空气凤梨愈伤组织及其培养方法与应用与流程

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种空气凤梨愈伤组织及其培养方法与应用。

背景技术：

空气凤梨隶属于凤梨科(bromeliaceae)，为单子叶植物、多年生草本。凤梨科有3个亚科、50个属、包括近550个品种和90个变种。3个亚科分别为穗花凤梨亚科(pitcairnioideae)、铁兰亚科(tillandsioideae)和凤梨亚科(bromelioideae)。其中，狐狸尾空气凤梨(tillandsiafunkiana)是空气凤梨中的常见的一种，是典型的气生或附生植物。

空气凤梨主要的吸收养分和水分的器官是叶表面覆盖的“葵花状”鳞片结构。该结构能帮助空气凤梨直接从存在污染物的空气中获得养分和水分。而它们的根系退化，只在支撑物上起固定作用，不需要土壤，所以它们与地面不会有任何联系。

空气凤梨是既能赏花，又可观叶的观赏植物。空气凤梨品种繁多，株形优美，装饰性极强。可以个性地粘贴在古树桩、假山石和墙壁上，或放在竹篮、贝壳里，点缀空间，时尚清新，富有大自然野趣；也可将其拼组成盆景、装饰成屏风，会让居室生机勃勃。除此之外，空气凤梨还具有观赏期长的优点，几乎全年都能开花；空气凤梨无栽培基质，不用搭置花架，清洁卫生，可随意摆放，是非常理想的室内观赏植物。空气凤梨同时也可用于园林植物造景，绿地景观组景，或在节假日举办空气凤梨植物专题花展。近几年引种至国内，迅速成为植物爱好者的新宠，也是新型的室内观赏花卉，逐步进入寻常百姓家。

目前空气凤梨繁殖大多采用传统的分株繁殖和扦插繁殖，也可用组织培养和以成熟未开裂果荚中的种子进行无菌培养。种子繁殖成功率高，但由种子生长至成品需5-8年时间，而且种子产量少；植物快繁虽速度快，但由于空气凤梨叶片布满鳞片给外植体的消毒带来很大困难；以顶芽或侧芽为外植体进行快发，常常会导致霉菌污染而失败；此外因空气凤梨分化程度高，诱导愈伤组织也较为困难，因此目前对空气凤梨的组织培养尚属探索阶段因此目前花卉厂商多采用分株繁殖。如何有效繁殖空气凤梨是本领域技术人员一直努力解决的技术难题。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种空气凤梨愈伤组织及其培养方法与应用，以解决当前用于空气凤梨繁殖的外植体材料获取困难以及繁殖效率不理想的技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明的一方面，提供了一种空气凤梨愈伤组织的培养方法。所述空气凤梨愈伤组织的培养方法包括如下步骤：

获取空气凤梨的根尖组织，并对所述根尖组织进行消毒处理；

将经消毒处理后的所述根尖组织接种至诱导培养基中进行诱导培养处理，获得愈伤组织；

将所述愈伤组织转移至继代增殖培养基中进行继代增殖培养处理。

本发明的另一方面，提供了一种空气凤梨愈伤组织。所述空气凤梨愈伤组织由本发明空气凤梨愈伤组织的培养方法培养获得。

本发明的再一方面，提供了一种空气凤梨快繁方法。所述空气凤梨快繁方法包括将本发明空气凤梨愈伤组织进行分化培养成为幼苗的步骤。

与现有技术相比，本发明空气凤梨愈伤组织的培养方法采用空气凤梨的根尖组织作为外植体材料，其易获得，对原植株基本零伤害，消毒处理简单易行；另一方面，通过对根尖组织的诱导培养处理和继代增殖培养处理，能够获得大量愈伤组织，且具有稳定的分化能力。

本发明空气凤梨愈伤组织由本发明空气凤梨愈伤组织的培养方法培养获得，因此，所述空气凤梨愈伤组织能够大量培养，而且其具有稳定的分化能力。

本发明空气凤梨快繁方法直接利用本发明空气凤梨愈伤组织进行分化培养成为幼苗，因此，所述空气凤梨快繁方法能够实现空气凤梨的快速且大量的繁殖，而且繁殖的空气凤梨性状稳定。

附图说明

图1是本发明实施例提供的空气凤梨愈伤组织的培养方法工艺流程图。

具体实施方式

为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明实施例所属技术领域普通技术人员通常理解相同的含义。如果此部分中陈述的定义与通过引用纳入本文的所述专利、专利申请、公布的专利申请和其他出版物中陈述的定义相反或其他方面不一致，此部分中列出的定义优先于通过引用纳入本文中的定义。

一方面，本发明实施例提供一种空气凤梨愈伤组织的培养方法。所述空气凤梨愈伤组织的培养方法工艺流程如图1所示，所述培养方法包括如下步骤：

s01.外植体的消毒：获取空气凤梨的根尖组织，并对所述根尖组织进行消毒处理；

s02.愈伤组织的形成：将经消毒处理后的所述根尖组织接种至诱导培养基中进行诱导培养处理，获得愈伤组织；

s03.愈伤组织的继代增殖培养：将所述愈伤组织转移至继代增殖培养基中进行继代增殖培养处理。

其中，在上述步骤s01中，采用空气凤梨的根尖组织作为外植体材料，其易获得，对原植株基本零伤害，而且消毒处理简单易行。在一实施例中，所述根尖组织为空气凤梨根系的0.5-2cm根尖。优选为空气凤梨生长旺盛根系的0.5-2cm根尖。

在另一实施例中，对所述根尖组织的消毒处理包括如下步骤：

先用灭菌水清洗对所述根尖组织浸泡10-15min，再转入0.1％的hgcl2溶液中消毒处理3-5min，然后灭菌水冲洗3-5次。

另外，所述空气凤梨可以是常见的狐狸尾空气凤梨。

在上述步骤s02中，所述根尖组织接种至诱导培养基中进行诱导培养处理，所述根尖组织组织部分的细胞会发生细胞分裂增殖形成愈伤组织。在一实施例中，所述诱导培养基包括如下组分：

ms基本培养基、2,4-二氯苯氧乙酸0.2-1.5mg/l、己酸二乙氨基乙醇酯0-2mg/l。

通过在所述ms基本培养基中添加适量的2,4-二氯苯氧乙酸和己酸二乙氨基乙醇酯能够有效诱导所述根尖组织的细胞分裂增殖形成愈伤组织。

其中，将步骤s01中经过消毒处理后的根尖组织置于所述诱导培养基中进行诱导培养，会在根尖组织上生长愈伤组织。在一实施例中，将经过消毒处理后的根尖组织置于所述诱导培养基中进行诱导培养时间优选为2-6周。培养条件优选为：温度25-30℃，光照12～16h/天，光照度1500～2000lx。在上述步骤s03中，将步骤s03中所述愈伤组织转移至继代增殖培养基实现愈伤组织的连续多代培养。在一实施例中，所述继代增殖培养基包括如下组分：

ms基本培养基、6-苄氨基腺嘌呤0.1-1.5mg/l、2,4-二氯苯氧乙酸0.8-1.5mg/l。

通过在所述ms基本培养基中添加适量的6-苄氨基腺嘌呤和2,4-二氯苯氧乙酸能够有效促使诱导所述愈伤组织的连续多代增殖培养，获得量大的愈伤组织，并提高所述愈伤组织稳定的分化能力。

在进一步实施例中，在所述继代增殖培养处理的步骤中，每隔30-40天对所述愈伤组织进行转接一次。转接所用的继代增殖培养基为上述含有6-苄氨基腺嘌呤和2,4-二氯苯氧乙酸的继代增殖培养。

其中，将步骤s02培养的愈伤组织置于所述继代增殖培养中进行继代增殖培养的时间可以根据愈伤组织的需求量进行调节和控制，在一实施例中，继代增殖培养条件为：温度25-30℃，光照12～16h/天，光照度1500～2000lx。以提高愈伤组织的继代增殖。

因此，所述空气凤梨愈伤组织的培养方法采用空气凤梨的根尖组织作为外植体材料，使得外植体材料相对容易获得，对原植株基本没有伤害，易消毒处理；另一方面，通过优化诱导培养基和继代增殖培养，实现对根尖组织的诱导培养处理和继代增殖培养处理，从而能够获得大量愈伤组织，并赋予所述愈伤组织稳定的分化能力。另外，所述空气凤梨愈伤组织的培养方法条件易控，获得的空气凤梨愈伤组织性状稳定，分化能力强，而且效率高。

另一方面，在上文所述空气凤梨愈伤组织的培养方法的基础上，本发明实施例还提供了一种空气凤梨愈伤组织。所述空气凤梨愈伤组织由上文所述空气凤梨愈伤组织的培养方法培养获得。因此，所述空气凤梨愈伤组织能够大量培养，而且其具有稳定的分化能力。

再一方面，在上文所述空气凤梨愈伤组织及其培养方法的基础上，本发明实施例还提供了一种空气凤梨快繁方法。所述空气凤梨快繁方法包括将上文所述空气凤梨愈伤组织进行分化培养成为幼苗的步骤。因此，所述空气凤梨快繁方法能够实现空气凤梨的快速且大量的繁殖，而且繁殖的空气凤梨性状稳定，降低了成本。

现以具体空气凤梨愈伤组织及其培养方法为例，对本发明进行进一步详细说明。

实施例1

本实施例提供了一种空气凤梨愈伤组织及其培养方法。所述空气凤梨愈伤组织培养方法包括如下步骤：

s11.外植体的消毒：

选取狐狸尾空气凤梨(tillandsiafunkiana)生长旺盛的根系，切取长度为1.0cm根尖，用灭菌水清洗，浸泡15min，转入0.1％的hgcl2溶液中消毒处理3min，灭菌水冲洗5次；

s12.愈伤组织的形成：

将步骤s11消毒处理后的根尖接种在ms基本培养基上，每瓶接种一个根尖，并添加2,4-二氯苯氧乙酸1.0mg/l和己酸二乙氨基乙醇酯0.5mg/l进行培养处理，18-22天根尖部位细胞分裂增殖形成愈伤组织，愈伤率80％；

s13.继代增殖培养：

将步骤s12中形成的愈伤组织转移到转入添加了6-苄氨基腺嘌呤0.5mg/l和2,4-二氯苯氧乙酸0.8mg/l的ms基本培养基中进行继代增殖培养，每30-40天转接一次，获得大量愈伤组织。

实施例2

本实施例提供了一种空气凤梨愈伤组织及其培养方法。所述空气凤梨愈伤组织培养方法包括如下步骤：

s11.外植体的消毒：

选取狐狸尾空气凤梨(tillandsiafunkiana)生长旺盛的根系，切取长度为0.5cm根尖，用灭菌水清洗，浸泡15min，转入0.1％的hgcl2溶液中消毒处理4min，灭菌水冲洗5次；

s12.愈伤组织的形成：

将步骤s11消毒处理后的根尖接种在ms基本培养基上，每瓶接种一个根尖，并添加2,4-二氯苯氧乙酸1.2mg/l和己酸二乙氨基乙醇酯0.5mg/l进行培养处理，15-20天根尖部位细胞分裂增殖形成愈伤组织，愈伤率73％；

s13.继代增殖培养：

将步骤s12中形成的愈伤组织转移到转入添加了6-苄氨基腺嘌呤0.8mg/l和2,4-二氯苯氧乙酸1.2mg/l的ms基本培养基中进行继代增殖培养，每30-40天转接一次，获得大量愈伤组织。

实施例3

本实施例提供了一种空气凤梨愈伤组织及其培养方法。所述空气凤梨愈伤组织培养方法包括如下步骤：

s11.外植体的消毒：

选取狐狸尾空气凤梨(tillandsiafunkiana)生长旺盛的根系，切取长度为1.0cm根尖，用灭菌水清洗，浸泡10min，转入0.1％的hgcl2溶液中消毒处理5min，灭菌水冲洗5次；

s12.愈伤组织的形成：

将步骤s11消毒处理后的根尖接种在ms基本培养基上，每瓶接种一个根尖，并添加2,4-二氯苯氧乙酸1.2mg/l和己酸二乙氨基乙醇酯1.0mg/l进行培养处理，15-18天根尖部位细胞分裂增殖形成愈伤组织，愈伤率92％；

s13.继代增殖培养：

将步骤s12中形成的愈伤组织转移到转入添加了6-苄氨基腺嘌呤0.4mg/l和2,4-二氯苯氧乙酸0.8mg/l的ms基本培养基中进行继代增殖培养，每30-40天转接一次，获得大量愈伤组织。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。