专利名称：：对应于转基因事件mon89034的玉米植物和种子及其检测和使用方法
技术领域：
：本发明涉及称为MON89034的转基因玉米植物及其与玉米事件(cornevent)MON89034无法区分的子代(它们也含有至少一种对应于插入转基因DNA的等位基因)，其种子已于2006年3月28日保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，保藏号PTA-7455。本发明的又一方面是所述玉米事件MON89034的植物和种子的子代植物或种子或可再生部分，所述玉米事含有选自以下的多核苷酸SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5。本发明还包括玉米事件MON89034的植物部分，包括但不限于花粉、胚珠、花、枝条(shoots)、根、茎(stalks)、穗丝、花序(tassels)、耳穗和叶，只要这些部分含有至少如上所述的多核苷酸。包含在MON89034基因组中的新的遗传组分，以及得自MON89034的这些产物，例如对应于16MON89034事件的玉米粉、玉米面、玉米油、玉米浆和留在玉米作物田间的生物量(biomass)，都为本发明的一个方面。0011]本发明提供具有玉米事件MON89034的所有生理学和形态学特征的昆虫抗性玉米植物。按照本发明的一个方面，提供检测称为MON89034的新玉米植物的转基因/基因组插入区的存在情况的组合物和方法。提供含有MON89034的至少一种接合序列的DNA序列，所述接合序列选自SEQIDNO:l(位于SEQIDNO:5上的2051-2070位)和SEQIDNO:2(位于l1367-11388位)及其互补物；其中接合序列涵盖插入基因组中的异源DNA和侧接插入位点的玉米细胞DNA之间的接合，并诊断所述事件(图l)。玉米事件MON89034和含有这些DNA分子的种子为本发明的一个方面。提供以下定义和方法以更好地详细说明本发明，并指导本领域一般技术人员实施本发明。除非另外指出，否则术语根据相关领域的一般技术人员的常规用法来理解。分子生物学的普通术语的定义也可见于Rieger等，GlossaryofGenetics:ClassicalandMolecular,第5版，Springer-Verlag:NewYork,1991;和Lewin,GenesV,OxfordUniversityPress:NewYork,1994。本文使用的术语"包含"意指"包括但不限于"。还要理解的是，也可以使两种不同的转基因植物交配，产生含有两个独立地分离添加的外源基因的后代。适宜后代的自交能够产生对于两个所添加的外源基因为纯合的植物。还设想了对亲本植物回交和与非转基因植物异交，无性繁殖就是这种情况。通常用于不同性状和作物的其它育种方法的描述可见于若干参考文献当中的一篇，i口Fehr，载于BreedingMethodsforCultivarDevelopment,^V—ilcox丄编辑，AmericanSocietyofAgronomy,MadisonWI(1987)。00301"探针"是连接常规可检测的标记或报告分子的分离核酸，所述标记或"t艮告分子例如为放射性同位素、配体、化学发光剂或酶。这样的探针与靶核酸链互补，就本发明而言，与玉米事件MON89034的基因组DNA链互补，无论它来自玉米植物还是来自包含该事件的DNA的样品。本发明的探针不仅包括脱氧核糖核酸或核糖核酸，而且包括特异性地结合靶DNA序列并可用于检测该靶DNA序列的存在情况的聚酰胺和其它探针材料。基于此处公开的侧翼DNA和插入序列的引物和探针可用于通过常规方法(例如通过重新克隆和对这些序列测序)证实(如有需要，则校正)所公开的序列。本发明的核酸探针和引物在严格条件下同耙DNA序列杂交。任何常规的核酸杂交或扩增方法均可用于鉴定样品中转基因事件的DNA的存在情况。在某些情况下，核酸分子或其片段能够与其它核酸分子特异性杂交。在本文中，如果两个核酸分子能形成反向平行的双链核酸结构，则这两个分子被称为能够彼此特异性杂交。如果核酸分子显示出完全互补，则一个核酸分子被称为另一个核酸分子的"互补物，，。在本文中，当一个分子的每个核苷酸均与另一个分子的核苷酸互补时，这些分子被称为表现出"完全互补"。如果两个分子可相互杂交，具有的稳定性足以使它们在至少常规的"低严格，，条件下保持互相退火，则它们被称为"最低限度互补"。类似的，如果分子可相互杂交，具有的稳定性足以使它们在常规的"高严格"条件下保持互相退火，则这些分子被称为"互补"。常规严格条件由Sambrook等，1989和Haymes等，描述于M/de/c爿cW外6"'fifeWo",/4尸rac"ca/JpproacA,IRLPress,Washington,DC(1985)。因此，允许相对于完全互补有偏离，只要这些偏离没有完全排除分子形成双链结构的能力。为了使核酸分子用作引物或探针，仅仅需要在序列上足够互补，以能够在所用的特定溶剂和盐浓度下形成稳定的双链结构。关于利用特定扩增？1物对进行靶核苷酸序列扩增(例如通过PCR)，"严格条件"是指这样的条件在DNA热扩增反应中使引物对仅与耙核酸序列(具有相应野生型序列(或其互补物)的引物应与该耙核酸序列结合)杂交并优选产生独特的扩增产物一扩增子。00381术语"特异于(靶序列)"是指在严格杂交条件下探针或引物仅同含有靶序列的样品中的该靶序列杂交。本文所用的"扩增的DNA"或"扩增子"是指为核酸模板一部分的把核酸序列的核酸扩增产物。例如，为了确定玉米植物是否由含有本发明玉米植物的转基因事件基因组DNA的有性杂交产生，可使用包含来源于紧邻插入异源DNA的插入位点的植物基因组中的侧翼序列的引物和来源于插入异源DNA的第二个引物的引物对，对从玉米植物组织样品提取的DNA实施核酸扩增方法，以产生诊断事件DNA的存在情况的扩增子。所述扩增子具有一定长度，并具有也诊断所述事件的序列。扩增子的长度可在引物对加一个核苷酸碱基对、优选加大约50个核苷酸》咸基对、更优选加大约250个核普酸》威基对、甚至更优选加大约450个核苷酸碱基对的组合长度范围内。或者，引物对可来源于插入DNA两边的侧翼序列，以便产生包含全部插入核苷酸序列的扩增子。来自植物基因组序列的引物对的成员可以与插入DNA分子相距一定距离定位，该距离可以在一个核苷酸碱基对至最高大约两万个核苷酸碱基对的范围内。术语"扩增子"的使用特别排除了可以在DNA热扩增反应中形成的引物二聚体。另一个方法是Winge(Innov.Pharma.Tech.00:18-24,2000)描述的焦磷酸测序技术(pyrosequencingtechnique)。在该方法中，设计与相邻基因组DNA和插入DNA接合区重叠的寡核苷酸。使寡核苷酸与来自目的区域的单链PCR产物杂交(一引物位于插入序列，另一引物位于侧翼基因组序列)，并在DNA聚合酶、ATP、硫酸化酶、萤光素酶、三磷酸腺苷双磷酸酶、腺苷5，磷酸硫酸酯以及萤光素存在下温育。单独加入dNTP，测量掺入产生的光信号。光信号指示归因于成功的扩增、杂交和单碱基或多碱基延伸的转基因插入序列/侧翼序列的存在情况。如Chen等描述的荧光偏振(GenomeRes.9:492-498,1999)是一种可用于检测本发明的扩增子的方法。使用此方法设计与基因组侧翼和插入DNA接合区重叠的寡核苷酸。将寡核苷酸与来自目的区域的单链PCR产物杂交(一引物位于插入DNA^列，另一引物位于侧翼基因组DNA序列)，并在DNA聚合酶和焚光标记的ddNTP存在下温育。单碱基延伸导致掺入ddNTP。可以使用荧光计根据偏振变化测量掺入。偏振变化指示归因于成功的扩增、杂交和单碱基延伸的转基因插入序列/侧翼序列的存在情况。7-l:l:l，位于SEQIDNO:5上的6809-7018位)。以上提到的非边界序列的元件的组合，在玉米植物中时一起用于51起Cry1A.105杀虫蛋白表达。这些元件随后按顺序连接至另一个表达盒，该表达盒由以下元件组成玄参花叶启动子(位于SEQIDNO:5上的7086-7649位)、玉米Hsp0前导序列(本文称为HSP0或I-Hsp70，位于SEQIDNO:5上的7672-8475位)和玉米叶绿体转运肽编码序列(本文称为CTP2或TS-SSU-CTP,位于SEQIDNO:5上的8492-8892位)。这些有效连接的区段然后连接至编码杀虫蛋白Cry2Ab的核苷酸序列(位于SEQIDNO:5上的8893-10800位)，该序列以其3，末端连接根癌农杆菌的胭脂碱合酶基因的3'非翻译区(本文称为T-AGRtu.nos-l:l:13,位于SEQIDNO:5上的10827-11377位)。Cry2Ab编码序列侧翼的这些元件在玉米植物中存在时一起用于指导Cry2Ab表达。Cry2Ab表达盒随后按顺序后接由根癌农杆菌的左边界(LB)区的足够部分组成的核苷酸序列。用于在样品中鉴定事件MON89034的代表性方法描述于事件特异性终点TaqmanPCR，用于其的条件实例描述于表1和表2。用于该测定的DNA引物为引物SQ2842(SEQIDN0:6)、SQ2843(SEQIDNO:7)、6FAMTM标记引物PB880(SEQIDNO:14)和VICTM标记引物PB2931(SEQIDNO:15)，6FAM和VIC为AppliedBiosystems(FosterCity,CA)的荧光染料产品，与DNA引物连接。对于TaqmanMGB探针，TaqDNA聚合酶的5'-胞外核酸酶活性由5'-末端切割焚光团和猝灭剂之间的探针。在与耙DNA链杂交时，猝灭剂和荧光团在三维空间足够分离，产生荧光(荧光团激发波长)信号。这些测定为用于AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700或StratageneRobocycler、MJEngine、Perkin-Elmer9700或EppendorfMastercyclerGradient热循环仪进行了优化。本领域4支术人员已知的、产生鉴定事件MON89034DNA的扩增子的其它方法和装置在本领域技术范围之内。可使用任何用于热循环的方法设置和进行DNA扩增，包括人工操作或电控操作温度步骤和循环。已成功使用StratageneRobocycler、MJEngine、Perkin-Elmer9700或EppendorfMastercyclerGradient热循环仪或AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700或MJResearchDNAEnginePTC-225热循环仪实施下列循环参数。在使用EppendorfMastercyclerGradient或MJEngine进4亍PCR时，热循环4义以计算冲莫式循环。在使用Perkin-Elmer9700时，循环条件以设为最大的升温速度实施。表2.接合性测定热循环仪条件循环数设置AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700150°C2分钟195°C10分钟1095。C15秒64。C1分钟(-rc/循环)3095。C15秒54°C1分钟110。C浸入在StratageneRobocycler、MJEngine、Perkin-Elmer'st6msGeneAmpPCRSystem9700或M〗ResearchDNAEnginePTC-225热循环仪中进行的DNA扩增已成功运行下列循环参数。在使用EppendorfMastercyclerGradient或MJEngine时，循环以计算沖莫式运行。在使用Perkin-Elmer9700时，循环以设为最大的升温速度运行。表4.接合性测定热循环仪条件<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>a:使用AppliedBiosystemsGeneAmpPCRSystem9700对应于转基因事件MON89034的种子已根据布达佩斯条约于2006年3月28日保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC),10801UniversityBoulevard,Manassas,Va.20110。ATCC保藏号或专利保藏号为PTA-7455。保藏物将在保藏处保藏30年，或在最后请求后保藏5年，或保藏专利的有效期，取更长久的那一个，并根据需要在该期限内更换。[00901已经图解和详述了本发明的原理，对于本领域技术人员应当显而易见的是，在不偏离这些原理的情况下，可在排列和细节上对本发明进行修改。我们要求保护在随附权利要求书的精神和范围内的所有修改。|0091本说明书中引用的所有出版物和公开专利文件都在此引用作为参考，其引用程度如同每种单独的出版物或专利申请具体个别地指明引入作为参考一样。权利要求1.一种被命名为转基因玉米事件MON89034的转基因玉米植物，用于获得所述植物、产生子代、获得生长植株或产生含所述转基因玉米事件的大量种子的代表性种子，保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，保藏号为PTA-7455。2.权利要求1的转基因玉米植物，所述转基因玉米植物含有诊断所述事件的DNA，其中所述DNA含有选自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核苷酸序列。3.权利要求2的转基因玉米植物、所述植物的子代、由所述植物培育的植物的细胞或由所述植物产生的种子，其中诊断所迷事件的所述DNA进一步选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2。4.权利要求3的转基因玉米植物，所述转基因玉米植物被加工为选自玉米粉、玉米面、玉米油、玉米蛋白质、乙醇和DDGS的农产品或食品。5.权利要求1的转基因玉米植物，所述转基因玉米植物表现出对鳞翅类昆虫侵袭的抗性。6.权利要求1的转基因玉米植物，在所述植物的细胞的基因组中含有选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的DNA分子。7.—种用于诊断生物样品中的转基因玉米事件MON89034DNA的存在情况的扩增子，所述扩增子包含选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2所示序列的多核苷酸序列。8.权利要求7的扩增子，其中所述生物样品包括玉米粉、玉米油、玉米饼、玉米种子、玉米胚芽、玉米淀粉和玉米面。9.一种含有连续核苷酸的分离的多核苷酸分子，所述连续核苷酸选自示于SEQIDNO:5的连续核苷酸，其中所述连续核苷酸含有约11个至约12000个核苷酸，并进一步含有选自SEQIDNO:l所示的核苷酸1-11或9-20以及SEQIDNO:2所示的核苷酸1-11或9-20的连续核普酸。10.—种含有连续核苷酸的分离的多核苷酸分子，所述连续核苷酸选自示于SEQIDNO:3的连续核苷酸，其中所述连续核苷酸含有约11个至约2000个核苷酸，并进一步含有选自SEQIDNO:l所示的核苷酸1-11和9-20的连续核普酸。11.一种含有连续核普酸的分离的多核苷酸分子，所述连续核苷酸选自示于SEQIDNO:4的连续核苷酸，其中所述连续核苷酸含有约11个至约914个核苷酸，并进一步含有选自SEQIDNO:2所示的核苷酸1-11和9-20的连续核苷酸。12.权利要求9-11中任一项的分离的多核苷酸分子，其中所述连续的核苷酸或其互补物可用于DNA扩增法，以由含有玉米DNA的生物样品产生扩增子，其中所述扩增子的检测诊断所述样品中转基因玉米事件MON89034DNA的存在情况。13.权利要求9-11中任一项的分离的多核苷酸分子，其中所迷连续的核普酸或其互补物可用于核普酸检测法中，以检测生物样品中转基因玉米事件MON89034的存在情况。14.一种检测生物样品中转基因玉米事件MON89034DNA的存在情况的试剂盒，包含由至少约11个至约12000个连续核苷酸组成的探针多核苷酸分子，所述探针多核苷酸分子与含有SEQIDNO:5所示序列的核普酸区段表现出显著同源性、或表现出显著互补性，其中所述探针包含选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2所示序列的核苷酸序列。15.—种检测扩增子的方法，所述扩增子诊断含有玉米DNA的生物样品中的转基因玉米事件MON89034DNA,所述方法包括(a)使所述生物样品与两种以上的引物在核酸扩增反应中一起接触；(b)进行核酸扩增反应；和(c)检测扩增子；其中所述扩增子包絲自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的核苦酸序列；和其中所述扩增子的存在情况用于诊断所述样品中的所述事件DNA。16.权利要求15的方法，其中所述扩增子含有选自SEQIDNO:l的连续核苷酸1-11或9-20和SEQIDNO:2的连续核苷酸1-11或9-20的核苷酸序列。17.—种检测多核普酸分子的存在情况的方法，所述多核普酸分子诊断样品中转基因玉米事件MON89034的存在情况，所述方法包括(a)使所述样品与探针接触，所述探针在严格杂交条件下所述多核苷酸分子杂交；(b)对所述样品和探针实施严格杂交条件；和(c)检测所述探针与所述多核苷酸分子的杂交情况；其中所述多核苷酸分子包含选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列；和其中在所述检测步骤中检测杂交情况用于诊断所述样品中所述多核苷酸分子的存在情况。18.—种含有选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列的分离純化的多核苦酸分子。19.一种含有诊断转基因玉米事件MON89034的DNA的杂种玉米植物，所述杂种玉米植物通过将转基因玉米事件MON89034与非事件MON89034的玉米植物一起育种产生。20.权利要求20的杂种玉米植物的种子，其中所述种子含有所述DNA。21.含有诊断转基因玉米事件MON89034的DNA的杂种玉米植物。22.权利要求21的杂种玉米植物的种子，其中所述种子含有诊断转基因玉米事件MON89034的DNA。23.—种由含有诊断转基因玉米事件MON89034的DNA的种子培育的玉米植物。24.由权利要求23的玉米植物产生的细胞、种子或由权利要求23的玉米植物收集的组织，其中所述细胞、种子或组织含有所述DNA。25.—种保护玉米植物免于鳞翅类昆虫侵袭的方法，包括在靶鳞翅类害虫的膳食中提供一种或多种转基因玉米植物细胞，每种玉米植物细胞在其基因组中都含有对应于SEQIDNO:l和SEQIDNO:2二者所示序列以及在SEQIDNO:l和SEQIDNO:2之间的、如SEQIDNO:5所示的连续核苷酸序列的多核苷酸，其中摄食所述转基因玉米植物细胞的耙鳞翅类昆虫被抑制进一步摄食所述玉米植物。26.权利要求25的方法，其中所述玉米植物进一步含有不同的杀虫剂，所述杀虫剂选自对非鳞翅类昆虫有毒性的蛋白、对线虫有毒性的蛋白、将基因靶向目标害虫进行抑制的dsRNA和抗真菌蛋白。27.—种保护玉米植物免于鳞翅类昆虫侵袭的转基因植物细胞的组合物，所述组合物以目标鳞翅类害虫的膳食提供，其中每种所述转基因玉米植物细胞在其基因组中均含有对应于SEQIDNO:l和SEQIDNO:2二者所示序列以及在所述SEQIDNO:l和SEQIDNO:2之间的、如SEQIDNO:5所示的连续核苷酸序列的多核苷酸。28.—种昆虫抗性玉米植物或其部分，所述玉米植物的种子已保藏于美国典型培养物保藏中心，保藏号为PTA-7455。29.—种昆虫抗性玉米植物细胞，其中具有选自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的至少一30.权利要求28的昆虫抗性玉米植物细胞的子代细胞，其中具有选自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的至少一种核苷酸序列的DNA构成了该植物细胞基因组的组成部分。31.权利要求30的子代细胞，其中所述细胞存在于由权利要求29的玉米植物细胞或子代细胞再生或培育的植物的种子中，其中所述种子含有所述至少一种核苦酸序列。32.—种生产昆虫抗性玉米植物的方法，包括由权利要求30的细胞或子代细胞再生玉米植物，使所述玉米植物与不同的玉米植物杂交，产生子代玉米植物，并通过分析每种子代玉米植物的选自SEQIDN0:1、SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的至少一种核苦酸序列，选择昆虫抗性子代植物。33.—种昆虫抗性玉米植物或其部分，其中编码Cry2Ab的DNA以及具有SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的核苷酸序列的DNA构成了所述植物或其部分的细胞中的基因组的组成部分。34.权利要求33的昆虫抗性玉米植物细胞，所述细胞还含有编码CrylA.105的DNA。35.权利要求34的昆虫抗性玉米植物，其中所述玉米植物的细胞(非配子)就选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核苷酸序列为杂合的。36.权利要求28的昆虫抗性玉米植物，其中所述玉米植物细胞就选自SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的核苷酸序列为纯合的。37.—种在含有诊断玉米事件MON89034的玉米DNA的生物样品中检测多核苷酸的方法，其中所述多核苷酸含有SEQIDNO:l或SEQIDNO:2所示的接合序列，所述方法包括(a)使所述样品与引物对接触，所述引物对在玉米事件MON89034的DNA的核酸扩增反应中使用时，产生诊断玉米事件MON89034的扩增子；(b)进行核酸扩增反应，由此产生扩增子；和(c)检测扩增子；其中所述引物对选自(l)含有SEQIDNO:3的玉米基因组部分的至少约15个连续核苦酸的第一引物和含有与SEQIDNO:5的异源插入DNA部分互补的至少约15个连续核香酸的第二引物，和(2)含有与SEQIDNO:4的玉米基因组部分互补的至少约15个连续核苷酸的第一引物和含有SEQIDNO:5的异源插入DNA部分的至少约15个连续核苷酸的第二引物；其中(l)中的所述扩增子含有SEQIDNO:l，而(2)中的所述扩增子含有SEQIDNO:2。38.用于在热扩增反应中产生扩增子的多核苷酸引物对，所述扩增子诊断生物样品中玉米事件MON89034DNA的存在情况，所述引物对选自(a)含有SEQIDNO:3的玉米基因组部分的至少约15个连续核苷酸的第一引物；和含有与SEQIDNO:5的异源插入DNA部分互补的至少约15个连续核苷酸的第二引物；和(b)含有与SEQIDNO:4的玉米基因组部分互补的至少约15个连续核苷酸的第一引物；和含有SEQIDNO:5的异源插入DNA部分的至少约15个连续核苷酸的第二引物；其中用(l)中的引物对产生的所述扩增子含有SEQIDNO:l或其互补物，而在(2)中的所述扩增子含有SEQIDNO:2或其互补物。39.—种检测生物样品中的玉米事件MON89034的接合序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的试剂盒，所述试剂盒含有(l)为选自SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的序列的核苷酸探针或为与选自SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的序列完全互补的核苷酸探针，和(2)用于核酸扩增反应的引物对，所述引物对选自(a)含有SEQIDNO:3的玉米基因组部分的至少约15个连续核苷酸的第一引物；和含有与SEQIDNO:5的异源插入DNA部分互补的至少约15个连续核香酸的第二引物；和(b)含有与SEQIDNO:4的玉米基因组部分互补的至少约15个连续核苷酸的第一引物；和含有SEQIDNO:5的异源插入DNA部分的至少约15个连续核苷酸的第二引物。40.—种用于在含有玉米DNA的生物样品中检测玉米事件MON89034的接合序列SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的方法，所述方法包括(a)使所述样品与在严格杂交条件下和所述接合序列杂交的探针接触；(b)对所述样品和探针实施严格杂交条件；和(c)检测探针与接合序列的杂交情况；其中检测到探针与生物样品杂交说明所述样品中存在所述接合序列。41.一种含有多核普酸探针的DNA检测试剂盒，所述多核苷酸探针在严格杂交条件下与一种或多种DNA序列杂交，所述DNA序列含有(l)SEQIDNO:3的至少20个连续核苷酸，并含有SEQIDNO:l或其互补物，或(2)SEQIDNO:4的至少20个连续核苷酸，并含有SEQIDNO:2或其互补物。42.—种含有多核普酸引物对的DNA检测试剂盒，用于检测生物样品中诊断玉米事件MON89034的接合序列的存在情况，其中所述多核苷酸引物对的第一引物与对应于SEQIDNO:3中约核苷酸1位至约2050位所示的序列的反向互补序列特异性杂交，所述多核苷酸引物对的第二引物与SEQIDNO:5中约核苷酸2060位至约核苷酸12，208位所示的序列特异性杂交，所述引物对彼此相对延伸，形成含有SEQIDNO:l的扩增子，所述扩增子诊断所述样品中MON89034事件DNA的存在情况。43.权利要求42的DNA检测试剂盒，其中所述引物对选自含有SEQIDNO:3中所示至少约11个至约2000个核苷酸长度的任何连续核苷酸序列的第一引物，和含有SEQIDNO:4中所示至少约11个至约914个核普酸长度的任何连续核苷酸序列的反向互补物的第二引物。44.一种含有多核苷酸引物对的DNA检测试剂盒，用于检测生物样品中诊断玉米事件MON89034的接合序列的存在情况，其中所述多核普酸引物对的第一引物与对应于SEQIDNO:5中约核苦酸l位至约11,370位所示的序列的反向互补序列特异性杂交，所述多核苷酸引物对的第二引物与SEQIDNO:4中所示约核苷酸1位至约核苷酸914位的序列特异性杂交，所述引物对彼此相对延伸，形成含有SEQIDNO:2的扩增子，所述扩增子诊断所述样品中MON89034事件DNA的存在情况。45.—种分离的DNA分子，所述分离的DNA分子为选自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的DNA分子，或与选自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的DNA分子互补。46.—种用作DNA探针的分离的DNA分子，其中所述分离的DNA分子在生物样品中的存在情况诊断生物样品中的玉米事件MON89034DNA，所述分离的DNA分子含有SEQIDNO:1的至少11个连续核苦酸或其互补物。47.—种用作DNA探针的分离的DNA分子，所述分离的DNA分子在生物样品中的存在情况诊断所述生物样品中玉米事件MON89034的存在情况，其中所述分子含有SEQIDNO:2的至少11个连续核苷酸或其互补物。48.—种检测生物样品中玉米事件MON89034多核苷酸的存在情况的方法，所述方法包括(a)使所述样品与DNA引物对接触；(b)进行核酸扩增反应，由此产生扩增子；和(c)检测所述扩增子；其中所述扩增子含有SEQIDNO:l或SEQIDNO:2，所述扩增子的检测诊断所述样品中玉米事件MON89034的存在情况。49.一种稳定转化的玉米植物细胞，所述玉米才直物细胞的DNA在实施权利要求48的方法时，产生含有SEQIDNO:l或SEQIDNO:2的DNA扩增子。50.权利要求48的方法，其中所述DNA引物对含有在SEQIDNO:6和SEQIDNO:7中所示的核苷酸序列。51.—种检测生物样品中玉米事件MON89034DNA的存在情况的方法，所述方法包括(a)使样品与探针接触，所述探针在严格杂交条件下与MON89034DNA杂交，但在所述条件下不与非MON89034DNA的玉米植物基因组DNA杂交，其中所述探针为选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列，或与选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列互补；(b)对所述样品和探针实施严格杂交条件；和(c)检测探针与MON89034DNA的杂交；其中检测到的杂交情况用于诊断所述生物样品中所述玉米事件MON89034的存在情况。52.—种测定生物样品中含有玉米事件MON89034DNA的玉米植物DNA的接合性的方法，包括(a)使样品与包含SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:IO的3种不同引物接触，所述引物(l)在含有玉米事件MON89034DNA的核酸扩增反应中使用时，产生诊断玉米事件MON89034的第一扩增子，和(2)当在含有非MON89034DNA的玉米基因组DNA的核酸扩增反应中使用时，产生诊断非MON89034DNA的玉米基因组DNA的第二扩增子；(b)进行核酸扩增反应；和(c)比较产生的扩增子，其中存在一个或两个扩增子诊断样品的接合性。53.—种杂种玉米植物，其中至少一个亲本为玉米事件MON89034。54.由权利要求53的杂种玉米植物产生或培育的玉米植物产生的花粉、胚珠、种子、根或叶，其中所述花粉、胚珠、种子、根或叶含有诊断转基因玉米事件MON89034的DNA。55.权利要求53的杂种玉米植物MON89034的子代，其中所述子代的细胞在它们的基因组中含有SEQIDNO:1和SEQIDNO:2中所示的序列。56.—种分离的多核苷酸区段，所述多核苷酸区段含有选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的至少约11个至约20个连续核香酸，其中所述区段来源于转基因玉米植物MON89034的细胞。57.—种来源于转基因玉米植物基因组MON89034的分离的多核苷酸区段，所述分离的多核苷酸区段含有为选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列的核苷酸序列，或与选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列互补的核苦酸序列。58.—种检测生物样品中玉米事件MON89034多核苷酸的存在情况的方法，所述方法包括(a)使样品与探针在严格杂交条件下接触，其中所述探针含有为选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列的连续核苷酸序歹寸，或与选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的序列互补的连续核苷酸序列；和(b)检测所述探针与所述样品的杂交；其中所述探针与所述样品的杂交情况用于诊断所述样品中所述玉米事件MON89034多核苷酸的存在情况。59.—种包含含有选自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的序列的多核普酸的组合物，其中所迷组合物为选自玉米粉、玉米面、玉米油、玉米穗丝、玉米淀粉和加工食品的农产品。60.—种含有长约11个至约20个连续核苷酸的多核苷酸探针，用于检测生物样品中玉米事件MON89034DNA的存在情况，其中所述连续核香酸选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2。61.权利要求60所述的多核苷酸探针，其中所述探针含有选自脱氧核糖核酸、核糖核酸和核苦酸类似物的核苷酸。62.权利要求61所述的多核苷酸探针，其中所述探针用至少一种荧光团标记。63.—种含有玉米事件MON89034核苷酸序列的农产品或食品，其中所述序列选自SEQIDNO:l和SEQIDNO:2。64.;f又利要求63的农产品或食品，所述农产品或食品选自玉米油、玉米淀4分、玉米4分、玉米面、化妆品和填充剂。65.检测诊断生物样品中玉米事件MON89034的存在情况的核香酸序列的存在情况，其中所述生物样品选自玉米油、玉米粉、玉米面、玉米面筋、玉米々并和玉米淀4分。66.培育含有诊断插入DNA区段的DNA的玉米细胞，所述插入DNA区段插入到对应于转基因玉米事件MON89034的基因组中，其中所述插入DNA区段含有如SEQIDNO:5所示的核苷酸序列。全文摘要本发明提供转基因玉米事件MON89034，以及含有诊断该玉米事件的DNA的细胞、种子和植物。本发明还提供含有诊断样品中的所述玉米事件的核苷酸序列的组合物，检测样品中的所述玉米事件核苷酸序列的存在情况的方法，用于检测诊断样品中的所述玉米事件的存在情况的核苷酸序列的探针和引物，将这些玉米事件的种子培育成玉米植株的方法，以及繁殖而产生含有诊断该玉米事件的DNA的玉米植株的方法。文档编号C12N15/29GK101495635SQ200780027882公开日2009年7月29日申请日期2007年5月24日优先权日2006年5月26日发明者H·安德森,J·杜格拉斯,J·格罗亚特,J·科尔特,J·赖斯,R·凯利,S·约翰逊申请人:孟山都技术有限公司