置于每天光照11小时，光照强度为20001x，培养温度为28°C的条件下培养I个月后生根率达93%。所述的生根培养基为:l/2MS+2mg/L IBA+15g/L 蔗糖 +3.5g/L 琼脂，pH 为 5.8。
[0022](6)炼苗移栽:将步骤(5)获得的高约6?8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5天后,将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基,栽入由营养土:珍珠岩=3:1混合成的基质，置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为95%以上。
[0023]实施例2:
(I)外植体消毒:取健壮短葶山麦冬当年生的茎尖，刷洗干净后，用洗衣粉溶液浸泡7min后用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗2h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒12s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒15min,用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
[0024](2)启动培养:将经步骤(I)处理后的茎尖接种到启动培养基进行芽诱导，接种后先在28°C条件下全暗培养3天后污染率低至5%，存活率达81.6%。然后置于每天光照10小时，光照强度为1500x条件下培养30天，组培苗的萌动率为79%。所述的启动培养基为:MS+0.8mg/L6-BA+0.lmg/L NAA+30g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.8。
[0025](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的丛生芽切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在28°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照10小时，光照强度为15001x，置于培养温度为28°C的条件下培养30天后芽增殖系数5.13。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为:MS+0.3mg/LNAA+5mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +4.5g/L 琼脂，pH 为 5.8。
[0026](4)壮苗培养:将经步骤(3)增殖培养的丛生苗切成适当大小，接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，以利于生根。接种后先在28°C条件下全暗培养2天，然后置于每天光照12小时，光照强度为25001x，培养温度为28°C的条件下培养17天组培苗即可生长到2cm以上。所述的壮苗培养基为:MS+0.4mg/L 6-BA+0.1/L GA3+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8ο
[0027](5)生根培养:将步骤(2)、(3)或(4)过程获得的高度2.0cm以上的组培苗接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28°C条件下全暗培养I天，然后置于每天光照11小时，光照强度为25001x，培养温度为28°C的条件下培养I个月后生根率达96%。所述的生根培养基为:l/2MS+4mg/L IBA+18g/L 蔗糖 +3.7g/L 琼脂，pH 为 5.8。
[0028](6)炼苗移栽:将步骤(5)获得的高约6?8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5天后,将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基,栽入由营养土:珍珠岩=3:1混合成的基质，置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为92%以上。
【主权项】
1.一种短葶山麦冬组织培养方法，其特征在于包括以下步骤: (1)外植体消毒:取健壮短葶山麦冬当年生的茎尖，刷洗干净后，用洗衣粉溶液浸泡5?1min后用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗I?3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5?30s后用无菌水洗3?5次,再用0.1%升萊溶液消毒10?25min,用无菌水冲洗4?6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用； (2)启动培养:将经步骤(I)处理后的茎尖接种到启动培养基进行芽诱导，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?7天后统计污染率和存活率，然后置于每天光照10?12小时，光照强度为1500?20001χ条件下培养30天，统计组培苗的萌动率及生长情况； (3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的丛生芽切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照10?12小时，光照强度为1000?20001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽； (4)壮苗培养:将经步骤(3)增殖培养的丛生苗切成适当大小，接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，以利于生根，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照11?12小时，光照强度为2000?30001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至组培苗生长到2cm以上； (5)生根培养:将步骤(2)、(3)或(4)过程获得的高度2.0cm以上的组培苗接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照11?12小时，光照强度为2000?30001x，培养温度为25?28°C的条件下培养I个月后统计生根情况； (6)炼苗移栽:将步骤(5)获得的高约6?8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5?7天后,将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基,栽入由营养土:珍珠岩=3:1混合成的基质，置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田。
2.根据权利要求1所述的一种短葶山麦冬组织培养方法，其特征在于步骤(2)所述的启动培养基为:MS+0.1 ?lmg/L6-BA+0.1 ?0.5mg/L NAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L琼脂，pH为5.4?5.8。
3.根据权利要求1所述的一种短葶山麦冬组织培养方法，其特征在于步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+0.1 ?1.0mg/LNAA+Ι ?5mg/L 6-BA+15 ?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 琼月旨，pH为5.4?5.8。
4.根据权利要求1所述的一种短葶山麦冬组织培养方法，其特征在于步骤(4)所述的壮苗培养基为:MS+0.01 ?0.5mg/L 6-BA+0.01 ?lmg/L GA3+15 ?30g/L 蔗糖+3.5 ?6.0g/L琼脂，pH为5.4?5.8。
5.根据权利要求1所述的一种短葶山麦冬组织培养方法，其特征在于步骤(5)所述的生根培养基为:1/2MS+1?5mg/L IBA+15?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L琼脂，pH为5.4?5.8。
【专利摘要】本发明公开了一种短葶山麦冬组织培养方法，涉及短葶山麦冬（Liriope muscari ）通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量短葶山麦冬优良品种试管苗的方法。本发明以短葶山麦冬茎尖为外植体，经过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽等过程有效地提高了芽的诱导率、继代系数及生根率，进而建立了完整的短葶山麦冬组织培养体系，以便进行短葶山麦冬种苗工厂化生产。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104686344
【申请号】CN201510086062
【发明人】陈桂容
【申请人】陈桂容
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年2月24日