专利名称：用于分析人类白细胞抗原(hla)基因型的寡聚核苷酸组合物及其检测方法
背景技术：
发明领域本发明涉及用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸及其检测方法。
所涉及技术的描述本发明涉及寡聚核苷酸芯片组合物及其制造方法，特别是涉及用于分析HLA基因型以研究移植所需组织相容性的寡聚核苷酸芯片组合物，及其制造方法和检测方法。
主要组织相容性复合体(MHC)是由基因水平控制的复杂的抗原系统，其是与器官移植时的排斥反应(免疫应答)有关的基因群。其存在于所有动物中。人类MHC首次发现在识别白细胞表面抗原的抗白细胞因子中，因此被称作人类白细胞抗原(HLA)，其位于6号染色体的短臂上。根据免疫学特征、分子结构、基因位置和所分布细胞的类型，该HLA基因座被分成3类(HLA-I、II和III)。其中，HLA-I的HLA-A、-B、-Cw和HLA-II的HLA-DR的基因座被认为与组织的排斥反应的关系最为密切。
HLA的代表性特征如下。首先，因为HLA基因有超过几十个的等位基因，所以HLA基因在许多人类遗传标记中表现出最高的遗传多态性。第二是单元型水平的遗传。因为HLA基因类别中的基因紧密地位于6号染色体上，所以它们通常是整体遗传自亲代。这些等位基因的特定组合被称为单元型。第三是人类种族依赖的HLA遗传多态性。与其它基因相比，HLA等位基因的分布根据每个种族而表现出很大差异。该特征在HLA单元型中更为明显。一些种族的HLA基因表现出强烈的连锁不平衡，因此特定种群的HLA单元型就是某些人类种群的特征。由于这种HLA的遗传多态性，HLA基因的基因频率和单元型频率被用作研究人类种群基因背景差异的有效标记。第四，HLA基因的另一个重要作用与免疫应答有关。HLAI类和II类分子与细胞中的抗原结合，接着其出现在细胞表面，然后T细胞抗原受体识别该结合了HLA分子的抗原，这引起免疫应答。
如上所述，因为HLA基因的高度遗传多态性和与免疫应答有关的特点，所以其被用于许多领域如器官移植、与疾病的相关性、输血、法医学应用例如亲子鉴定和人类学研究。当今在肾和骨髓移植程序中HLA检测是必须的。在移植前，对供体和受体进行ABO血型检测和HLA-A、-B、-Cw和-DR型检测并进行交叉配对试验。在骨髓、肾等移植的情况下，如果供体和受体的HLA类型不同，则会有对于移植器官的排斥反应。通常骨髓移植需要供体和受体之间遗传完全一致，因为它是免疫细胞的移植。因此，选择与受体HLA型一致的供体是十分重要的。特别的是，因为在如急性或慢性白血病、免疫不全和再生障碍性贫血等的情况下进行骨髓移植时的HLA型应该完全一致，所以遗传了相同HLA型的兄弟或姐妹是最有资格的。但是，如果没有亲属，则要在没有血缘关系的人中寻找有资格的供体。在这样的情况下，必须对许多人进行分析以确定HLA基因型。
随着分子生物学的发展，发现了控制HLA抗原的等位基因的碱基序列，因此能够以通过碱基序列的差异来发现HLA多样性的方式来分析HLA基因。特别是PCR技术的引入使HLA的DNA分型快速发展，并且几乎所有的HLA多态性都在DNA水平上得到说明。使用PCR进行HLA等位基因的分类有如下优点例如不必要分离T淋巴细胞和B淋巴细胞的分离，因为所有有核细胞都可以作为样品，而无论HLA分子在细胞表面的表达数量是多少，并且有可能利用不含有淋巴细胞的体液和组织进行基因型分析。DNA也是相对稳定的，因此它可以在冷藏条件下被储存几个月，在冷冻条件下几乎永久保存。DNA分型技术的最重要的优点之一是，它能够对大量HLA等位基因进行分类。
目前，有多种通常使用的HLA DNA分型方法。首先，PCR-SSP方法是进行合成每个等位基因碱基序列的特异性引物的PCR。这需要大量的引物来区分几十个等位基因。其分析快速并且是简单的方法，但它需要细心专心、专业知识和长时间以合成引物，并且在分析大量样品的时候会受到限制。其还有一个缺点即难以一次处理多个样品因为等位基因越多就需要越大量的PCR-SSP。第二，通过PCR-RFLP区分HLA基因型的方法是一种用于分析等位基因对限制性酶反应类型的相对简单的方法。该方法通过被多种限制性内切酶降解的一定长度的DNA片段区分等位基因的类型。虽然这种方法容易确定结果而且简便，但它的缺点是例如在限制性内切酶的识别位点受到限制时，它就不能进行区分，并且由于需要使用聚丙烯酰胺凝胶因此其不能同时区分大量样品或几十个等位基因。因此，其对于分析只有几个等位基因的基因型的情况是足够的。第三，PCR-SSCP方法是加入变性剂如甲酰胺变性为单链DNA(ssDNA)后，将PCR产物在非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。ssDNA根据碱基序列在电泳中有特定的结构并因此有特定的迁移速率，因此各自表现出其它类型的条带。利用这些性质分析HLA基因型的技术非常复杂并需要很高的技术。对结果进行分析时需要大量的经验和知识。第四，基于序列的分型(Sequence Based Typing)是在对HLA基因分别进行PCR扩增后研究碱基序列的方法。用于该方法的试剂盒的一个例子是ABI公司(美国)的HLA基于序列的分型(SBT)。然而该试剂盒非常昂贵并且该方法需要价格昂贵的设备。而且实验程序也十分复杂。第五，PCR-SSOP方法是一种分析方法，其合成与表示遗传多态性的区域的碱基序列互补的探针，并分析探针和PCR扩增产物的杂交。因为容易发生与其它具有相似碱基序列的等位基因的杂交，所以该方法需要大量探针和经验、技术来建立适当的杂交温度和反应条件。即使该方法能够根据一种探针得到精确的结果，但由于使用滤纸，所以在固定大量探针方面是受到局限的，而且由于一份滤纸只能分析一种类型，所以需要大量时间和劳力来处理和分析很多样品。可以得到的使用该方法的商品是INNOGENETICS公司(比利时)的INNO LiPA试剂盒和使用Line Probe分析方法(该方法是用分别用于HLA I类和II类的SSOP进行反向杂交)的DYNAL Biotech公司(美国)的Dynal RELITMSSO HLA分型试剂盒。
如上所述，虽然存在一些使用几种分型方法来分析HLA基因的商品，但是这些方法的共同的缺点是，同时进行HLA-A、-B、-Cw和DR的分型时需要很多时间和劳力。特别是，分析大量样品更加困难。
最近的DNA芯片技术(该技术可以将少量的DNA以高密度固定在如微小的玻片、硅等薄板上并能够同时对大量样品进行分析)开发了能够用于分析基因表达、基因诊断、寻找基因突变、药物检测以及疾病诊断等的新型分析系统。本发明就是利用这种DNA芯片技术，在玻片上同时对HLA-A、-B、-Cw和-DR进行分析。即，将每个探针结合到醛基化玻片的5个区域上。将通过不对称PCR方法扩增的HLA基因与结合在玻片上的探针杂交。通过对使用HLA基因分型程序对得到的探针进行分析可以鉴定HLA基因型。
发明内容
因此，为了克服上述问题，本发明的目的是提供一种包括用于分析HLA基因型的组合物的寡聚核苷酸组合物。
本发明的另一个目的是，提供一种使用该组合物的改良的HLA基因分型方法。
为了达到上述目的，本发明提供了一种具有多个用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸探针的组合物，其中该组合物包括至少一个选自由以下探针组构成的组的探针组由至少两个用于分析HLA-A基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO1-41所组成的组；由至少两个用于分析HLA-B基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO42-89所表示的碱基序列组成的组；由至少两个用于分析HLA-Cw基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO90-112表示的碱基序列所组成的组；和由至少两个用于分析HLA-DR基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO113-140表示的碱基序列所组成的组。
本发明还提供了一种测试用支持物，将具有多个用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸探针的组合物固定在其上，其中该组合物包括至少一个选自由以下探针组构成的组的探针组由至少两个用于分析HLA-A基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO1-41所组成的组；由至少两个用于分析HLA-B基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO42-89所表示的碱基序列组成的组；由至少两个用于分析HLA-Cw基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO90-112表示的碱基序列所组成的组；和由至少两个用于分析HLA-DR基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO113-140表示的碱基序列所组成的组。
优选的是，所述支持物为自由滤膜、条带(strip)、微球、芯片、玻片、多孔板、膜以及光学纤维所组成的组。
本发明还包括至少一种选自由SEQ ID NO141-157表示的用于分析HLA基因型的碱基序列所组成的组的引物，其中该引物用于检测所述探针和靶基因之间的杂交反应。
在本发明的引物中，由SEQ ID NO142、144、146、148、150、152和154表示的反义引物的优选例子是与生物素结合或与若丹明(rhodamine)结合的。在所述引物中，结合生物素的反义引物与链霉抗生物素蛋白-花青苷相互作用。
另外，本发明的优选实施例是提供一种分析HLA基因型的方法，其包括以下步骤(a)从血液细胞和组织中分离HLADNA；(b)使用分离的DNA进行不对称PCR；(c)将权利要求1或2的探针与不对称PCR产物结合；(d)鉴定所述结合。
在本发明的所述鉴定步骤中，使用若丹明或链霉抗生物素蛋白-花青苷，其中链霉抗生物素蛋白-花青苷与生物素结合。利用微阵列扫描对结果进行鉴定和HLA基因分型程序对结果进行分析，因此HLA基因型可以很容易被鉴定。在本发明的一个优选实施例中，开发了HLA寡聚核苷酸芯片，其用于在使用最近开发的DNA微阵列技术的玻片上同时对HLA-A、-B、-Cw和-DR进行分析。也就是说制备了用于分析HLA基因型的与21类HLA-A特异反应的38个寡聚核苷酸，与36类HLA-B特异反应的46个寡聚核苷酸，与14类HLA-Cw特异反应的20个寡聚核苷酸，与16类HLA-DRB1/3/4/5特异反应的22个寡聚核苷酸和与8类HLA-DRB1的B1*3、*8、*11、*12、*13、*14、*15和*16特异反应的17个寡聚核苷酸。它们被结合在醛基化玻片的5个区域上。将通过不对称PCR方法扩增的HLA基因与结合在玻片上的寡聚核苷酸探针进行杂交。利用荧光反应方法对反应后的探针进行分析，鉴定了HLA的87个基因型。
图1是表示HLA寡聚核苷酸芯片整个玻片的图。即具有如标示数字所示的5个槽，以在玻片上同时对HLA-A、-B、-Cw和-DR进行分析。如表所示，其中在总共155个探针中，将下列探针在玻片上设置两次，其被分在每个组中38个区分HLA-A基因型的探针，2个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；46个区分HLA-B基因型的探针，1个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；20个区分HLA-Cw基因型的探针，2个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；22个区分HLA-DRB1/3/4/5基因型的探针，1个用作其阳性对照的探针和1个用作其阴性对照的探针；17个增强区分HLA-DRB1基因型能力的探针(其是必需的因为区分HLA-DRB1/3/4/5基因型的探针受到DRB3/4/5基因型的影响并且HLA-DRB1的分析变得部分不清楚)，1个用于阳性对照的探针和1个用于阴性对照的探针。通过将COVERWELL PERFUSION CHAMBER(SIGMA美国)附着到分散状态的探针上以制造HLA寡聚核苷酸芯片，用来进行区分每个基因型的探针的混合反应。
图2至6是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于HLA-A*11/*31、B*27、Cw*06和DRB*01/*11/DRB3型的荧光反应结果。这些图是将图1所示的玻片的5个槽中所发生反应进行放大的图像。
图2a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-A*11和HLA-A*31型的样品同时发生的荧光反应的结果。该图表示在41个探针中的与A*11型相关的探针13、14、15、17、18、23、29、30和33以及与A*31相关的探针11、13、15、18、21、25、26、29、32、39和40(这些在表4中被称为“活性HLA型”)上同时发生的阳性反应。探针01和41是阳性对照，其出现在所有反应中，探针06是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。
图2b表示固定在玻片上的探针的位置。
图3a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-B*27型的样品的荧光反应的结果。该图表示发生48个探针中与B*27相关的探针09、12、21、30、31、32、36、37、42和47(其在表5中被称为“活性HLA型”)上的阳性反应。探针01是阳性对照，其出现在所有反应中，探针06是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。
图3b表示设置在玻片上的探针的位置。
图4a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-Cw*06型的样品的荧光反应的结果。该图表示发生在23个探针中与Cw*06相关的探针06、08、13和17上的阳性反应(其在表6中称为“活性HLA型”)。探针01和23是阳性对照，其出现在所有反应中，探针04是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。
图4b表示设置在玻片上的探针的位置。
图5a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-DRB1*01和HLA-DRB1*11型的样品同时发生的荧光反应的结果。该图表示同时发生在41个探针中与DRB1*01相关的探针07、10和与DRB1*11相关的探针04、10、13和与DRB1*11一起遗传的DRB3相关的探针16、24上的阳性反应(其在表7中被称为“活性HLA型”)。探针01是阳性对照，其出现在所有反应中，探针05是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个的相同的点用以使反应更加精确和减少误差。
图5b表示设置在玻片上的探针的位置。
图6a是表示HLA寡聚核苷酸芯片对于含有HLA-DRB1*01和HLA-DRB1*11型的样品同时发生的荧光反应的结果。该图表示同时发生在19个探针中的与选择性扩增所得到的DRB*11相关的探针07、10、13上的阳性反应(其在表8中被称为“活性HLA型”)。探针01是阳性对照，其出现在所有反应中，探针04是阴性对照，其在任何反应中都不出现，这也能证明试验的精确度。设置相同探针的两个相同的点用以使反应更加精确和减少误差。
图6b表示设置在玻片上的探针的位置。
荧光引物和探针用在PCR和杂交反应中。为了分析结果，以使用GenePiX4000 Scanner(Axon仪器公司，美国)的HLA分型程序对表现探针类型的荧光进行分析。
具体实施例方式
的详细描述参考附图根据示范性实施方式对本发明进行详细描述，其仅作为说明的方法提供，因此并不限制本发明。
实施例1合成HLA引物及其碱基序列表1中表示用于不对称PCR的HLA PCR引物，其分析HLA-A、-B和Cw的外显子2和3以及HLA-DRB1/3/4/5的外显子2的共同反应位点，并分析仅扩增8种特定基因型的位点例如HLA-DBR1的外显子2上的B1*3、*8、*11、*12、*13、*14、*15和*16。
杂交反应后，将若丹明连接在不对称PCR中使用的反义引物的5′端用来鉴定荧光反应，或者在杂交反应后，连接生物素使其与链霉抗生物素蛋白-花青苷结合。该引物应发明人的要求由Metabion公司(德国)按照分子克隆(Molecular cloning)第三版(Sambrook和Rusell，Cold Spring HarborLaboratory Pess，New York，美国，2001)10.42中描述的合成寡聚核苷酸的方法合成的。
表1 用于分析HLA基因型的引物碱基序列
实施例2HLA DNA的提取和不对称PCR反应1)使用Gentra Systems公司的PUREGENETMDNA分离试剂盒分离HLA DNA。将300μl血液与900μl RBC裂解溶液混合。将混合物在室温下反应1分钟，并伴随10次振动。然后，以13000rpm将混合物离心20秒。取20μl上清液。
2)将剩余的上清液漩涡(vortex)10秒以重悬浮白细胞后，加入300μl细胞裂解溶液。然后用移液管将细胞裂解。
3)向细胞裂解溶液中加入100μl蛋白质沉淀溶液，将混合液漩涡20秒。然后以13000rpm将混合液离心1分钟。
4)将含有DNA的上清液与100％的异丙醇混合。然后摇试管50次以混合，以13000rpm将试管液离心1分钟。
5)除去上清液并用300μl 70％乙醇清洗沉淀。以13000rpm离心1分钟。
6)除去上清液，使沉淀干燥。然后用100μl水合DNA的溶液对沉淀进行悬浮。
7)使用GeneAmp PCR体系9600热循环仪(Perkin Elmer CetusCompany，美国)进行如表2所示的不对称PCR反应。
8)将5μl不对称PCR产物和1μl凝胶上样缓冲液(0.25％溴酚兰，0.25％二甲苯胺FF和15％Ficol 1400)混合。然后在含有1μl/ml溴化乙啶(EtBr)的2％琼脂糖凝胶上进行电泳。使用装配紫外透射仪的图像分析仪(VilberLourmat Company，France)对PCR带进行鉴定。
表2 HLA不对称PCR反应条件
实施例3合成用于制备HLA寡聚核苷酸芯片的探针及其碱基序列将氨基链(Amino links)连接在所有探针的每个5′端用于醛基化玻片上的共价键。将10-20个寡聚(dT)连接到探针上使杂交容易进行。然后，将表3中所示的碱基连到氨基链-寡聚(dT)10-20上。简言之，具有“氨基酸链-寡聚(dT)10-20-探针碱基序列”顺序的引物已经按照发明人的要求由Metabion公司合成。通过分析如表3中所述21种类型的HLA-A、36种类型的HLA-B、14种类型的HLA-Cw和16种类型的HLA-D，确定所鉴定HLA基因型的碱基序列。
在表4至7所示的碱基序列中，中间的大写字母表示的碱基是最重要的碱基序列。以所述碱基为中心，合成了约13-30bp的探针，其确定了反映Tm和GC％的60～65℃。
表3 所分析的HLA基因型和种类
表4 用于确定HLA-A基因型的探针碱基序列
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表5 用于测定HLA-B基因型的探针碱基序列
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表6 用于确定HLA-Cw基因型的探针碱基序列
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表7 用于确定HLA-DRB1/3/4/5基因型的探针碱基序列
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表8 用于确定HLA-DRB1基因型的探针碱基序列
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实施例4制备HLA寡聚核苷酸芯片1)在寡聚核苷酸芯片的制备中使用NuricellInc.(韩国)或CellInc.(美国)的醛基化玻片。将100pmole/μl的连接氨基的探针与等量的3X SSC混合。将所得到的探针固定在玻片上并在室温下反应16小时。然后用0.2％的SDS清洗该玻片2次，每次5分钟，接着用蒸馏水清洗2次，每次5分钟。用加热至95℃的蒸馏水清洗2分钟后，用室温的蒸馏水清洗5分钟。
2)该玻片与硼氢化钠(1.3g NaBH4，375ml PBS和125ml 100％EtOH)反应5分钟后，用0.2％的SDS清洗三次，每次1分钟，用蒸馏水清洗两次，每次1分钟，然后在室温下干燥。
3)通过将Coverwell Perfusion Chamber(SIGMA，美国)连接在玻片上分割出反应槽，用于HLA PCR的5种反应物各自反应。在使用前将制成的HLA寡聚核苷酸芯片于室温下储藏于暗处。
实施例5与HLAPCR产物的杂交反应1)将结合了若丹明或生物素的HLAPCR产物与杂交溶液(3X SSC和0.3％SDS)以1∶9的比例混合。当使用生物素引起荧光反应时，加入1μl/ml链霉抗生物素蛋白-花青苷进行反应。
2)向玻片的带盖的反应室中滴加90μl杂交缓冲液。该玻片在62℃下反应1小时。
3)在室温下用1X SSC清洗该玻片5分钟，用0.1X SSC清洗2分钟，然后在室温下干燥。
4)鉴定结果使用Scanner(GenePiX4000，Axon仪器公司，美国)分析荧光探针以对HLA基因型进行鉴定。用发明人开发的HLA基因分型程序对其进行分析。
在表4～7中所示的碱基序列中，中间由大写字母表示的碱基是最重要的碱基序列。以所述碱基为中心，合成了约13～30bp的探针，其确定反映Tm和GC％的60-65℃。
结果如图2至6中所示。图中，在PCR和杂交反应中使用荧光引物和探针。使用GenePiX4000 Scanner(Axon仪器公司，美国)分析荧光探针，以对HLA基因型进行鉴定。使用由发明人开发的HLA基因分型程序对其进行分析。
HLA基因分型程序通过对位于本发明的HLA寡聚核苷酸芯片的每个室中的探针的结果进行分析，形成一个合适的标准化方法。该程序形成中间区域，它引入了能够划分阳性和阴性的界线值这一概念。我们基于所述界线值来判断探针是阳性还是阴性。通过将探针的阳性或阴性与程序中编制的阳性和阴性类型的对照表比较，分析相应得HLA基因型，对HLA基因型进行鉴定。
工业上的应用本发明中，开发了一种寡聚核苷酸芯片，通过分析HLA基因用来诊断HLA-A、-B、Cw和DR基因型。使用该芯片的HLA基因分型，与通常使用的试剂盒相比，可以节约大量时间、材料成本和人工成本。即，本发明的HLADNA芯片仅通过一次实验就可以表现出HLA-A、-B、Cw和DR基因型，并且因为可以紧密地固定探针所以对于大量HLA等位基因只需要1个玻片，而通常的检测方法和试剂盒不能同时分析HLA-A、-B、Cw和DR基因型，因此实验必须分别进行。另外，本发明的方法使用了荧光材料，因此不需要颜色产生的步骤。本发明的方法也不需要通常方法所必需的许多步骤如清洗、颜色反应等，因此本发明的方法可以节约大量时间来得到期望的结果。
序列表<110>博康有限公司吉诺切克有限公司<120>用于分析人类白细胞抗原(HLA)基因型的寡聚核苷酸组合物及其检测方法<130>PCT04-032<150>KR1020040020155<151>2004-03-24<160>157<170>KopatentIn 1.71<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 01)的探针<400>1gtgggctacg tggacgaca 19<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 02)的探针<400>2gcgagccaga agatggagcc 20<210>3<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 03)的探针<400>3ctgaccgagc gaacctg 17<210>4<211>17
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 04)的探针<400>4attgggacgg ggagaca 17<210>5<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 05)的探针<400>5attgggaccg ggagaca 17<210>6<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 06)的探针<400>6tgcgctctgt gaccgc 16<210>7<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 07)的探针<400>7attgggacga ggagaca 17<210>8<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 08)的探针
<400>8ggatcgcgct ccgctacta 19<210>9<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 09)的探针<400>9gggaccggaa cacacgg17<210>10<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 10)的探针<400>10ttgggacctg cagacacgg 19<210>11<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 11)的探针<400>11gcaggagagg cctgagtat 19<210>12<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 12)的探针<400>12ctgaccgaga gagcctg 17
<210>13<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 13)的探针<400>13cagattgacc gagtggacct g21<210>14<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 14)的探针<400>14cagactgacc gagtggacct g21<210>15<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 15)的探针<400>15ctgaccgagt ggacctg 17<210>16<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 16)的探针<400>16actcgcagtt cgtgcagtt 19<210>17<211>14<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 17)的探针<400>17gagggccggt gcgt14<210>18<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 18)的探针<400>18cgtggagtgg ctccgc 16<210>19<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 19)的探针<400>19tacctggatg gcacgtgc 18<210>20<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 20)的探针<400>20ccagatgatg tttggctgc 19<210>21<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 21)的探针
<400>21tggagggcac gtgcgt 16<210>22<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 22)的探针<400>22tggatggcac gtgcgt 16<210>23<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 23)的探针<400>23ggagcagcag agagccta18<210>24<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 24)的探针<400>24caccatccag aggatgtatg gc 22<210>25<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 25)的探针<400>25caccatccag atgatgtatg gc 22<210>26
<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 26)的探针<400>26cagatcaccc agcgcaag18<210>27<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A27)的探针<400>27gagacggccc atgaggc17<210>28<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 28)的探针<400>28gaggcggccc atgaggc 17<210>29<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A29)的探针ttacatcgcc ttgaacgagg 20<210>30<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 30)的探针<400>30ttacatcgcc ctgaacgagg 20<210>31<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 31)的探针<400>31gcgggtatga acagcacgc 19<210>32<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 32)的探针<400>32ccatccagat gatgtatggc 20<210>33<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 33)的探针<400>33ccatccagat aatgtatggc 20<210>34<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 34)的探针<400>34agcagtggag agcctacc18
<210>35<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 35)的探针<400>35ctcagaccac caagcacaag tg 22<210>36<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 36)的探针<400>36tcacaccgtc cagaggatgt atg 23<210>37<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 37)的探针<400>37tcacaccctc cagaggatgt atg 23<210>38<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 38)的探针<400>38tcacaccatc cagaggatgt atg 23<210>39<211>15<212>DNA
<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 39)的探针<400>39gggtcggact ggcgc 15<210>40<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 40)的探针<400>40gggt cggacg ggcgc 15<210>41<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-A基因型(HLA-A 41)的探针<400>41ctgcgctctt ggaccgcg18<210>42<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 42)的探针<400>42gccctcccgt tgattggag 19<210>43<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 02)的探针
<400>43gcagctgaga acctacctg 19<210>44<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 03)的探针<400>44tatttcgaca ccgccatgtc 20<210>45<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 04)的探针<400>45cacccagctc aagtggg 17<210>46<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 05)的探针<400>46ggccggaata ttgggacc18<210>47<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 06)的探针<400>47agacggcacg attgagaca 19
<210>48<211>14<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 07)的探针<400>48aggatggcgc cccg14<210>49<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 08)的探针<400>49tagagcaaga ggggccg 17<210>50<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 09)的探针<400>50atctgcaagg ccaaggc 17<210>51<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 10)的探针<400>51gacttaccga gaggacctg 19<210>52<211>20<212>DNA<213>人工序列
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B11)的探针<400>52gtatttccac accgccatgt 20<210>53<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 12)的探针<400>53ggtatttcca cacctccgtg 20<210>54<211>14<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 13)的探针<400>54cgctggagcg cgcg14<210>55<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 14)的探针<400>55caaggcccag gcacag 16<210>56<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 15)的探针<400>56
cgggtatgac caggacg 17<210>57<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 16)的探针<400>57gtggagtcgc tccgc 15<210>58<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 17)的探针<400>58acagaagtac aagcgccag 19<210>59<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 18)的探针<400>59tccagaggat gtttggctg 19<210>60<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 19)的探针<400>60tctcccagcg caagttgg18<210>61<211>21
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 20)的探针<400>61acgacggcaa agattacatc g21<210>62<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 21)的探针<400>62cgggagacac agatctcc18<210>63<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 22)的探针<400>63gacc tggggc ccgac 15<210>64<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 23)的探针<400>64gttcgtgcgg ttcgaca 17<210>65<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 24)的探针
<400>65cacatcatcc aggtgatgta tgg 23<210>66<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 25)的探针<400>66agcgaggacg ggtctc 16<210>67<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 26)的探针<400>67ctacaccgct atgtcccg18<210>68<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 27)的探针<400>68ggaaggacaa gctggagc18<210>69<211>14<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 28)的探针<400>69tggacggcac ccag14
<210>70<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 29)的探针<400>70ctacaccgcc gtgtcc 16<210>71<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 30)的探针<400>71gcttcatcac cgtgggcta 19<210>72<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 31)的探针<400>72ggacctggc tcctgg 16<210>73<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 32)的探针<400>73cgcgctccgc tactaca 17<210>74<211>15<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 33)的探针<400>74ggagggcacg tgcgt 15<210>75<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 34)的探针<400>75cgagagaacc tgcggatc18<210>76<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 35)的探针<400>76caccctccag tggatgtatc c21<210>77<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 36)的探针<400>77accctccaga atatgtatgg ctg 23<210>78<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 37)的探针
<400>78agtccgagag aggagccg18<210>79<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 38)的探针<400>79agaggatgtc tggctgcga 19<210>80<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 39)的探针<400>80tatttctaca cctccgtgtc cc 22<210>81<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 40)的探针<400>81ggagcaggac agagccta18<210>82<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 41)的探针<400>82ggagcagcgg agagccta18<210>83
<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 42)的探针<400>83cgtgtggcgg agcagctgag a21<210>84<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 43)的探针<400>84ggagcagtgg agagccta18<210>85<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 44)的探针<400>85gacgccacga gtccgaggat 20<210>86<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 45)的探针<400>86tccgcagaca cctggag 17<210>87<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 46)的探针<400>87cggaacatga aggcctcc18<210>88<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 47)的探针<400>88gggtaccacc aggacgcc18<210>89<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-B基因型(HLA-B 48)的探针<400>89gaggacggag ccccgg 16<210>90<21t>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 01)的探针<400>90cggagtattg ggaccgggag aca 23<210> 91<211>28<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 02)的探针<400>91catgaagtat ttcttcacat ccgtgtcc 28
<210>92<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 03)的探针<400>92gaggtatttc tccacatccg tgt 23<210>93<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 04)的探针<400>93agacggcacg attgagaca 19<210>94<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 05)的探针<400>94tccgtgtcct ggcccggc18<210>95<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 06)的探针<400>95cgcttcatct cagtgggcta 20<210>96<211>19<212>DNA
<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 07)的探针<400>96agttcgtgca gttcgacag 19<210>97<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 08)的探针<400>97tgaacctgcg gaaactgcg 19<210>98<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 09)的探针<400>98gggccaggtt ctcacacca 19<210>99<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 10)的探针<400>99cgcgggcatg accag 15<210>100<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 11)的探针
<400>100cgccctgaat gaggacc 17<210>101<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 12)的探针<400>101gcggacaagg cggctcag18<210>102<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 13)的探针<400>102ggagcagtgg agagcc 16<210>103<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 14)的探针<400>103gagggcgagt gcgtg 15<210>104<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 15)的探针<400>104gctccgcgga tacctg 16
<210>105<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw16)的探针<400>105gatacctgaa gaatgggaag ga 22<210>106<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 17)的探针<400>106aggtatttcg acaccgccgt 20<210>107<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 18)的探针<400>107cggcccgtac ggcggagc18<210>108<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 19)的探针<400>108agacacagaa ctacaagcgc c21<210>109<211>19<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 20)的探针<400>109cagaggatgt ttggctgcg 19<210>110<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 21)的探针<400>110gtctcacatc ctccagagga t21<210>111<211>18<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 22)的探针<400>111tggaccgcgg cggacacg 18<210>112<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-Cw基因型(HLA-Cw 23)的探针<400>112caaggattac atcgccctga a 21<210>113<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-DR基因型(HLA-DRN 01)的探针<400>113
gacagcgacg tgggggagt 19<210>114<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>用于分析HLA-DR基因型(HLA-DRN 02)的探针<400>114ctggagcagg cgcggg 16<210>115<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 03探针<400>115cggtatctgc acagaggca 19<210>116<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 04探针<400>116ggcctgatga ggagtactg 19<210>117<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 05探针<400>117acagcgacca gggggag 17<210>118<211>21
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 06探针<400>118caggataagt atgagtgtca t21<210>119<211>29<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 07探针<400>119gttgctggaa agatgcatct ataaccaag29<210>120<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 08探针<400>120ggaaagacgc gtccataacc a21<210>121<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 09探针<400>121aggaggagct cctgcgctt 19<210>122<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 10探针
<400>122tataaccaag aggagtacgt gcg 23<210>123<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 11探针<400>123ggagcgagtg tggaacctga t21<210>124<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 12探针<400>124tttcttcaac gggacggag 19<210>125<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 13探针<400>125tggagtactc tacgkstgag tgt 23<210>126<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 14探针<400>126ggaagacgag cgggcc 16
<210>127<211>17<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 15探针<400>127cctgctgcgg agcactg 17<210>128<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 16探针<400>128ggtggacaat tactgcagac a21<210>129<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 17探针<400>129tggagcaggt taaacatgag tgt 23<210>130<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 18探针<400>130ggccgggtgg acaac 15<210>131<211>19<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>HLA-DRN 19探针<400>131ccgaggtgga cacctattg 19<210>132<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 20探针<400>132aaccaggagg agaacgtgc 19<210>133<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 21探针<400>133gcagcctaag agggagtgtc a21<210>134<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 22探针<400>134tcctggaaag actcttctat aacca25<210>135<211>15<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 23探针
<400>135cgggccctgg tggac 15<210>136<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRN 24探针<400>136gacagatact tccataacca ggagg25<210>137<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRS 08探针<400>137cataaccagg aggagttcgt g21<210>138<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRS 12探针<400>138cagaaggacc tcctggagc 19<210>139<211>16<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRS 13探针<400>139cctggaagac aggcgc 16<210>140
<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRS 15探针<400>140cagaaggaca tcctggaaga c21<210>141<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-A外显子2正义引物<400>141aaaccgcctc tgyggggaga agcaa25<210>142<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-A外显子2反义引物<400>142gatctcggac ccggagactg tgg 23<210>143<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-A外显子3正义引物<400>143tcsgggccag gttctcacac c21<210>144<211>25<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-A外显子3反义引物<400>144gtgttggtcc caattgtctc ccctc25<210>145<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-B外显子2正义引物<400>145gctcccactc catgaggtat 20<210>146<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-B外显子2反义引物<400>146taracgcgcc tgggsctctc g21<210>147<211>22<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-B外显子3正义引物<400>147tacccggttt cattttcagt tg 22<210>148<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-B外显子3反义引物<400>148attctccatt caasggaggg cgac 24
<210>149<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-Cw外显子2正义引物<400>149ctcccactcc atgargtatt t21<210>150<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-Cw外显子2反义引物<400>150taaaggygac tggggctctc t21<210>151<211>24<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-Cw外显子3正义引物<400>151tttacccggt ttcattttca gttt 24<210>152<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-Cw外显子3反义引物<400>152gctgatccca ttttcctccc ctc 23<210>153<211>20<212>DNA
<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRB 1/3/4/5外显子2正义引物<400>153tccccacagc acgtttcttg 20<210>154<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRB1/3/4/5外显子2反义引物<400>154ccgctgcact gtgaagctct 20<210>155<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRB1外显子2正义-1引物<400>155tcctgtggca gcctaagagg 20<210>156<211>27<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRB1外显子2正义-2引物<400>156agcacgtttc ttggagtact ctacgtc 27<210>157<211>26<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>HLA-DRB1外显子2正义-3引物
<400>157gcacgtttct tggagtactc tacggg 2权利要求
1.一种含有多个用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸探针的组合物，其特征为，所述组合物包括至少一个选自由以下探针组构成的组的探针组由至少两个用于分析HLA-A基因型的探针所组成的探针组，其探针选自由SEQID NO1-41所组成的组；由至少两个用于分析HLA-B基因型的探针组成的探针组，其探针选自由SEQ ID NO42-89表示的碱基序列组成的组；由至少两个用于分析HLA-Cw基因型的探针组成的探针组，其探针选自由SEQ IDNO90-112表示的碱基序列组成的组；和由至少两个用于分析HLA-DR基因型的探针组成的探针组，其探针选自SEQ ID NO113-140表示的碱基序列组成的组。
2.一种测试用支持物，其包括根据权利要求1所述的探针组合物和支持物，其特征为，所述探针组合物被固定在所述支持物上。
3.根据权利要求2所述的支持物，其中，所述支持物选自由滤膜、条带、微球、芯片、玻片、多孔板、膜、光学纤维组成的组。
4.至少一个选自由SEQ ID NO141-157表示的用于分析HLA基因型的碱基序列组成的组的引物，其中所述引物用于检测根据权利要求1或2所述的探针和靶基因之间的杂交反应。
5.根据权利要求4所述的引物，其中，选自由SEQ ID NO142、144、146、148、150、152和154表示的碱基序列组成的组的反义引物与生物素结合或与若丹明结合。
6.根据权利要求5所述的引物，其中，结合生物素的反义引物与链霉抗生物素蛋白-花青苷相互作用。
7.一种分析HLA基因型的方法，其包括以下步骤(a)从血液、细胞和组织中制备HLA DNA；(b)使用制备的DNA进行不对称PCR；(c)将根据权利要求1或2所述的探针与不对称PCR产物结合；(d)鉴定所得到的结合；(e)通过使用HLA分型程序分析被鉴定的结合。
全文摘要
本发明涉及用于分析HLA基因型的寡聚核苷酸组合物及其检测方法。
文档编号C12Q1/68GK1954084SQ200480042529
公开日2007年4月25日 申请日期2004年6月23日 优先权日2004年3月24日
发明者朴荣石, 黄丞镛, 金银夏, 金容贤, 姜镇锡, 尹贤圭, 朴银, 吴文珠, 李炅律 申请人:博康有限公司, 吉诺切克有限公司