新颖的抗真菌组合物的制作方法_3

文档序号:9925810阅读:来源:国知局
农产品。
[0027]在本文中使用时,术语"食品"应当被非常广义地理解,包括但不限于,乳酪、奶油 乳酪、碎乳酪、松软干酪(cottage cheese)、经加工的乳酪、酸奶油、干燥的经发酵的肉制 品,包括萨拉米香肠和其他香肠、葡萄酒、啤酒、酸乳、果汁和其他饮料、沙拉酱、松软干酪酱 (cottage cheese dressing)、蘸料、烘焙制品和烘焙填料、表面釉(surface glaze)和糖 霜、涂抹酱、披萨饼馅料、糕饼和糕饼填料、橄榄、橄榄卤水(olive brine)、橄榄油、果汁、番 茄泥和番茄糊、作料、和水果浆和其他类似的食品。
[0028]在本文中使用时,术语"饲料产品"也应当非常广义地理解,包括但不限于宠物食 物、肉鸡饲料等等。
[0029]在本文中使用时,术语"药物产品"也应当非常广义地理解,包括包含活性分子例 如药物、药剂或药物化合物和任选地包含药物可接受的赋形剂的产品,所述赋形剂即与活 性分子组合用于制备合适或便利的剂型的任何惰性物质。
[0030] 在本文中使用时,术语"化妆品产品"也应当非常广义地理解,包括下述产品,所述 产品被用于通过防止水分的蒸腾来保护或治疗角质组织如皮肤和唇、头发和指甲的干燥, 并且护理组织以及给予这些组织良好的外观。术语"化妆品组合物"涉及的产品包括但不限 于保湿霜、个人清洁产品、闭合的药物递送贴片、指甲油、粉、擦拭片、护发素、皮肤处理乳 液、剃须霜等等。
[0031] 在本文中使用时,术语"农产品"也应当非常广义地理解,包括但不限于谷物,例如 小麦、大麦、裸麦、燕麦、水稻、高粱等等;甜菜,例如糖用甜菜(sugar beet)和饲料甜菜 (fodder beet);梨果和核果和浆果,例如苹果、梨、李子、杏、桃、杏仁、樱桃、草莓、覆盆子和 黑莓;豆科植物,例如豆子、扁豆、豌豆、大豆;油料植物,例如油菜、芥末、罂粟、橄榄、向日 葵、椰子、蓖麻植物、可可、花生;萌芦科,例如南瓜、小黄瓜(gherkins)、甜瓜、黄瓜、倭瓜、茄 子;纤维植物,例如棉花、亚麻、大麻、黄麻;柑橘水果,例如橙、梓檬、葡萄柚、蜜桔、枸橼;热 带水果,例如木瓜、百香果、芒果、杨桃、菠萝、香蕉、奇异果;蔬菜,例如菠菜、莴苣、芦笋、十 字花科如卷心菜和芜菁、胡萝卜、洋葱、番茄、马铃薯、马铃薯种子(seed-potatoe)、尖辣椒 (hot pepper)和甜椒;月桂样植物,例如酪梨、肉桂、樟脑树;或产品如玉米、烟草、坚果、咖 啡、甘蔗、茶、葡萄藤、酒花、橡胶植物、以及观赏植物例如切花、玫瑰、郁金香、百合、水仙花、 藏红花、风信子、大丽花、大丁草、康乃馨、倒挂金钟(fuchsias)、菊花和球根花丼(flower bulbs)、灌木、落叶树和常绿树例如松柏植物、温室植物和树木。其包括但不限于植物及其 部分、果实、种子、插条(cuttings)、栽培种、移植物、鳞茎、块茎、根-块茎、根茎、切花和蔬 菜。
[0032]用于制备本文所述的组合物的方法是本发明的另一个方面。方法包括向至少一种 来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物添加多烯抗真菌化合物。化合物可例如被单独地添 加至水性组合物并混合,需要时随后调节pH、粘度等等。如果单独添加,则单独的化合物中 的一些或全部可以是粉末形式,但是替代性地,一些或全部也可以是液体形式。化合物也可 例如以粉末形式被彼此添加并混合,以获得粉末组合物。粉末状的组合物可随后被添加至 水性组合物。
【具体实施方式】 [0033] 实施例
[0034] 实施例1 [0035]收获前应用
[0036]用真菌接种香蕉植物的叶。未经接种的叶被包括在内作为对照。接着,用组合物1 (那他霉素)、组合物2(联苯三唑醇)、组合物3(环丙唑醇)、组合物4(苯醚甲环唑)、组合物5 (腈苯唑)、组合物6 (氟硅唑)、组合物7 (粉唑醇)、组合物8 (叶菌唑)、组合物9 (腈菌唑)、组合 物10 (丙环唑)、组合物11 (丙硫菌唑)、组合物12 (戊唑醇)、组合物13 (四氟醚唑)、组合物14 (灭菌唑)、组合物15(烯效唑)、组合物16(那他霉素+联苯三唑醇)、组合物17(那他霉素+环 丙唑醇)、组合物18(那他霉素+苯醚甲环唑)、组合物19(那他霉素+腈苯唑)、组合物20(那他 霉素+氟硅唑)、组合物21(那他霉素+粉唑醇)、组合物22(那他霉素+叶菌唑)、组合物23(那 他霉素+腈菌唑)、组合物24 (那他霉素+丙环唑)、组合物25 (那他霉素+丙硫菌唑)、组合物26 (那他霉素+戊唑醇)、组合物27(那他霉素+四氟醚唑)、组合物28(那他霉素+灭菌唑)和组合 物29(那他霉素+烯效唑)处理叶的确定部分。通过喷雾应用每种组合物。未经处理的叶也包 括在内(未经处理的对照)。
[0037]获得的结果显示本发明的组合物保护香蕉植物免于真菌生长,还证明与活性化合 物各自应用时的活性相比,本发明的组合物显示协同增强的活性。
[0038] 实施例2 [0039]收获后应用
[0040] 根据de Lapeyre de Bellaire and Dubois(1987)所述方法使香蕉受伤。使用木 塞穿孔器对香蕉造成创伤,之后用真菌孢子污染。在室温下孵育若干小时后,将香蕉浸在以 下组合物之一中:a)无处理(对照l)、b)浸在水中(对照2)、c)浸在那他霉素中、d)浸在联苯 三唑醇中、e)浸在环丙唑醇中、f)浸在苯醚甲环唑中、g)浸在腈苯唑中、h)浸在氟硅唑中、i) 浸在粉唑醇中、j)浸在叶菌唑中、k)浸在腈菌唑中、1)浸在丙环唑中、m)浸在丙硫菌唑中、η) 浸在戊唑醇中、〇)浸在四氟醚唑中、Ρ)浸在灭菌唑中、q)浸在烯效唑中、r)浸在那他霉素+联 苯三唑醇中、s)浸在那他霉素+环丙唑醇中、t)浸在那他霉素+苯醚甲环唑中、u)浸在那他霉 素+腈苯唑中、V)浸在那他霉素+氟硅唑中、w)浸在那他霉素+粉唑醇中、X)浸在那他霉素+叶 菌唑中、y)浸在那他霉素+腈菌唑中、z)浸在那他霉素+丙环唑中、zl)浸在那他霉素+丙硫菌 唑中、z2)浸在那他霉素+戊唑醇中、z3)浸在那他霉素+四氟醚唑中、z4)浸在那他霉素+灭菌 唑中、z5)浸在那他霉素+烯效唑中。在该处理后,将香蕉在闭合箱中于21°C和提高的湿度下 孵育。每天视觉评价香蕉的真菌发展。
[0041 ]结果显示与单独的那他霉素或至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物 相比,含有那他霉素和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的组合物更好地保 护香蕉抵抗真菌。令人惊讶的是,那他霉素和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化 合物的组合应用导致感染的强烈的协同减少。
[0042] 实施例3 [0043] 处理香蕉
[0044]每个处理组使用四个有机的、未成熟的(绿色的)香蕉。根据de Lapeyre de Bellaire and Dubois(1987)所述方法,使用木塞钻孔器对每个香蕉的皮造成三次创伤。随 后,用15μ1含有I X IO5孢子/ml的Fusarium proliferatum悬浮液接种每个创口。在20°C下 孵育4小时后,用100μΙ新鲜制备的包含500ppm那他霉素 (DSM Food Specialties,Delft,荷 兰)、1000ppm丙环唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个香蕉创口。另外,抗真菌组合 物包含1 · OO% (w/w)甲基羟乙基纤维素(MHEC)、O · 40% (w/w)黄原胶、O · 20% (w/w)消泡剂、 0.30% (w/w)朽1檬酸、0.39% (w/w)乳酸和0.11% (w/w)山梨酸钾。组合物的pH为4.0。使用不 含那他霉素和丙环唑的组合物作为对照。将经处理的、未成熟的香蕉在闭合箱中于暗中、20 °C下和95 %的相对空气湿度中孵育,所述条件在存在饱和的Na2HPO4水溶液时获得。在孵育 的最初20天期间,闭合箱中包含成熟的(黄色的)香蕉,以提高乙烯气体水平,从而诱导经处 理的、未成熟的香蕉的成熟。
[0045] 孵育39和42天后,通过计数每12个创口的总数中长有霉菌的创口总数来测定香蕉 上的霉菌生长程度。
[0046]表1中的结果清楚地证明,与单独的那他霉素或丙环唑相比,包含500ppm那他霉素 和1000 ppm丙环唑二者的抗真菌组合物保护香蕉更好地抵抗霉菌生长。
[0047] 孵育39和42天后,用单独的对照组合物或那他霉素处理的所有12个创口均显示霉 菌生长,而单独用丙环唑处理的12个创口中的4个有霉菌生长。然而,用包含那他霉素和丙 环唑二者的组合物处理时,孵育39天后12个创口均无霉菌生长,孵育42天后12个创口中仅1 个有霉菌能够(见表1)。
[0048] 因此,500ppm那他霉素和1000 ppm丙环唑的组合在香蕉上具有协同的抗真菌活性。
[0049] 实施例4 [0050] 处理香蕉
[00511 如实施例3中所述进行实验,不同之处是用100μΙ新鲜制备的包含500ppm那他霉素 (DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、150ppm丙环挫或二者兼有的水性抗真菌组合物处 理每个接种的香蕉创口。
[0052] 孵育期间,以双重方式(twofold manner)评价香蕉上霉菌生长的程度:(i)计算每 12个创口的总数中长有霉菌的创口数;和(ii)通过计算与用对照组合物处理的香蕉创口上 的霉菌生长相比,用抗真菌组合物处理的香蕉创口上观察到的霉菌生长的减少,来测定个 体活性成分的抗真菌活性(以%计)。根据Colby方程(Colby,1967)计算包含两种活性成分 的组合抗真菌组合物的预期抗真菌活性(E,以%计):
[0053] Ε=Χ+Υ-[(Χ · Y)/100]
[0054] 其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性(以%计)。如果组合的 观察到的抗真菌活性(〇,以%计)超出组合的预期抗真菌活性化,以%计)并且因而协同因 子0/ΕΜ.0,那么活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。
[0055] 表2(每12个创口的总数中长有霉菌的创口数)和表3(抗真菌活性)中的结果清楚 地证明,与单独的那他霉素或丙环唑相比,包含500ppm那他霉素和150ppm丙环唑二者的组 合物更有效地降低香蕉上的霉菌生长。
[0056] 孵育26天后,用对照组合物处理的所有12个创口均显示霉菌生长,而单独用那他 霉素处理的12个创口中的8个有霉菌生长,单独用丙环唑处理的12个创口中9个有霉菌生 长。然而,用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物处理的12个创口中没有霉菌生长(见表 2)。另外,对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活 性高8%,这导致>1.0的协同因子(见表3)。
[0057] 孵育27、28、29、31和32天后,用对照组合物或丙环唑单独处理的所有12个创口均 显示霉菌生长,单独用那他霉素处理的12个创口中8个有霉菌生长。然而,使用包含那他霉 素和丙环唑二者的组合物处理时,在第27、28和29天12个创口中均未观察到霉菌生长,第31 和32天时12个创口中仅有1个观察到霉菌生长(见表2)。另外,孵育27和32天之间,对那他霉 素和丙环唑二者的活性成分组合所观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性超出8%到 18%,并且获得了 >1.0的协同因子(见表3)。
[0058]因此,500ppm那他霉素和150ppm丙环唑的组合应用协同降低了香蕉上的霉菌生 长。
[0059] 实施例5 [0060] 处理香蕉
[00611 如实施例3中所述进行实验,不同之处是用100μΙ新鲜制备的包含250ppm那他霉素 (DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、500ppm丙环挫或二者兼有的水性抗真菌组合物处 理每个接种的香蕉创口。孵育期间,根据实施例4中所述的两种方法评价香蕉创口上的霉菌 生长程度。
[0062]表4 (每12个创口总数中长有霉菌的创口数)和表5 (抗真菌活性)中的结果显示,在 减少香蕉上霉菌生长方面,包含250ppm那他霉素以及500ppm丙环唑二者的抗真菌组合物优 于单独包含那他霉素或单独包含丙环唑的组合物。
[0063] 孵育34和36天后,用对照组合物或那他霉素单独处理的所有12个创口中均观察到 霉菌生长,用丙环唑单独处理的所有12个创口中的10个观察到霉菌生长。然而,用那他霉素 和丙环唑的活性成分组合处理时,34天后12个创口中仅7个长有霉菌,36天后12个创口中仅 8个长有霉菌(见表4)。另外,孵育34天和36天后,对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物
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