[0113] 因此可以得出结论:250ppm那他霉素和150ppm丙硫菌唑的组合应用导致蜜桔上霉 菌生长的协同降低。
[0m] 实施例13
[0115] 体外（In vitro)抗真菌活性
[0116] 为了证实那他霉素与丙环唑或丙硫菌唑的组合针对Botrytis cinerea的协同抗 真菌活性，使用96孔微量滴定板进行体外实验。测试以下的组合物：
[0117] -对照(无活性成分），
[0118] -0.63或 1.25ppm那他霉素 （DSM Food Specialties,Delft，荷兰），
[0119] -0.50或 1.0 Oppm 丙环唑，
[0120] -〇· 13ppm 丙硫菌挫，
[0121 ] -〇 · 63ppm 那他霉素+1 · OOppm 丙环挫，
[0122] -1 · 25ppm 那他霉素+0 · 50ppm 丙环唑，
[0123] -1.25ppm那他霉素 +0· 13ppm丙硫菌挫。
[0124] 用92μ1 PCB培养基填充微量滴定板的每个孔后，从制备于PCB培养基或甲醇中的 单独的储备溶液中添加活性成分，这导致每孔IOOyl的中间体积。随后，使用制备于PCB培养 基中的100μΙ Botrytis cinerea悬浮液，以2.5x IO3孢子/ml接种每个孔。因此，每个孔含 有200μ1的终体积和〈1 %的甲醇，这不影响Botrytis cinerea的生长(数据未展示）。
[0125] 将微量滴定板在25°C下孵育5和10天后，通过计算与无活性成分时观察到的霉菌 生长相比，存在活性成分时观察到的霉菌生长的减少，来评价个体活性成分的体外抗真菌 活性（以％计）。根据Colby方程(Colby，1967)计算活性成分组合的预期抗真菌活性(E，以％ 计）：
[0126] Ε=Χ+Υ-[(Χ · Y)/100]
[0127] 其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以％计）。如果组合的 观察到的抗真菌活性(〇，以％计)超出组合的预期抗真菌活性化，以％计)并且因而协同因 子0/ΕΜ.0,那么活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。
[0128] 结果(见表15)证明，与单独的那他霉素、丙环唑或丙硫菌唑相比，那他霉素+丙环 P坐的组合和那他霉素+丙硫菌唑的组合均具有强得多的针对Botrytis cinerea的抗真菌活 性。另外，针对那他霉素+丙环唑的组合和那他霉素+丙硫菌唑的组合观察到的抗真菌活性 比预期的抗真菌活性高50%到100%。因此，得到大于1.0的协同因子。
[0129] 因此，那他霉素和丙环唑的组合应用以及那他霉素和丙硫菌唑的组合应用协同地 抑制了Botrytis cinerea的生长。
[0130] 实施例14
[0131] 体外抗真菌活性
[0132] 如实施例13中所述进行实验，不同之处在于测试以下的组合物：
[0133]-对照(无活性成分），
[0134] -2.5ppm那他霉素 （DSM Food Specialties,Delft，荷兰），
[0135] -7 · 5或 10 · Oppm 丙环挫，
[0136] -〇.5ppm 丙硫菌挫，
[0137] -2.5口口111那他霉素+7.5。。1]1丙环挫，
[0138] -2 · 5ppm 那他霉素+10 · Oppm 丙环挫，
[0139] -2.5ppm那他霉素+0.5ppm of丙硫菌挫。
[0140] 另外，使用Fusarium proliferatum接种。根据实施例13中所述方法测定个体活性 成分和组合的活性成分的抗真菌活性（以％计）。
[0141] 结果(见表16)揭示了那他霉素+丙环唑的活性成分组合和那他霉素+丙硫菌唑的 活性成分组合比个体的那他霉素、丙环唑或丙硫菌唑更有效地抑制Fusarium proliferatum的生长。活性成分组合那他霉素+丙环唑和活性成分组合那他霉素+丙硫菌唑 的观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性超出50%到100%，这导致大于1.0的协同因 子。
[0142] 因此，那他霉素和丙环唑的组合应用以及那他霉素和丙硫菌唑的组合应用显示抵 抗Fusarium proliferatum的强烈协同抗真菌活性。
[0143] 表1.用包含500ppm那他霉素、1000 ppm丙环唑或二者兼有的组合物处理后，在20°C 下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
[0145] 表2.用包含500ppm那他霉素、150ppm丙环唑或二者兼有的组合物处理后，在20°C 下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数（％ )。
[0147] 表3.在20 °C孵育后，包含500ppm那他霉素、150ppm丙环唑或二者兼有的组合物在 香蕉上的抗真菌活性（％)。
[0149] 表4.用包含250ppm那他霉素、1000 ppm丙环唑任一或二者兼有的组合物处理后，在 20 °C下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
[0151] 表5.在20 °C下孵育后，包含250ppm那他霉素、500ppm丙环唑任一或二者兼有的组 合物在香蕉上的抗真菌活性（％ )。
[0154] 表6.在20°C下孵育后，包含250ppm那他霉素、50ppm丙环唑任一或二者兼有的组合 物在香蕉上的抗真菌活性（％)。
[0156] 表7.用包含50ppm那他霉素、250ppm丙环唑任一或二者兼有的组合物处理后，在20 °(：下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
[0158] 表8.在20°C下孵育后，包含50ppm那他霉素、250ppm丙环唑或二者兼有的组合物在 香蕉上的抗真菌活性（％)。
[0161] 表9.用包含500ppm那他霉素、250ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的组合物处理后， 在20°C下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
L0163」表10.用包含250ppm那他霉素、IOOppm内硫菌唑任一或二者兼有的组合物处理后， 在20°C下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
[0170] 表13.在20°C下孵育后，包含500ppm那他霉素、600ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的 组合物在蜜桔上的抗真菌活性（％ )。
[0172] 表14.在20°C下孵育后，包含250ppm那他霉素、150ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的 组合物在蜜桔上的抗真菌活性（％ )。
[0175] 表15 .在25 °C下孵育后，与丙环唑或丙硫菌唑组合的那他霉素针对Botry t i s cinerea的体外抗真菌活性（％ )。
L0177J 表16 .在25 uC卜孵育后，与内坏唑或内硫菌唑组合的那他霉素针对Fusar ium proliferatum的体外抗真菌活性（％ ) 〇
[0179] 参考文献
[0180] Buchenauer H(1987),DMI fungicide:Side effects on the plant and problems of resistance.Pages 259-290in :Modern Selective Fungicides，2nd Edn.H.Lyrjed.Gustav Fisher VerlagjJenajGermany.
[0181] Colby SR(1967),Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combination.Weeds 15:20-22.
[0182] Kuck KHjScheinpflug H and Pontzen R(1987),DMI fungicides.Pages205-258in:Modern Selective Fungicides,2nd Edn.H.Lyr,ed.Gustav Fisher VerlagjJenaj Germany.
[0183] Lapeyre de Bellaire de L and Dubois C(1987),Distribution of Thiabendazole-Resistant Colletotrichum musae Isolates from Guadeloupe Banana Plantations.Plant Disease 81:1378-1383.
[0184] Ma Z,Morgan DP，Fe Its D and Michai I ides TJ(2002)，Sens itivity of Botryosphaeria dothidea from California pistachio to tebuconazole.Crop Prot.21:829-835.
[0185] Slinker BK(1998),The Statistics of Synergism.Journal of Mol.and Cell.Cardiology 30:723-731.
【主权项】
1. 包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的组合 物。2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌 化合物选自由吲唑磺菌胺、氧环唑、联苯三唑醇、糠菌唑、环丙唑醇、苄氯三唑醇、苯醚甲环 唑、烯唑醇、高效烯唑醇、氟环唑、乙环唑啉、腈苯唑、三氟苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、呋 菌唑、顺式呋菌唑、己唑醇、环菌唑、亚胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫 菌唑、喹唑、硅氟唑、戊唑醇、四氟醚唑、丁三唑、灭菌唑、烯效唑和烯效唑-P组成的组。3. 根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述多烯抗真菌化合物是那他霉素。4. 根据权利要求1到3中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种选自下 组的额外的化合物，所述组由粘着剂、载剂、着色剂、保护性胶体、粘合剂、除草剂、肥料、增 稠剂、掩蔽剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、洗涤剂、防腐剂、铺展剂、填充剂、 喷雾油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、湿润剂、稳定剂、消泡剂、缓冲剂、UV-吸 收剂和抗氧化剂组成。5. 根据权利要求1到4中任一项所述的组合物，其中所述多烯抗真菌化合物的量在从 0.005g/l到约100g/l的范围内，所述至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的量 在从约0. 〇〇〇lg/l到约2000g/l的范围内。6. 包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的试剂 盒。7. 通过用多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂的抗真菌化合物处理产品 来保护产品抵抗真菌的方法。8. 根据权利要求7所述的方法，其中用根据权利要求1到5中任一项所述的组合物或根 据权利要求6所述的试剂盒来处理所述产品。9. 根据权利要求7或8所述的方法，其中所述产品选自由食品、饲料产品、药物产品、化 妆品产品和农产品组成的组。10. 根据权利要求9所述的方法，其中所述产品是农产品。11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述产品在收获后被处理。12. 包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的产 品。13. 根据权利要求12所述的产品，其中所述产品选自由食品、饲料产品、药物产品、化妆 品产品和农产品组成的组。14. 根据权利要求13所述的产品，其中所述产品是农产品。15. 多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物用于保护产 品抵抗真菌的用途。
【专利摘要】本发明涉及新颖的抗真菌组合物，及其在处理农产品中的用途。
【IPC分类】A01N55/10, A01N43/653, A01N43/90, A01P3/00, A01N3/00
【公开号】CN105707091
【申请号】CN201610178517
【发明人】雅各布斯·斯塔克, 安格里克·里克·德
【申请人】帝斯曼知识产权资产管理有限公司
【公开日】2016年6月29日
【申请日】2012年3月1日
【公告号】CN103429076A, CN103429076B, EP2680691A1, EP2680691B1, US8946121, US20130324403, US20150141248, WO2012117051A1