取水稻田作为水稻二化螟田间防效的试验田，水稻田面积为30亩，共设置九个处理，每个处理3次重复，随机排列。处理一至处理九采用50倍液的白僵菌可湿性粉剂用背负式喷雾器向稻田茎叶均匀喷雾，对照组不用任何防治措施。

4)调查方法：

试验6月30、7月7日分别进行施药防治水稻二化螟，于7月25日调查二化螟危害的枯心率、枯鞘率、白穗率。

5)试验结果：

白僵菌可湿性粉剂防治水稻二化螟的试验结果见表7。

从表7可以看出：对比例1-4制成白僵菌可湿性粉剂虽然枯心率、枯鞘率、白穗率虽然明显低于对照，但对二化螟的防治效果均在50％以下，防治效果很不理想；而实施例1-5制成白僵菌可湿性粉剂枯心率、枯鞘率、白穗率不但明显低于对照，且对二化螟的防治效果均较好，都在70％以上，其中实施例1制成白僵菌可湿性粉剂对二化螟的防治效果最高，达到了73.36％，说明白僵菌可湿性粉剂的组分组成及配比对水稻二化螟的防治效果有很大的影响，本发明提供的白僵菌可湿性粉剂对二化螟具有良好的防治效果。

表7 白僵菌可湿性粉剂对二化螟的防治效果

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 吉林省农业科学院

<120> 白僵菌可湿性粉剂及其应用

<130> 2017

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 591

<212> DNA

<213> 球孢白僵菌

<400> 1

ttagaggaag taaaagtcgt aacaaggtct ccgttggtga accagcggag ggatcattac 60

cgagttttca actccctaac ccttctgtga acctacctat cgttgcttcg gcggactcgc 120

cccagcccgg acgcggactg gaccagcggc ccgccgggga cctcaaactc ttgtattcca 180

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