专利名称：：一种低酸价灵芝孢子油的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种灵芝孢子油的制备方法，特别是一种低酸价灵芝孢子油的制备方法。
背景技术：
：灵芝又称为瑞草、灵芝草。灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的孢子，为灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质。灵芝孢子具有结实坚固的细胞壁，可耐酸、耐碱、耐温、耐压，对消化酶也非常稳定，孢内物质被包覆而不宜提取。为提高x寸灵芝孢子的生物利用率，对灵芝孢子进行有效的破壁，而后萃取孢子内含物十分必要。灵芝孢子油是从灵芝孢子中萃取得到的油状脂质物。灵芝孢子油的提取方法有传统的溶剂提取法，但存在提取效率低、能耗高、费时长等缺点。超临界C02萃取技术是新兴的一项萃取、分离和纯化的技术，具有出油率高、产品质量高、功能性物质的活性保持完好、无化争溶剂消耗和残留、无污染靴点，是灵芝孢子油提取的理想方法。专利CN1194079C公开了一种灵芝孢子油超临界CO2萃取的制备方法，将灵芝孢子膨化、制粒后超临界萃取孢子油，该法采用的灵芝孢子膨化的过程m较高(达8(M4(TC)，将会加速孢子内油脂类物质的氧化及M!t过程，影响了孢子油产品的品质。专利CN1114446C也公开了一种灵芝孢子有效成分的萃取方法，但所述的工艺条件比较宽泛，在实际生产中是难以在如此宽泛的条件下得到高纯度和高出油率的孢子油产品的。专利CN1094766C公开了一种灵芝孢子油的超临界萃取加工方法，涉及将灵芝孢子与水、明lM淀粉的混^t/为粘合剂制粒成型后进行超临界萃取，但是所加入的辅料和粘合齐陏造成提取物污染的可能，虹艺所涉及的超临界萃取的温度、压力较宽，生产时难以掌握好工艺斜牛以制得高纯度孢子油产品，同时萃取时间也达到35小时，难以真正实施工业化生产。专利CN1239100C也公开了一种灵芝孢子油及其制备方法和用途，涉及以破壁孢子为原料，用乙醇溶液制粒干燥后超临界C02萃取孢子油。专利CN1907303A公开了一种采用超生强化超临界流体技术提取灵芝孢子油的制备方法，'提取率比常规的超临界流体萃取法提高15~30%，并采用了一步干压制粒法)(繊壁灵芝孢子|^^粒后提取，无需加入倒可辅料和粘合剂，也不需要经过加热和千燥的过程，简化了工艺，节约了生产成本。专利CN1883590A公开了一种全灵芝孢子油的制备方法，以灵芝孢子粉、灵芝粉为原料，经酶法破壁、湿法制粒、超临界C02萃取、离心精制后得到，与常规的机械破壁孢子萃取的灵芝孢子油相比，其有效成分的种类更加齐全，生物效能更高，产品的过氧化值也较低，但此工艺比较复杂，加工周期也很长，不太适合工业化生产。上述公开的超临界C02萃取制备灵芝孢子油的方法，都不同程度的存在着工艺条件要求高、提取收率不稳定等问题，而且应用上述方法所制备的灵芝孢子油产品，都无例外的存在着一个问题酸价过高(即其中存在着较多的游离脂肪酸)。在所给出的酸价数据中可以看出，绝大部分最终的灵芝孢子油产品的酸价在20mgKOH/g油以上，最高的达到40mgKOH/g油(对应的游离脂肪酸含量为20%)。灵芝孢子油的脂肪酸组分中，不饱和脂肪酸的含量在60%以上，有的还达到75.7%(中国食用菌，2007，25:40)，劍门知道，不饱和脂肪酸具有不耐热、稳定性差等缺点，在使用及储存过程中极易氧化，产生伤害人体的自由基及各种有毒氧化产物，而且游离形式的脂肪酸要比以酯形式存在的脂肪酸的稳定性差，在相同条件下，游离态的脂肪酸更易发生氧化。在应用上述方法得到的灵芝孢子油产品中，过高的游离脂肪酸含量(1(K20%)，而且大部分游离脂肪酸为不饱和脂肪酸，这给产品在使用及储存过程中的氧化稳定性带来很大的隐患，如果控制的不好将会发生氧化变质，X寸产品的气味、夕卜观等产生影响，而且还会产顿人体有害的物质，带来安全问题。由于上述的缺点，需要进行进一步的研究适宜的工艺条件，并有必要引入一些新思路、新方法来制备具有重要生理活性和强氧化稳定性的高品质灵芝孢子油，为相关的药品、保健品、食品等行业衝共优质的原料。
发明内容本发明的目的在于针对已有技术存在的缺点，将超临界流体萃取技术与超临界流体酶催化反应相耦合，提供一种低酸价灵芝孢子油的制备方法。本发明的低酸价灵芝孢子油的制备方法，主要包括以下步骤-(1)取灵芝孢子粉将其破壁、制粒；(2)称取步骤(1)中的灵芝孢子粉，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，i!A超临界C02流体，进行超临界萃取，萃取压力为2(K35MPa，温度为3(K70'C，萃取时间为14h;(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的C02在加入甘油后SA到预先装有固定化脂肪酶的反应段中，在3(K7(TC，超临界C02压力为2(K35MPa的剝牛下进行脂肪謝崔化的酯化反应，反应时间为14h;甘油加入量为灵芝孢子粉干重的0.3~2%，固定化脂肪酶的加入量为灵芝孢子粉干重0.5~5%;(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的C02i4A到分离段中，Mffi后从分离段放料口放出物料，再除去水分和其它杂质后，得到灵芝孢子油。所述步骤(1)中破壁是通过机械作用或酶的,作用，所述步骤(1)中制粒是将粉细度为350-450目的鹏孢子縱ij戯径为0.1~0.5cm的颗粒。所述步骤(3)的固定化脂肪酶为根霉属、曲霉属、毛霉属、细菌或酵母菌来源的微生物脂肪酶中的一种或多种。所述步骤(4)中除去水分和其它杂质是以500(^15000r/min速度离心，再通过^7jC硫酸钠除去少量水分。本发明与现有技术相比，具有如下有益效果-本发明提供了一种在产品质量、环保性等方面更具优势的低酸价灵芝孢子油的制备方法，得到具有重要生理活性和强氧化稳定性的高品质灵芝孢子油。具体实船式下面结合实施例详细描述本发明的一种低酸价灵芝孢子油的制备方法，但本发明的保护范围不受下列实施例的限制。灵芝孢子油中总三結的含量采用可见分光光度法测定，并以熊果酸为对照。酸价的测定方法按中国药典附录的方法测定。实施例1(1.)取灵芝孢子粉将其通过机械作用或酶的,作用、将粉细度为400目的破壁孢子粉制成直径为O.lcm的颗粒。(2)称取(1)得到的灵芝孢子粉1000g，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界C02流体，进行超临界萃取，萃取压力为30MPa，温度为50'C，萃取时间为lh;(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的C02在加入3g甘油后进入到预先装有5g固定化月旨肪酶Lipozyme⑧RMM(Novozymes公司，来源于毛霉及/^owwtw柳'e/^)的反应段中，在30°C，超临界CO2压力为20MPa的割牛下进行脂肪斷崔化的酯化反应，反应时间为lh。(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的C02进入至吩离段中，MH后从分离段放料口放出物料，再5000r/min速度离心，再fflil^7jC硫酸钠除去少量水分得到淡黄色澄清的油状物，即为灵芝孢子油l。实施例2(1)取灵芝孢子粉将其通过机械作用M或酶的1W作用、将粉细度为350目的破壁孢子粉制成直径为0.5cm的颗粒。(2)称取(1)得到的灵芝孢子粉1000g，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界C02流体，进行超临界萃取，萃取压力为20MPa，温度为30。C，萃取时间为3h;(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的C02在加入15g甘油后进入到预先装有20g固定化月旨肪酶Novozym435(Novozymes公司，来源于南极假丝酵母QwK&fo^"torcft'c)的反应段中，在5(TC，超临界CO2压力为30MPa的条件下进行脂肪酶催化的酯化反应，反应时间为2h。(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵魏子油的C02JSA至吩离段中，舰后从分离段放料口放出物料，再10000r/min速度离心，再M31无7K硫酸钠除去少量7jC分得到淡黄色澄清的油状物，即为灵芝孢子油2。实施例3(1)取灵芝孢子粉将其通过机械作用M或酶的,作用、将粉细度为450目的破壁孢子粉制成直径为0,3cm的颗粒。(2)称取(1)得到的灵芝孢子粉lOOOg，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界C02流体，进行超临界萃取，萃取压力为35MPa，鹏为70'C，萃取时间为4h;(3)从萃取肚部流出的含有灵芝孢子油的CO2在加入20g甘油后进入至顿先装有50g固定化于硅藻土上的脂肪酶LipaseA"Amano"6(Amano公司，来源于黑曲霉A^^gz7/us的反应段中，在7(TC,超临界C02压力为35MPa的条件下进行脂肪謝崔化的酯化反应，反应时间为4h。(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的C02SA到分离段中，Mffi后从分离段放料口放出物料，再15000r/min速度离心，再ffl31无7K硫,除去少量水分得到淡黄色澄清的油状物，即为灵芝孢子油3。实施例4(1)取灵芝孢子粉将其通过机械作用破壁或酶的(W作用、将粉细度为450目的破壁孢子粉制成直径为0.3011的颗粒。(2)称取(1)得到的灵芝孢子粉1000g，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界C02流体，进行超临界萃取，萃取压力为35MPa，？显度为7(TC，萃取时间为4h;(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的C02在加入20g甘油后进入到预先装有50g固定化脂肪酶LipozymeTLIM(Novozymes公司，来源于棉状嗜热丝孢菌77^womj;c^/flra^"ams)的反应段中，在7(TC,超临界C02压力为35MPa的斜牛下进行脂肪謝崔化的酯化反应，反应时间为4h。(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的C02进入到分离段中，MJ1后从分离段放料口放出物料，再15000r/min速度离心，再舰无水硫M除去少量水分得到淡黄色澄清的油状物，即为灵芝孢子油4。，实施例5(L)取灵芝孢子粉将其通过机械作用M或酶的,作用、将粉细度为450目的破壁孢子粉制成直径为0.3011的颗粒。(2)称取(1)得到的灵芝孢子粉1000g，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界C(V流体，进1彌临界萃取，萃取压力为35MPa，温度为70。C，萃取时间为4h;(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的CQ2在加入20g甘油后进入至顿先装有50g固定化于大孔吸附树脂的脂肪酶NewlaseF(Amano公司，来源于雪白根霉朋feo戸"iw^)的反应段中，在70°C，超临界C02压力为35MPa的剝牛下进行脂肪劇崔化的酯化反应，反应时间为4h。(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的C02JtA到分离段中，Mffi后从分离段放料口放出物料，再15000r/min速度离心，再通过无水硫酸钠除去少量7JC分得到淡黄色澄清的油-状物，即为灵芝孢子油5。实施例6(1.)取灵芝孢子粉将其通过机械作用M或酶的,作用、将粉细度为350目的破壁孢子粉制成直径为0.5cm的颗粒。(2)称取(1)得到的灵芝孢子粉lOOOg，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界C(V流体，进行超临界萃取，萃取压力为20MPa，鹏为3(TC，萃取时间为3h;(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的C02在加入15g甘油后进入到预先装有20g固定.化脂肪酶Lipozyn^RMM和Lipozyn^TLM(两者重量比为1:1)的反应段中，在50'C，超临界C02压力为30MPa的割牛下进行脂肪,崔化的酉旨化反应，反应时间为2h。(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的C02;iaA到分离段中，减压后从分离段放料口放出物料，再10000r/min鹏离心，再ffi31无7K硫Ml除去少量7jC分得到淡黄色澄清的油状物，即为灵芝孢子油6。实施伊"(1)取灵芝孢子粉将其通过机械作用或酶的,作用、将粉细度为350目的破壁孢子粉制成直径为0.5cm的颗粒。(2)称取(1)得到的灵芝孢子粉1000g，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界C02流体，进4彌临界萃取，萃取压力为20MPa，M^为30。C，萃取时间为3h;(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的C02在加入15g甘油后进入到预先装有20g固定化脂肪酶Novozym435、LipozymeRMM和LipozymeTLM(三者重量比为1:1:1)反应段中，在5(TC,超临界CO2压力为30MPa的条件下进行脂肪,化的酯化反应，反应时间为2h。(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的C02进入到分离段中，Mffi后从分离段放料口放出物料，再10000r/min速度离心，再ffiJl无7JC硫酸钠除去少量水分得到淡黄色澄清的油狀物，即为灵芝孢子油7。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表1为不同条件下得到的灵芝孢子油质量指标，表上表明本发明的方法提供了一种产品质量高的，低酸价灵芝孢子油。权利要求1、一种低酸价灵芝孢子油的制备方法，其特征在于，将超临界流体萃取技术与超临界流体酶催化反应相耦合，包括以下步骤(1)取灵芝孢子粉将其破壁、制粒；(2)称取步骤(1)得到的灵芝孢子粉，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界CO2流体，进行超临界萃取，萃取压力为20～35MPa，温度为30～70℃，萃取时间为1～4h；(3)从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的CO2在加入甘油后进入到预先装有固定化脂肪酶的反应段中，在30～70℃，超临界CO2压力为20～35MPa的条件下进行脂肪酶催化的酯化反应，反应时间为1～4h，其中，甘油加入量为灵芝孢子粉干重的0.3～2％，固定化脂肪酶的加入量为灵芝孢子粉干重0.5～5％；(4)从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的CO2进入到分离段中，减压后从分离段放料口放出物料，再除去水分和杂质后，得到灵芝孢子油。2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中是通过机械作用或酶的劂军作用，所述步骤(l)中帝胖立是将粉细度为35(M50目的破壁孢子私嘲腿径为0.1~0.5011的颗粒。3、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，戶腿步骤(3)的固定化脂肪酶为根霉属、曲霉属、毛霄属、细菌和酵母菌来源的微生物脂肪酶或中的一种或多种。4、根据权利要求l所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中除去水分和其它杂质是以500(M5000r/min速度离心，再舰^7jC硫酸钠除去水分。全文摘要本发明公开了一种低酸价灵芝孢子油的制备方法，包括以下步骤称取破壁、制粒后的灵芝孢子粉，置于超临界流体萃取设备的萃取段中，通入超临界CO<sub>2</sub>流体，进行超临界萃取；再从萃取段上部流出的含有灵芝孢子油的CO<sub>2</sub>在加入甘油后进入到预先装有固定化脂肪酶的反应段中，进行脂肪酶催化的酯化反应；最后从反应段上部流出的含有反应后的灵芝孢子油的CO<sub>2</sub>进入到分离段中，减压后从分离段放料口放出物料，除去水分和其它杂质后得到灵芝孢子油。本发明提供了一种在产品质量、环保性等方面更具优势的低酸价灵芝孢子油的制备方法，得到具有重要生理活性和强氧化稳定性的高品质灵芝孢子油。文档编号A23L1/28GK101176548SQ20071003184公开日2008年5月14日申请日期2007年11月30日优先权日2007年11月30日发明者宁正祥,博杨,杨继国,王永华申请人:华南理工大学