与致病菌有关的创伤的抑菌圈，表明对于MRSA、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯 氏菌，MNP敷料抑制细菌生长的程度大于市售敷料。
[0285] 对于鲍曼不动杆菌，尽管银敷料具有比MNP敷料更大的抑菌圈，但这被认为是鼓 舞人心的，因为在已经认可该微生物抵抗CHX的情况下，NP薄膜竟然抑制了它的生长。
[0286]表12
[0287]
[0289]实施例31--复合材料：玻璃离子体水门汀
[0290] 已经生产了包含CHX-HMPMNP的玻璃离子体水门汀。已经研发了两种使MNP汇集 并使其表现的适合包含在GIC内的方法：
[0291] (i)湿法，其中，使MNP从胶体中沉淀出，然后使用离心以使操作者轻轻倒出上清 液，留下浓厚的白色浆体；以及
[0292] (ii)干燥，然后球磨以产生白色粉末。
[0293] 这些方法的产物均被包含进市售GIC中以测量多种特性。
[0294]实施例32--包覆表面的材料：已经涂覆有CHX-HMP-5MNP的聚氨酯导管、聚氨酯 基质和导管。
[0295] 期望这一应用去证明CHX的长期（> 3个月）释放。已经证明了至少85天的CHX 释放（图28)。
[0296] 已经通过改变反应物浓度（50mM的CHX和HMP)和浸涂方式（重复1、5和10次 浸渍）研究了涂层密度。已经发现越长的浸涂时间产生越多的释放，50mM的NP浓度在多 数情况下比5mM的浓度释放的更多。越多的浸涂产生越大的涂层密度（图29)。初始数据 表明在一些情况中越密集的涂覆样品观察到越低的CHX释放，在不期望受理论约束的情况 下，这可以由下述内容解释：有可能越厚重涂覆的样品可能具有越少的孔，因此活性材料向 环境呈现越少的表面面积；或者可能与涂层脱落有关，尽管这还未被直接观察到。
[0297] 似乎重复浸涂和/或改变浸涂时间会允许控制MNP的剂量。
[0298]实施例33-36和对比例15-22--包含聚氨酯的样品的微生物抑制作用
[0299] 也已经完成了大量的微生物学工作。表13示出了具有不同表面处理的聚氨酯 样品上在细菌生长培养基中培育24小时后的微生物生长。符号：_完全抑制；+轻微生长 (在10MO3之间的稀释液中观察到生长）；++中等生长（在10 4-10 6之间的稀释液中观 察到生长）；+++大量生长（在10 7_1〇 12之间的稀释液中观察到生长）。与用水（对比例 15-18)或者含水CHX溶液（对比例19-22)处理的对照相比，涂覆有CHX-HMP-50的聚氨酯 样品展现了没有生长MRSA、大肠杆菌和铜绿假单胞菌，以及肺炎克雷伯氏菌生长降低（实 施例 33-36)。
[0300]表 13
[0301]
[0302]实施例37-44和对比例23-26--活-死染色
[0303] 也使用上述实施例33-36中列举的微生物进行了活-死染色。首先通过浸涂30 秒、然后清洗10秒使聚氨酯截面涂覆有NP(CHX-HMP-5和CHX-HMP-50)，然后浸渍于相关细 菌的悬浮液中24小时。使用SYT09和碘化丙啶（propidiumiodide)活/死染色剂进行染 色。
[0304] 图30的较浅区域表示微生物生长的区域。这样，在未处理的对照中见到了高水平 的微生物生长（对比例23-26,图30的最左侧列）。这些图像显示了MNP对微生物生长的作 用（图30中间列和右侧列），并表明MNP以任一浓度存在均彻底降低了微生物的生长（实 施例37-44)。应注意，MNP自身吸收了一些荧光染料，这可以看作为CHX-HMP-50图像中的 亮区（实施例41-44)。
[0305]实施例45-50和对比例27-32--表面涂覆的材料：医用硅酮
[0306] 硅酮被用作体内的假体和其他生物材料装置。这一实施例尤其关注的是在口腔中 使用的、构建颚填充体（用于校正由于手术或进展性异常导致的偏差的装置）和义齿的硅 酮。
[0307] 这些硅酮易于被致病性细菌和酵母菌定殖，尤其是白色念珠菌。已经研究了CHX-X MNP在医用硅酮上的粘附。负载到这些装置上的微生物尤其很高，出于这一原因，可能需要 较高剂量的CHX。因此，已经研发了不同于CHX-HMP的其他配方。
[0308] 在口腔用硅酮浸涂1分钟到6小时的系列时间之后，已经研究了三个配方 (CHX-HMP-5、CHX-TMP-5和CHX-TP-5)的CHX释放。本体（B)和密封剂（S)代表两种不同 类型供应的硅酮。在第8周更新洗脱介质以说明任意饱和度。
[0309] 具体地，使用测量为5X8X2. 5mm的硅酮模具建立了在义齿软衬和填充体结构 (MucoprenSoft;Kettenbach,埃申堡，德国）中使用的"本体"和"密封剂"娃酮的样品。 使用凡士林对该模具进行润滑，将硅酮填到该模具中，然后允许在室温下处理15分钟。随 后从模具中移出样品，然后在70%乙醇中超声10分钟，在空气中干燥15分钟，然后在密封 容器中干燥储存。
[0310] 在口腔用硅酮浸涂1分钟到6小时的系列时间之后，研究了三个配方（CHX-HMP-5、 CHX-TMP-5、CHX-TP-5)的CHX释放。将样品在搅拌的NP悬浮液中浸渍（除了TMP，其形成 了无法搅拌的粘性的、粘稠的基质）规定的时间，以去离子水清洗10秒然后在空气中干燥。 将更多组的n= 10的样品浸渍于25yM氯己定二葡萄糖酸盐溶液中（形成纳米颗粒之后 水溶液中残余的氯己定浓度）6小时以提供阳性对照。这表示为CHX-C。
[0311] 如图31所示，CHX-HMPMNP涂覆的样品展现了在实验期间CHX的逐渐释放。释放 速率随时间降低，但当更换人工唾液时，速率再次增加，表明相对于CHX盐，人工唾液的饱 和程度在更换该人工唾液之前妨碍了CHX的释放。如下所述，与其他两组盐相比，CHX的释 放是持续的。从CHX-HMP涂覆的样品中的CHX释放根据涂覆时间而变化，在较长的涂覆时 间观察到CHX的增加（但所述相关性不是线性的）。从本体硅酮中比从密封剂硅酮中观察 到更多的CHX释放。
[0312] 如图32所示，CHX-TP涂覆的样品展现了与CHX-HMPMNP相当不同的CHX释放曲 线，其在第一个24小时期间观察到大部分或所有的CHX释放。在改变人工唾液后，观察到 小的额外的CHX释放，但再一次，该小的释放在引进人工唾液后在第一个24小时内达到完 全。因此这一配方的MNP示出了比CHX-HMP更高的释放，大约是它的3倍的CHX释放，但这 一释放是短暂的。从CHX-TP涂覆的样品中的CHX释放根据涂覆时间而变化，随着较长的涂 覆时间CHX增加（但再一次，所述相关性不是线性的）。从本体硅酮中与从密封剂硅酮中的 CHX释放是类似的。
[0313] 如图33所示，像涂覆有CHX-TPMNP的那些样品一样，CHX-TMPMNP涂覆的样品在 暴露于人工唾液的第一个24小时内展现了大部分或所有的CHX释放，在最初的人工唾液中 以及在更换人工唾液之后均是这种情况。涂覆时间影响CHX释放，但是以不同于其他盐的 方式：对那些涂覆了 30分钟的样品观察到最高的CHX释放；而2小时和6小时涂覆的样品 示出了中等的CHX释放，而1分钟涂覆的样品具有最小的CHX释放。从密封剂硅酮中比从 本体硅酮中观察到更高的CHX释放。
[0314] 应该注意的是，似乎通过选择不同的阴离子（HMP、TMP、TP)和浸渍时间能控制剂 量及CHX释放期的范围。还应注意的是，用MNP涂覆硅酮并没有显著增加它们的吸水性；吸 水性有害于这些硅酮的性能并且已被观察到作为为它们给予抗微生物特性的其他尝试的 副作用。这是由本发明MNP证实的进一步优势。
[0315] 已经研究了MNP的抗真菌特性。初步实验研究已经一致地示出了在散播CHX-HMP MNP之后，对白色念珠菌生长的剂量依赖性抑制，在1小时见到真菌生长的减少，在4小时处 没有生长。
[0316]实施例51和对比例33--表面涂覆的材料：钛种植体
[0317]CHX-HMPMNP已经用于涂覆钛以研发种植体的抗微生物涂层。
[0318]CHX-HMP-5MNP涂覆的钛基质（通过浸渍于CHX-HMP-5悬浮液中30秒，以去离 子水清洗10秒，然后干燥制备而来）已经示出了能抑制格氏链球菌和牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonasgingivalis)的生长。此外，当该钛基质被涂覆有唾液薄膜时，抗微生物作 用没有受阻碍，其中，所述唾液薄膜是涂覆在置于口腔中的任何材料上的蛋白薄膜。格氏链 球菌在有（实施例51)或者没有（对比例33)CHX-HMPMNP的钛表面上的菌落形成单位的 代表性数据示出于图34中。
[0319]实施例52-54和对比例34-36--口腔护理产品和局部处理
[0320]CHX的水溶液已经在牙科中使用。它可以发现在超级市场和药店作为适用于控制 斑块和牙周炎/牙龈发炎的2. 2mM口腔含漱液中。它也在诸如更严重的牙周炎、在口腔手 术过程中、在牙髓处理过程中等的许多应用中被用作局部抗微生物剂。
[0321] 该实施例示出了将CHX作为CHX-HMPMNP释放而不是以水溶液释放，这改变了CHX 的释放形式。羟基磷灰石圆片（每组n= 6)被用作牙组织的替代物。制备了 1、2. 2和5mM 的三个CHX二葡萄糖酸盐的水溶液（分别是对比例34-36)。制备了具有相配总浓度的三个 CHX-HMPMNP悬浮液，因此具有CHX和HMP为1、2. 2和5mM(分别是实施例52-54)。将羟基 磷灰石圆片浸渍于制剂中15秒，清洗，然后观察CHX释放随时间的函数（图35)。
[0322] 从用MNP悬浮液处理的圆片中比从用水溶液处理的圆片中观察到更加延长的、整 体更大量的CHX释放。CHX-HMPMNP处理的圆片展示了更加延长的且更大量的CHX释放表 明当以MNP形式时比以溶液释放保留了更多的CHX。这在研发不需处方可以出售的运动员 口腔护理产品和/或局部试剂中具有潜力，用于给予更加长久持续的抗微生物口腔环境。
[0323]实施例55和对比例37--抗微生物涂料
[0324] 已经实施了将MNP汇集为在抗微生物涂料中使用的适用浆体的方法，并且已经用 质量计25%的MNP乳剂浆体建立了原型，并与市场主导的抗微生物涂料（多乐土（Dulux) Sterishield)进行了对比。
[0325] 通过在有力混合期间在室温和常压下混合200mL的10mMCHX二葡萄糖酸盐与 200mL的10mM六偏磷酸钠来制备400mL的CHX-HMP-5NP浆体从而建立了NP浆体。添加大 约50mL的1MKC1，然后停止搅拌。使产生的混合物沉降，然后弃掉上部~300mL的清澈上 清液。剩余液体在台式离心机中在5000rpm下离心20分钟，这导致上清液与粘性白色衆体 的分离，该白色涂料具有涂料和牙膏之间的稠度。再次弃掉上清液，然后从试管中移出该浆 体并使用。
[0326] 实验涂料是可行的（实施例55,图36,右图）、显然正常干燥的（用肉眼）、与未改 性涂料（对比例37,图36,左图）具有相似的表面抛光。
[0327]实施例56-57和对比例38-41--抗微生物涂料的细菌抑制效果
[0328]对在细菌培养中培育24小时的阴性对照涂料（未改性的乳浊液，对比例38-39)、 实验涂料（NP掺杂的）和阳性对照涂料（Sterishield，对比例40-41)研究了MRSA和大肠 杆菌的生长。玻璃玻片的两侧均涂覆了单层的涂料，然后进行干燥。
[0329] 对于MRSA，Sterishield实现了MRSA生长的10倍减少，而MNP涂料实现了 1000 倍的同样减少（图37)。
[0330] 对于大肠杆菌，Sterishield对细菌生长没有影响，而MNP涂料消除了大肠杆菌的 生长，没有可回收的细菌（图37)。
【主权项】
1. 一种包含氯己定盐的抗微生物微米或纳米颗粒，其中，所述盐的阴离子选自： 磷酸根，所述磷酸根选自以三偏磷酸根为起始的环状偏磷酸根的同源系列和以焦磷酸 根为起始的聚磷酸根的同源系列；和 氮和硫的含氧酸阴离子及部分氢化的氮和硫的含氧酸阴离子。2. 根据权利要求1所述的抗微生物微米或纳米颗粒，其中，所述盐的阴离子： 要么选自焦磷酸根、三磷酸根、六偏磷酸根、硝酸根和硫酸根； 要么选自环状偏磷酸根的同源系列。3. -种包含氯己定盐的抗微生物微米或纳米颗粒，其中，所述盐的阴离子选自磷、碳、 氮和硫的含氧酸阴离子及部分氢化的磷、碳、氮和硫的含氧酸阴离子。4. 根据权利要求3所述的抗微生物微米或纳米颗粒，其中，所述盐的阴离子选自磷酸 根、碳酸根、硝酸根和硫酸根。5. 根据权利要求3或4所述的抗微生物微米或纳米颗粒，其中，所述盐的阴离子： 要么选自正磷酸根、焦磷酸根、三磷酸根、六偏磷酸根、碳酸根、硝酸根和硫酸根； 要么选自环状偏磷酸根的同源系列。6. 根据前述任一项权利要求所述的抗微生物微米或纳米颗粒，其中，所述盐为六偏磷 酸氯己定。7. 根据前述任一项权利要求所述的抗微生物微米或纳米颗粒，其中，所述微米或纳米 颗粒的至少一个尺寸为20到200nm。8. -种胶体悬浮液，所述胶体悬浮液包含前述任一项权利要求所述的抗微生物微米或 纳米颗粒。9. 根据权利要求8所述的胶体悬浮液，其中，所述胶体分散在水中或水溶液中。10. 根据权利要求8或9所述的胶体悬浮液，其中，Zeta(G)电势的绝对值为至少 20mV〇11. 一种医用制品，所述医用制品包含根据权利要求1-7任一项所述的抗微生物微米 或纳米颗粒。12. 根据权利要求11所述的医用制品，其中，所述医用制品为静脉导管、导尿管、牙种 植体、牙托、义齿、创伤敷料或医用包材。13. -种复合材料，所述复合材料包含根据权利要求1-7任一项所述的抗微生物微米 或纳米颗粒。14. 根据权利要求13所述的复合材料，所述复合材料为牙科水门汀、涂料或口腔护理 组合物。15. 根据权利要求13或14所述的复合材料，所述复合材料包含含量占全部复合材料 Iwt%~60wt%的抗微生物微米或纳米颗粒。16. 根据权利要求13~15任一项所述的复合材料，所述复合材料包括玻璃离子体水门 汀（GIC)。17. -种抗微生物微米或纳米颗粒的制备方法，所述方法包括： 以1:100~100:1的比例使包含氯己定阳离子的水溶液与阴离子反应，以制备微米或 纳米颗粒的胶体悬浮液，所述阴离子选自： 磷酸根，所述磷酸根选自以三偏磷酸根为起始的环状偏磷酸根的同源系列和以焦磷酸 根为起始的聚磷酸根的同源系列；以及氮和硫的含氧酸阴离子及部分氢化的氮和硫的含氧 酸阴离子。18. -种抗微生物微米或纳米颗粒的制备方法，所述方法包括： 以1:100~100:1的比例使包含氯己定阳离子的水溶液与阴离子反应，以制备微米或 纳米颗粒的胶体悬浮液，所述阴离子选自：磷、碳、氮和硫的含氧酸阴离子及部分氢化的磷、 碳、氮和硫的含氧酸阴离子。
【专利摘要】公开了包含氯己定盐和阴离子的抗微生物微米或纳米颗粒，以及所述抗微生物微米或纳米颗粒的制备方法。所述盐的阴离子选自磷、碳、氮和硫的含氧酸阴离子及部分氢化的磷、碳、氮和硫的含氧酸阴离子。
【IPC分类】A01N41/02, A01N25/34, A01N57/10, A01N33/18, A01N59/04, A01N25/12, A01N47/44, A01P1/00, A01N25/04
【公开号】CN105228447
【申请号】CN201480028812
【发明人】米歇尔·艾米丽·雷德蒙
【申请人】布里斯托大学
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2014年5月16日
【公告号】EP2996468A1, US20160128332, WO2014184582A1