包含亚氯酸水溶液的耐药细菌和变异细菌的消毒剂的制作方法_4

文档序号:9509099阅读:来源:国知局
0L(MRSA;选择的培养 基:BHI琼脂培养基)
[0133] 多重耐药绿脓杆菌:多重耐药绿脓杆菌TUH(MDRP;选择的培养基:BHI琼脂培养 基)
[0134] 耐万古霉素肠球菌:耐万古霉素粪肠球菌BM1447(VRE;选择的培养基:BHI琼脂培 养基)
[0135](亚氯酸水溶液的定量方法)
[0136] 精确称量5g本发明产品。向其中添加水以使溶液精确为100ml。精确称量20ml 样品溶液,将其放入碘烧瓶中,并且添加l〇ml硫酸(1 - 10),然后向其中添加lg碘化钾。 立即将烧瓶密封并摇匀。将碘化钾测试溶液倒入碘烧瓶的顶部并且在黑暗中静置15分钟。 然后松开塞子以倒入碘化钾测试溶液,并且立即密封。在将烧瓶密封并摇匀后,用〇.lmol/L 硫代硫酸钠(指示剂,淀粉指示剂)滴定释放的碘。在溶液的颜色变成浅黄色之后,添加指 示剂。分开进行空白试验用于校正(lmL的0.lmol/L硫代硫酸钠溶液=1. 711mg的HC102)。
[0137](实施例1 :亚氯酸水溶液的制备)
[0138] 以下实施例中使用的亚氯酸水溶液制剂制备如下。本文中有缩写"CAAS"用于亚 氯酸水溶液的情形。然而,它们具有相同的意义。
[0139] 亚氯酸水溶液的成分分析表
[0140][表 2]

[0143] 使用基于以下共混物的亚氯酸水溶液来制备亚氯酸水溶液制剂。
[0144][表3]
[0145]
[0146][表4]
[0148](测量杀菌作用(细菌消毒作用)的方法)
[0149] 亚氯酸水溶液对多重耐药细菌的灭杀(细菌消毒)效果
[0150] 通过测量基于"亚氯酸水溶液"的上述定量方法的"亚氯酸水溶液"的浓度并使用 基于缓冲剂的制备方法所制备的各个缓冲剂来制备基于实施例1的制备方法制备的"用亚 氯酸水溶液制备的亚氯酸水溶液制剂",以,使得"亚氯酸水溶液"的有效氯浓度在接触测试 的细菌时变为 10ppm、50ppm、100ppm、200ppm或 500ppm。
[0151] 在0. 8ml的柠檬酸/磷酸缓冲剂(pH8. 5、7. 5、6. 5、5. 5或4. 5)中制备 0.lml(1-2Xl〇7ml)的试验细菌溶液(MRSA、MDRP、VRE等),并且制备0.lml的试验防腐 剂。最终浓度被设置为5(^口111、10(^。111、20(^。111、50(^。1]1等。在25 <€下将混合物温育30秒、 1分钟或3分钟。总量为0.02ml。
[0152] 接着,使用0. 18ml的包含硫代硫酸钠、聚山梨酯80和卵磷脂的中和溶液(Difico D/E中和肉汤)用于中和。将0.lml在LB或BHI琼脂板上划线。
[0153](对照试剂)
[0154] 购自WakoPureChemicalIndustries的亚氯酸钠被用作对照试剂。
[0155](实施例2 :对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌C0L的效果)
[0156] 在本实施例中,检测了对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的效果。该方法是按照上面 描述的((测量杀菌作用(细菌消毒作用)的方法))。结果示于图2。
[0157] 如图所示,证明了MRSA在lOOppm或更高处大多被消毒。我们发现MRSA在lOOppm 下在具有6. 5或更高的高pH的中性至碱性区中完全被消毒。由上可知,与现有知识相比, 中性至碱性区被理解为对于诸如MRSA的革兰氏阳性细菌是优选的。更具体地,我们发现 MRSA在lOOppm下在具有6. 5~8. 5的高pH的中性区中完全被消毒,并且考虑与亚氯酸钠 的区别,pH为6. 5或更高且小于7. 0。由上可知,与现有知识相比,中性区中的pH被理解为 对于诸如MRSA的革兰氏阳性细菌是优选的。
[0158](实施例3:对多重耐药绿脓杆菌TUH的效果)
[0159] 在本实施例中,检测了对多重耐药绿脓杆菌的效果。该方法是按照上面描述的 ((测量杀菌作用(细菌消毒作用)的方法))。结果示于图3。
[0160] 如图所示,证明了MDRP在lOOppm或更高处大多被消毒,并且在500ppm处完全被 消毒。特别是,我们发现MDRP甚至在50ppm下在具有6.5或更高的低pH的酸性区中完全 被消毒。由上可知,与现有知识相比,发现了抗菌作用具有根据细菌而不同的优选pH。
[0161](实施例4:对耐万古霉素粪肠球菌BM1447的效果)
[0162] 在本实施例中,检测了对耐万古霉素肠球菌(VRE)的效果。该方法是按照上面描 述的((测量杀菌作用(细菌消毒作用)的方法))。结果示于图4。
[0163] 如图所示,证明了VRE在200ppm或更高处大多被消毒。特别是,我们发现VRE甚 至在lOOppm下在具有6. 5或更高的低pH的酸性区中被消毒。由上可知,与现有知识相比, 发现了抗菌作用具有根据细菌而不同的优选pH。
[0164](亚氯酸水溶液对多重耐药细菌的杀菌效果的总结)
[0165] 亚氯酸水溶液表现出对三种多重耐药细菌菌株优异的灭杀能力,以lOOppm或更 高的浓度在30秒内完全消毒大于99%的测试细菌菌株。
[0166] pH对亚氯酸水溶液对耐多重耐药细菌的杀菌效果的影响根据细菌物种不同而不 同。增强杀菌能力的倾向被认为是对于革兰氏阳性细菌(MRSA,VRE)在pH为6. 5或更低的 酸性侧,对于革兰氏阴性细菌在pH为6. 5或更高的中性至碱性侧。
[0167] (实施例5 :亚氯酸水溶液对尿液中污染细菌的生长抑制效果的研究)
[0168] 在本实施例中,研究了亚氯酸水溶液对尿液中污染细菌(MDRP)和MRSA的生长抑 制效果。该测试方法按照上述的实施例。使用上述所制备的样品。
[0169] 使用相似的样品进行两次试验。
[0170] 结果示于图5和图6。相似的试验进行两次,并且其总结示于图5和图6作为测试 结果。
[0171 ] 如图所示,对于亚氯酸水溶液,观察与亚氯酸钠和次氯酸钠类似的MDRP和MRSA的 生长抑制效果。
[0172] (实施例6 :牙周病细菌测试结果(具核梭杆菌F-1))
[0173] 在本实施例中,检测了亚氯酸水溶液对作为牙周病细菌的具核梭杆菌F-1的效 果。
[0174] (方法)
[0175] 使用6. 6X105cfu(0. 1ml)的细菌溶液。使用不同的试验溶液(0. 1ml;亚氯酸水溶 液;次氯酸钠;高级氯石灰;和亚氯酸钠)。使用柠檬酸/磷酸缓冲剂(〇. 8ml;pH8. 5、7. 5、 6. 5、5. 5和4. 5)作为缓冲剂。这在25°C下厌氧培养30分钟。然后,由菌落数来计算存活 细菌数。
[0176] 结果示于图5和图6。亚氯酸水溶液对牙周病细菌表现出优异的细菌消毒效果。其 效果相当于或大于次氯酸钠。存活细菌数在30分钟内减少到10 5或更低。此外,在50ppm 下存在抗牙周病细菌(具核梭杆菌F-1)的效果。
[0177] 由上可见,认为亚氯酸水溶液对牙周病细菌具有优异的细菌消毒效果。
[0178] (实施例7 :检测对感染性病原细菌的细菌消毒效果的试验结果)
[0179] 在本实施例中,进行检测对感染性病原细菌的细菌消毒效果的试验。方法和结果 如下所示。
[0180] (测试方法)
[0181] 亚氯酸水溶液的定量方法如上文(亚氯酸水溶液的定量方法)所述。
[0182] (使用的测试细菌)
[0183] 1)肠出血性大肠杆菌0157 :大肠杆菌0157sakai菌株(1996年,R頂D0509952)
[0184] 2)肠出血性大肠杆菌0111 :从患者中分离出的大肠杆菌0111菌株(2008年, RIMD05092028)
[0185] 3)肠出血性大肠杆菌026 :从大规模食物中毒中分离出的大肠杆菌026菌株 (2000 年,R頂D05091992)
[0186] 4)大肠杆菌:大肠杆菌IF03927
[0187] 5)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌C0L
[0188] 6)金黄色葡萄球菌:金黄色葡萄球菌IF012732
[0189] 7)耐药绿脓杆菌:多重耐药绿脓杆菌TUH:
[0190] 8)绿脓杆菌:
[0191] 9)耐万古霉素肠球菌:耐万古霉素粪肠球菌BM144710
[0192] 10)肠球菌:
[0193] 11)沙门氏菌:肠炎沙门氏菌IF03313
[0194] 为了参照目的,4)大肠杆菌、6)金黄色葡萄球菌、8)绿脓杆菌和10)肠球菌被设 置为现场监测时的指示细菌。
[0195](测试细菌的制备方法)
[0196] 1)0157:肠出血性大肠杆菌0157 :H7(选择的培养基:麦氏培养基)
[0197] 2)0111:肠出血性大肠杆菌0111 :HNM(选择的培养基:麦氏培养基)
[0198] 3)026:肠出血性大肠杆菌026 :H11 (选择的培养基:麦氏培养基)
[0199] 4)大肠杆菌:大肠杆菌IF03927 (选择的培养基:去氧胆酸盐培养基)
[0200] 对选择的培养基划线。在37°C下将每种测试细菌悬浮在无菌盐水中培养24小时 以制备细菌溶液(1〇7细菌/ml)。
[0201 ] 5)沙门氏菌:沙门氏菌IF03313 (选择的培养基:DHL培养基)
[0202] 对选择的培养基划线。在37°C下将测试细菌悬浮在各无菌盐水中培养24小时以 制备细菌溶液(1〇7细菌/ml)。
[0203] 6)金黄色葡萄球菌:金黄色葡萄球菌IF012732 (选择的培养基:具有蛋黄的甘露 醇盐琼脂培养基)
[0204] 对选择的培养基划线。在37°C下将每种测试细菌均匀地悬浮在无菌盐水中培养 24小时以制备细菌溶液(107细菌/ml)。
[0205](操作方法)
[0206] 通过测量基于"亚氯酸水溶液"的上述定量方法的"亚氯酸水溶液"的浓度并使 用基于缓冲剂的制备方法所制备的各种缓冲剂来制备基于制备方法制备的"亚氯酸水溶 液",以使得"亚氯酸水溶液"的有效氯浓度在接触测试的细菌时变为10ppm、50ppm、lOOppm、 200ppm或500ppm。将9ml的各溶液添加到消毒试管中。这些样品被用作样品溶液。将lml 的待测试的细菌添加到样品溶液中,并且将混合物均匀混合。在1分钟、5分钟和10分钟 后,再将混合物均匀混合,并收集lml的各混合物。将收集溶液添加到含有9mL的已消毒的 0.01m〇l/L的硫代硫酸钠溶液(用各种缓冲剂进行调节)的试管中,均匀混合并中和。然 后,收集0.lmL的各溶液,并且涂布在培养皿的一个板上。然后添加约20mL的各选择的培 养基。在各个温度和时间下运行注皿培养法后,测量存活细菌数。
[0207](测试结果)
[0208] 检测"亚氯酸水溶液"抗引起传染病的细菌和所述引起传染病的细菌的指示细菌 的细菌消毒效果的试验结果
[0209] 表5.检测"亚氯酸水溶液"抗肠出血性大肠杆菌的细菌消毒效果的试验单位:细 菌/ml
[0210] [表 5]
[0211]
[0212] *1肠出血性大肠杆菌0157 :H7,R頂D0509952,于1996年分离出的sakai菌株
[0213] *2肠出血性大肠杆菌0111 :HNM,Rn?05092028,于2008年从患者中分离出的菌 株
[0214] *3肠出血性大肠杆菌026 :H11,R頂D05091992,于2000年从大
当前第4页1 2 3 4 5 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1