秋枫胚性愈伤成苗的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方 法。
【背景技术】
[0002] 秋楓，别名重阳木，系高大乔木，其古朴端庄、树冠庞大、枝叶浓密，是良好的行道 和庭园绿化树种。此外，秋楓根系发达，抗风力强，可营造为防护林。秋楓全身是宝，木材纹 理直，较坚硬，耐久用，可作建筑家具桥梁等用；果肉可酿酒；种子含油量高，可榨油供工业 用；根及树皮可用于风湿骨痛；叶可用于食道癌、胃癌、传染性肝炎、小儿疳积、肺炎、咽喉 炎、疮瘍等。
[0003] 目前，秋楓都是采用种子进行繁殖，但种子一年只有一次，且要随采随播才能提高 发芽率，种子繁殖已不能满足市场的需求。组织培养是一种植株快速繁殖技术，但采用组织 培养技术快速繁殖秋楓种苗还未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优 点。
[0005] 本发明还有一个目的是提供秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，通过对秋楓进行 胚性愈伤诱导，在短时间内培育出大量适合移栽的秋楓种苗，显著提高了秋楓种苗的增殖 系数和种苗质量，可实现规模化生产，满足市场上对秋楓种苗的需求。
[0006] 为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种秋楓胚性愈伤成苗的快 速繁殖方法，包括以下步骤：
[0007]A、将秋楓种子用2 %的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗15-20min，再 用添加了 2-3滴100mg/L吐温20的0. 1%的升汞溶液浸泡消毒8-10min，无菌水冲洗3-5 次，最后用消毒滤纸去除所述秋楓种子表面水分，得消毒外植体；
[0008] B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于22_26°C、光照条件 下培养35天，得无菌试管苗，其中，
[0009] 所述第一培养基包括MS培养基，0. 1-0. 5mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
[0010] 所述光照条件为，光照强度15001UX，光照时间8-10h/天；
[0011] C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于22-26°C、所述 光照条件下培养30天，得胚状体，其中，
[0012]所述第二培养基包括MS培养基，0? 5-2.Omg/LNAA，0? 1-0. 5mg/LKT，30mg/L蔗糖 和5mg/L琼脂；
[0013] D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于22_26°C，所述光照条件培 养30天，得完整带根健壮植株，其中，
[0014]所述第三培养基包括MS培养基，0?5-1. 5mg/L6-BA，0?1-0. 5mg/LNAA，30mg/L蔗 糖和5mg/L琼脂；
[0015] E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量 自来水，敞口放置2-4天后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基得幼苗，将所述 幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养。
[0016] 优选的是，所述的秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质，其包括：
[0017] 第一基质层，其由15-20重量份稻壳、10-12重量份锯末、5-8重量份草木灰和5-8 重量份珍珠岩经高温灭菌制得，其厚度为4-8cm;
[0018] 第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20-25重量份黄壤土、15-20重量 份废蜜液、10-15重量份豆渣、10-15重量份秸杆、5-10重量份厩肥和0. 3-0. 5份酵素菌经发 酵制得，其厚度为5-lOcm;
[0019] 第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为l-2cm的细沙层。
[0020] 优选的是，所述的秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质中培养的条件为 温度25-28°C、湿度为70-80%、自然光照下培养。
[0021] 优选的是，所述的秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述第一培养基中的赤霉 素浓度为〇? 3mg/L。
[0022] 优选的是，所述的秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述第二培养基中的NAA浓度为lmg/L，KT浓度为0? 2mg/L。
[0023] 优选的是，所述的秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述第三培养基中6-BA浓 度为lmg/L，NAA浓度为 0? 3mg/L。
[0024] 本发明至少包括以下有益效果：
[0025] 第一、对秋楓进行胚性愈伤诱导，通过诱导其子叶，在短时间内培育出大量适合移 栽的秋楓种苗，显著提高了秋楓种苗的增殖系数和种苗质量，可实现规模化生产，满足市场 上对秋楓种苗的需求；
[0026] 第二、在第一培养基中添加赤霉素可打破秋楓种子休眠，促使秋楓种子发芽、成 苗；在第二培养基中添加NAA和KT可降低组织培养中的消耗及成本；在第三培养基中添加 6-BA和NAA可有效促进叶和根的生长，获得带根完整植株，无需再单独进行生根培养，直接 生根；
[0027] 第三、根据幼苗的生长特点和营养需要配制专用的培养基质，幼苗在其上长势好， 植株健壮，无病虫害；
[0028] 第四、基质中的第一基质层由稻壳、锯末、草木灰和珍珠岩经杀菌制得，其疏松通 气，吸水保水且不含病原菌；第二基质层由黄壤土、废蜜液、豆渣、秸杆、厩肥和酵素菌经发 酵制得，其可为幼苗生长提供丰富的易于吸收的营养，发酵还可使第二基质层中产生大量 的有益细菌，可增强幼苗的抗病虫害能力；第三基质层为细沙层，可减缓基质中养分和水分 的散失；
[0029] 第五、采用本发明方案所得到的秋楓组培苗的繁殖系数高达50倍，组培苗的生根 率和移栽苗成活率均在95%以上，有效解决了秋楓工厂化育苗的问题。
[0030] 本发明的其他优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明 书文字能够据以实施。
[0032] 需要说明的是，下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述 试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0033] 实施例1 :
[0034] -种秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0035] A、将秋楓种子用2 %的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗15min，再用添 加了 2滴100mg/L吐温20的0. 1 %的升汞溶液浸泡消毒8min，无菌水冲洗3次，最后用消 毒滤纸去除所述秋楓种子表面水分，得消毒外植体；
[0036] B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于22°C、光照条件下 培养35天，得无菌试管苗，其中，
[0037] 所述第一培养基包括MS培养基，0.lmg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
[0038] 所述光照条件为，光照强度15001ux，光照时间8h/天；
[0039] C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于22°C、所述光 照条件下培养30天，得胚状体，其中，
[0040] 所述第二培养基包括MS培养基，0. 5mg/LNAA，0.lmg/LKT，30mg/L蔗糖和5mg/L 琼脂；
[0041] D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于22°C，所述光照条件培养 30天，得完整带根健壮植株，其中，
[0042] 所述第三培养基包括MS培养基，0? 5mg/L6-BA，0?lmg/LNAA，30mg/L蔗糖和5mg/ L琼脂；
[0043] E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量 自来水，敞口放置2天，待表面角质形成后，将所述完整带根植株取出，洗净其根部培养基 得幼苗，将所述幼苗移栽到基质中培养30天，再将其移栽到大田培养。
[0044] 所述的秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质，其包括：
[0045] 第一基质层，其由15重量份稻壳、10重量份锯末、5重量份草木灰和5重量份珍珠 岩经高温灭菌制得，其厚度为4cm;
[0046] 第二基质层，其位于所述第一基质层上方，其由20重量份黄壤土、15重量份废蜜 液、10重量份豆渣、10重量份秸杆、5重量份厩肥和0. 3份酵素菌经发酵制得，其厚度为 5cm；
[0047] 第三基质层，其位于所述第二基质层上方，其为厚度为Icm的细沙层。
[0048] 所述的秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，所述基质中培养的条件为温度25°C、 湿度为70%、自然光照下培养。
[0049] 实施例2 :
[0050] -种秋楓胚性愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0051 ] A、将秋楓种子用2 %的洗洁精水溶液浸泡5min后，线状自来水冲洗18min，再用添 加了 2滴100mg/L吐温20的0. 1 %的升汞溶液浸泡消毒9min，无菌水冲洗4次，最后用消 毒滤纸去除所述秋楓种子表面水分，得消毒外植体；
[0052] B、将步骤A中得到的所述消毒外植体接种到第一培养基中，于24°C、光照条件下 培养35天，得无菌试管苗，其中，
[0053] 所述第一培养基包括MS培养基，0? 3mg/L赤霉素，30mg/L蔗糖和5mg/L琼脂，
[0054] 所述光照条件为，光照强度15001ux，光照时间9h/天；
[0055] C、将步骤B中得到的所述无菌试管苗的子叶置于第二培养基中，于24°C、所述光 照条件下培养30天，得胚状体，其中，
[0056] 所述第二培养基包括MS培养基，I.Omg/LNAA，0? 2mg/LKT，30mg/L蔗糖和5mg/L 琼脂；
[0057] D、将步骤C中得到的所述胚状体置于第三培养基中，于24°C，所述光照条件培养 30天，得完整带根健壮植株，其中，
[0058] 所述第三培养基包括MS培养基，I.Omg/L6-BA，0? 3mg/LNAA，30mg/L蔗糖和5mg/ L琼脂；
[0059] E、在所述步骤D中获得所述完整带根健壮植株后，向所述第三培养基中加入少量 自来水，敞口