专利名称：：一种降胆固醇的发酵酸乳及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及发酵牛奶配制品，是用乳酸菌发酵并配以天然食品提取物为乳酸菌生长促进剂制成。还涉及降胆固醇功能酸乳的
技术领域：
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背景技术：
：随着社会的发展、科技的进步，人们生活水平不断提高，日常膳食营养也日益增加，但随之而来的负面影响是动脉粥样硬化、冠心病等心脑血管疾病的发生率不断攀升。根据世界卫生组织公布的1996年度卫生统计年鉴，全球因心血管疾病死亡1530万人，占总死亡人数的29%，心血管疾病因此而高居世界五大死因之首，而它们共同的病理基础都是动脉硬化。动脉粥样硬化由许多因素促成，其中最重要的危险因素是高脂血症即血胆固醇和血甘油三脂的升高。因而，保持血液中胆固醇浓度在正常范围内，对于预防动脉粥样硬化和心脑血管疾病是至关重要的[1]。美国、我国国内的营养和医学专家推荐食物胆固醇的摄入量标准为250-300mg/d/人。但随着人民生活水平的不断提高和膳食营养的增加，胆固醇的摄入量很容易超标。据上海市心血管病研究所在1997-1999年间对3467名上海居民的调査，由于每日的营养摄取量比20世纪70年代有明显增加，脂肪由24.1%增至31.8%，胆固醇由282mg上升至388mg，而碳水化合物则由65.7%降至53.7°/。，上海人的血脂则明显增高。因此研究不影响食品风味，经济实用的降低食品和人体血清胆固醇的方法，已成为当前改善食品质量、提高人们生活水平重要的研究课题[2]。国外对降胆固醇乳酸菌的研究起步较早。1977年，Gilliland对肠道乳杆菌降胆固醇作用进行了研究，提出乳杆菌在生长过程中通过降解胆盐促进胆固醇的分解代谢，从而降低胆固醇含量的观点[3]。随后Rasic等也证实了嗜酸乳杆菌和两双歧杆菌对胆固醇的脱除作用[4]。迄今为止人体及动物实验也证明了乳酸菌的降胆固醇作用[5]。我国国内关于乳酸菌降胆固醇方面的研究起步较晚，且多数都停留在体外研究的水平，还未见有成功的降胆固醇乳酸菌类产品的报道和问世。参考文献李瑞杰译.降低胆固醇水平预防冠状动脉性心脏病.美国医学会杂志中文版[M].2000，19(6):297-303.[2]张佳程，骆承庠.乳酸菌对食品中胆固醇脱除作用的研究[J]，食品科学.1998(3):20-23[3]MaireB，ColinH，andCormacG.M.BileSaltHydrolaseActivityinProbiotics[J].AppliedandEvironmentalMicrobiology,2006，72(3):1729-1738HeF，0uwehandAC，IsolauriE，etal.Comparisonofmucosaladhesionandspeciesidentificationofbifidobacteriaisolatedfromhealthyandallergicinfants[J].FEMSImmunolMedMicrobiol,2001，30(1):43-47柳翰凌.内蒙古牧区传统乳制品中乳杆菌降胆固醇特性的研究[D].内蒙古农业大学，2006
发明内容本发明的目的在于提供一种具有降胆固醇功效的酸乳生产方法。其中主要包括高效降胆固醇乳酸菌的分离筛选、降胆固醇酸乳发酵的配方、降胆固醇酸乳的发酵工艺条件。1、降胆固醇乳酸菌GL-03的筛选及胆固醇降解诱导本发明所用的菌种为从天然发酵干酪中筛选出的高效降胆固醇的乳酸菌GL-03，经16SrDNA测序鉴定为干酪乳杆菌干酪亚种(L3"o&cj7J"scaseis"fep.mw力。降胆固醇乳酸菌GL-03经底物诱导试验，其胆固醇降解率从诱导前的50%增加到56%，同时其具有较好的耐胃酸、耐胆盐及对小肠上皮细胞粘附性、抑制致病菌等特性，是一种适宜于定植人体肠道的益生菌。分离筛选方法称取适量天然发酵干酪，经无菌水稀释后，无菌操作吸取2ml加入灭菌的脱脂乳中，37°C静置富集培养48h。无菌操作取lml上述富集培养液加入含9ml无菌的改良KENJI选择性培养基(含0.04%溴百里香草酚兰)中，37'C振荡培养1-2天，然后取培养液100化加到同样的培养基里培养，共需三次转管培养。根据培养基的比混浊度和指示剂颜色的变化，取第三次培养后的菌液200A加入到pH2的MRS液体培养基培养6h，取其IOO叱培养液转接到含0.30%猪胆盐MRS液体培养基中培养24h，然后取200A培养液的涂布在改良MRS平板上，37C恒温培养4872h。挑取产酸的典型菌落，反复的划线分离、纯化，革兰氏染色、镜检，至纯菌落为止。然后，经16SrDNA测序进行菌种鉴定。定向诱导将选育的乳酸菌GL-03活化后，定量加到含0.25%胆固醇的KENJI发酵培养基中进行培养，每培养一次胆固醇的浓度都要增加0.15%，五次驯化培养后，使培养基中胆固醇的含量达到lmg/mL。选择生长良好的乳酸菌GL-03，在含胆固醇0.lmg/mL的MRS液体培养基中，测定其在诱导驯化前后的胆固醇降解率的变化，从中筛选出降胆固醇能力提高较大的菌株。2、降胆固醇酸乳的发酵条件及工艺本发明为一种降胆固醇发酵酸乳，在发酵乳中不仅加入高效降胆固醇的乳酸菌GL-03，同时添加了山楂提取物。试验表明山楂提取物为乳酸菌生长促进因子，适量添加可提高酸乳中乳酸菌活菌数量约100倍，山楂提取物同时可与乳酸菌协同作用降低人体胆固醇。(1)菌种活化和发酵剂制作将冰箱保藏的乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌、嗜热链球菌由MRS斜面转接到液体MRS培养基中，37。C培养12h，活化三次；活化的菌种按2%接种到灭菌的含10%(W/V)的脱脂奶粉液体中，37。C培养至凝乳，转接三次制成发酵剂。(2)山楂提取物的制备取山楂50克，先将材料切成碎末或粉末，加38倍的水，浸泡24h，煮沸后用纹火持续3040min;滤出煎液，力卩35倍的水，进行二煎(2030min)滤出煎液，加24倍的水，进行三煎(2030min)，合并滤液浓縮至lOOmL，取上清液，U5。C，灭菌15min,4。C冰箱保存备用。(3)发酵乳原料配方功能性降胆固醇酸奶的原料质量百分配比为鲜奶或还原奶80.085.0奶粉0.02.0蔗糖5.07.0山楂浸提物4.06.0三种混合菌种2.05.0稳定剂CMC-Na0.1其中三种混合菌种为乳酸菌gl-03(L3cz^fecj7勿scaseis〃/^acase力、保力口利亚杆菌(L3C^3"X〃51W卵".CiAS)禾口嗜热链球菌(5Y，t歸c^e27Z7op力77ws)3种菌混合，其比例为1:0.51.0:0.51.0，发酵温度40-45。C。(4)工艺流程原料乳一净乳一标准化一预热(60°C)—均质(1517Mpa)—杀菌一冷却一添加发酵剂一分装一发酵一冷藏(05'C)—检验一发送具体操作步骤1)鲜奶(或还原奶)经奶检、净化、待配。2)将蔗糖、稳定剂用少量乳液(50-6(TC)溶解，加入净化后的奶液中，搅拌均匀，升温至5862。C左右进行均质(压力为15-17Mpa)。3)将均质后的奶液加热至9(TC，5min或超高温瞬时灭菌(135°C，3-5s)，然后降温至43"，接种发酵。4)接种后料液快速分装到销售用容器，并送至40-45"C恒温室发酵4-5h，至pH4.6-4.8。迅速冷却到1(TC以下，并移至0-4。C冷库冷藏后熟。3、降胆固醇酸乳质量标准(1)感官指标色泽色泽均匀一致，呈乳白色或稍带微黄色。滋味气味具有纯乳酸发酵剂制成的酸牛乳特有的滋味和气味，无酒精发酵味、霉味和其它不良气味。组织状态凝块均匀细腻、无气泡、允许少量乳清析出。(2)理化指标乳脂肪>3.00wt%，全乳固体^10wt^，酸度70110°T，砂糖>5.0wt%，荥《0.010/,m。每100g降胆固醇酸乳含有热量60-70Kcal，非脂乳固体》8.lg，蛋白质》3.0g，砂糖^5.0g，乳酸菌活菌数>lX106cfu/g。(3)微生物指标大肠菌群《90个/毫升，致病菌不得检出。4、降胆固醇发酵乳的动物实验对以乳酸菌GL-03为主要发酵菌剂制成的降胆固醇酸乳，进行了体内降低血清胆固醇的动物实验。将30只雄性小白鼠(购自大连医科大学实验动物中心)，在温度2025°C，相对湿度50±5%的环境中自由饮水进食，普通词料饲喂3d后，逐个称重，按各组间平均体重无显着差异重新分为3组，每组10只。A组基础日粮组(正常组)，饲喂基础饲料；B组高脂模型组，饲喂高脂饲料；C灌胃组高脂饲料+降胆固醇酸乳，每2天灌胃1次，在早9时左右进行，A、B组灌服0.9呢生理盐水，C组灌服降胆固醇酸乳，灌胃量lmL/只。饲喂小鼠30天后，禁食12h，眼眶采血，4。C冷藏，测定血脂的TC、TG、HDL-C、LDL-C。采血后，小鼠断颈处死，解剖后分别取肝、肾、脾称重。饲喂30天后，各组小鼠血脂水平如表l所示。B组血清TC和TG含量己显着高于A组(P<0.05)，说明饲喂小鼠高脂饲料30天高脂模型已成功建成。C组的血清TC和TG含量比B组显着降低(P<0.05)，B组和C组的小鼠的LDL-C水平明显下降，各种饲料配方对小鼠HDL-C的含量影响不大；动脉硬化指数(AI)是反映心血管疾病易患程度的一个指标。高脂伺料饲喂的B组小鼠的AI值为0.365，在各组中最高，而灌胃降胆固醇酸乳的小鼠AI值有所下降，AI值为0.211，并与B组相比差异显着(P<0.05);饲喂高脂饲料后B组的小鼠的HDL-C/TC值显着降低，为73.3%，灌胃酸乳的C组小鼠的HDL-C/TC值显着升高，为86.2%，而正常对照组A组小鼠的HDL-C/TC比值始终保持最高，说明该降胆固醇酸乳具有降低血清胆固醇的功能。表l降胆固醇酸乳对小鼠血脂的影响(mmol/L)组别TCTGHDL-CLDL-C动脉硬化指数AIHDL-C/TC(%)A1.93±0.15B2.88±0.20C2.24±0.251.33±0.161.78±0,181.OO土O.151.88±0.202,ll士O.231,85±0.191.50±0.170.21±0.210.22±0.160.027±0.050.365±0.080.211±0.1097.4±0.0673.3±0.0482.6±0.07注AI=TC-HDL-C/HDL-C在饲喂小鼠30天中，各组小鼠毛色光洁，食欲正常，未发生自然死亡。体重及肝、肾、脾与体重百分比如表2和3所示。饲喂高脂词料的B组小鼠的体重明显增加(P<0.05)，C组小鼠体重与A组没有显着性差异(P>0.05)。饲喂高脂饲料的B组小鼠的肝重/体重明显高于基础日粮组的小鼠，而灌胃组(C组)的低于高脂模型组(B组)，说明由于降胆固醇酸乳的作用，使脂肪在小鼠肝脏内的存积量减少。各组间肾重/体重和脾重/体重未见显着差异，表明在对小鼠灌胃降胆固醇酸乳期间未见明显毒副作用。表2降胆固醇酸乳对小鼠体重的影响(G)<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3降胆固醇酸乳对小鼠脏体比的影响<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>综上所述，本发明使用的高效降胆固醇乳酸菌一干酪乳杆菌干酪亚种，分离自天然发酵乳制品，体外培养试验表明其有很强的耐酸、耐胆盐能力，粘附性好，对常见的肠道致病菌有明显的抑制作用，不携带耐药性因子，是一种适宜于人体肠道定植的乳酸菌，同时体外胆固醇降解率可达56%，体内降胆圆醇的动物实验也表明该酸乳可明显降低小鼠血清胆固醇。本发明首次采用高效降胆固醇的干酪乳杆菌干酪亚种为酸奶发酵菌剂，以山楂提取物为乳酸菌生长促进剂，生产高效降胆固醇酸乳。体外实验、体内动物实验均表明，该降胆固醇酸乳具有降低血清胆固醇的功能，效果明显优于现有的文献报道。原料乳中添加山楂提取物后，发酵酸乳乳酸菌活菌数可提高102倍，可明显增强酸乳乳酸菌的益生作用和降胆固醇的功能性。具体实施例方式实施例1全脂酸乳的制备(1)乳酸菌GL-03用如下方法制得无菌操作天然发酵干酪经无菌水稀释后，吸取2ml加入灭菌的脱脂乳中，37°C静置富集培养48h;取1ml富集培养液加入含0.04%溴百里香草酚兰9ml无菌的改良KENJI选择性培养基中，37'C振荡培养1-2天；取培养液IOO叱加到同样的培养基里培养，共需三次转管培养；根据培养基的比混浊度和指示剂颜色的变化，取第三次培养后的菌液200A加入到pH2的MRS液体培养基培养6h，取其100叱培养液转接到含0.30wa猪胆盐MRS液体培养基中培养24h，然后取200叱培养液的涂布在改良MRS平板上，37。C恒温培养4872h;挑取产酸的典型菌落，反复的划线分离、纯化，革兰氏染色、镜检，至纯菌落为止；然后，经16SrDNA测序进行菌种鉴定；定向诱导将选育的乳酸菌GL-03活化后，定量加到含0.25%胆固醇的KENJI发酵培养基中进行培养，每培养一次胆固醇的浓度都要增加0.15wt%，五次驯化培养后，使培养基中胆固醇的含量达到lmg/mL;选择生长良好的乳酸菌GL-03，在含胆固醇0.lmg/mL的MRS液体培养基中，测定其在诱导驯化前后的胆固醇降解率的变化，从中筛选出降胆固醇能力提高较大的菌株而成。(2)菌种活化和发酵剂制作将干酪乳杆菌GL-03、保加利亚杆菌、嗜热链球菌分别由MRS斜面转接到液体MRS培养基中，37。C培养12h，活化三次；活化后的三菌种按1:0.5:0.5接种到灭菌的含10%(W/V)的脱脂奶粉液体中，37。C培养至凝乳，转接三次制成发酵剂。(3)山楂提取物的制备取山楂50克，先将材料切成碎末或粉末，加3倍的水，浸泡4h，煮沸后用纹火持续40min;滤出煎液，滤渣加5倍的水，进行二煎30min，滤出煎液，滤渣加3倍的水，进行三煎20min，合并滤液浓縮至lOOmL，取上清液，115°C,灭菌15min，4"C冰箱保存备用。(4)原料配方与发酵酸乳的制备原料质量百分配比为鲜奶82.0%，奶粉1.9%，蔗糖浓度5.0%，山楂浸提物6.0%，乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌3种菌混合比例为1:0.5:0.5，接种量为5.0%，稳定剂CMC-NaO.1°/。。操作步骤将蔗糖、稳定剂用少量乳液(50-60°C)溶解，加入净化后的奶液中，同时按比例加入山楂浸提物搅拌均匀，升温至6CTC进行均质(压力为15-17Mpa)。均质后的奶液加热至90。C，5min或超高温瞬时灭菌(135°C，3-5s)，然后降温至43°C，将乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌混合菌种接种。接种后料液快速分装到容器中，并送至43'C恒温室发酵4h，至pH4.6-4.8。迅速冷却到10"C以下，并移至0-4'C冷库冷藏后熟。(4)产品规格与理化指标乳脂肪>3.00wt%，全乳固体^10wt0/0，酸度70110°T，砂糖>5.Owt%，汞《0.010/oppm。每lOOg降胆固醇酸乳含有热量65Kcal，蛋白质4.Og，脂质3.lg，砂糖5.lg，乳酸菌活菌数>lX106cfu/g。实施例2部分脱脂酸乳的制备(1)乳酸菌GL-03用实施例1方法制得。(2)菌种活化和发酵剂制作将干酪乳杆菌GL-03、保加利亚杆菌、嗜热链球菌分别由MRS斜面转接到液体MRS培养基中，37。C培养12h，活化三次；活化后的三菌种按1:0.5:0.5接种到灭菌的含10%(W/V)的脱脂奶粉液体中，37。C培养至凝乳，转接三次制成发酵剂。(3)山楂提取物的制备取山楂50克，先将材料切成碎末或粉末，加38倍的水，浸泡24h，煮沸后用纹火持续3040min;滤出煎液，加35倍的水，进行二煎(2030min)滤出煎液，加24倍的水，进行三煎(2030min)，合并滤液浓縮至100mL，取上清液，115°C，灭菌15min，4。C冰箱保存备用。(4)原料配方与发酵酸乳的制备原料质量百分配比为部分脱脂鲜奶85.0%，蔗糖浓度6.0%，山楂浸提物4.9%，乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌3种菌混合比例为1:1:1，接种量为4.0%,稳定剂CMC-NaO.1%，发酵温度43。C。操作步骤将蔗糖、稳定剂用少量乳液(50-60°C)溶解，加入净化后的奶液中，同时按比例加入山楂浸提物搅拌均匀，升温至60。C左右进行均质(压力为15-17Mpa)。均质后的奶液加热至9(TC，5min或超高温瞬时灭菌(135°C，3-5s)，然后降温至43'C，将乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌以1:1:1比例混合，接种量为5wt9L接种后料液快速分装到容器中，并送至43"C恒温室发酵4-5h，至pH4.6-4.8。迅速冷却到l(TC以下，并移至0-4r冷库冷藏后熟。(5)产品规格与理化指标乳脂肪》0.5《3.Owt%，全乳固体》10wt。/。，酸度70110°T，砂糖>5.Owt%，汞《0.01%ppm。每100g降胆固醇酸乳含有蛋白质3.0g，脂质0.53.0g，砂糖5.lg，乳酸菌活菌数>lX106cfu/g。实施例3脱脂酸乳的制备(1)乳酸菌GL-03用实施例1方法制得。(2)菌种活化和发酵剂制作将干酪乳杆菌GL-03、保加利亚杆菌、嗜热链球菌分别由MRS斜面转接到液体MRS培养基中，37。C培养12h，活化三次；活化后的三菌种按1:0.5:0.5接种到灭菌的含10%(W/V)的脱脂奶粉液体中，37。C培养至凝乳，转接三次制成发酵剂。(3)山楂提取物的制备取山楂50克，先将材料切成碎末或粉末，加38倍的水，浸泡24h，煮沸后用纹火持续3040min;滤出煎液，加35倍的水，进行二煎(2030min)滤出煎液，加24倍的水，进行三煎(2030min)，合并滤液浓縮至100mL，取上清液，115°C，灭菌15min，4。C冰箱保存备用。(4)原料配方与发酵酸乳的制备原料质量百分配比为脱脂鲜奶85%，蔗糖浓度6.9%,山楂浸提物6.0%，乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌3种菌混合比例为1:1:1，接种量为2.0%，稳定剂CMC-NaO.10/0。操作步骤将蔗糖、稳定剂用少量乳液(50-6CTC)溶解，加入净化后的奶液中，同时按比例加入山楂浸提物搅拌均匀，升温至60°C左右进行均质(压力为15-17Mpa)。均质后的奶液加热至90。C，5min或超高温瞬时灭菌(135°C，3-5s)，然后降温至43。C，将乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌以1:1:1比例混合，接43。C种量。接种后料液快速分装到容器中，并送至43X:恒温室发酵4-5h，至pH4.6-4.8。迅速冷却到1(TC以下，并移至0-4。C冷库冷藏后熟。(5)理化指标乳脂肪《0.5wt%，全乳固体^10wt。/。，酸度70110°T，砂糖》5.Owt%，汞《0.01%ppm。每100g降胆固醇酸乳含有蛋白质3.0g，脂质0.5g，砂糖5.lg,乳酸菌活菌数》lX106cfu/g。实施例4脱脂酸乳的制备(l滴种活化和发酵剂制作、(2)山楂提取物的制备同以上实施例，(3)发酵乳原料质量百分配比为脱脂还原奶80.0%，脱脂奶粉2.0%，蔗糖6.9%，山楂浸提物6.0%，乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌3种菌混合比例为1:1:1，接种量为5.0%，稳定剂CMC-NaO.1%，发酵温度43'C。发酵操作步骤同实施例3。(4)理化指标同实施例权利要求1.一种降胆固醇的发酵酸乳，其特征在于鲜奶或还原奶用乳酸菌GL一03(Lactobacilluscaseisubsp.casei)、保加利亚杆菌(Lactobacillusbulgaricus)和嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)3种混合菌种和山楂提取物经发酵制得；呈乳白色或微黄色，凝块均匀细腻、无气泡，允许少量乳清析出；其质量指标为乳脂肪≥3.00wt％，全乳固体≥10wt％，酸度70～110°T，砂糖≥5.0wt％，汞≤0.01％ppm，每100g含有热量60—70Kcal，非脂乳固体≥8.1g，蛋白质≥3.0g，砂糖≥5.0g，乳酸菌活菌数≥1×106cfu/g，大肠菌群≤90个/毫升，致病菌不得检出。2.如权利要求1所述降胆固醇的发酵酸乳的制备方法，其特征在于工艺步骤为(一)原料制备(1)菌种活化和发酵剂制作将冰箱保藏的经分离筛选、定向诱导而得乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌由MRS斜面转接到液体MRS培养基中，37。C培养12h，活化三次；活化的菌种按2%接种到灭菌的含10%(W/V)的脱脂奶粉液体中，37'C培养至凝乳，转接三次制成发酵剂；乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌之间的比例为1.0:0.51.0:0.51.0(2)山楂提取物的制备50克粉碎山楂，加38倍的水，浸泡24h，煮沸后用纹火持续3040min;滤出煎液，滤渣继而分别加35倍、24的水，用相同的方法进行2030min的二煎、三煎，合并滤液浓縮至lOOmL，取上清液，115。C灭菌15min，4。C冰箱保存备用；(二)发酵酸乳的制备(3)原料配方原料奶80.085.0奶粉0.02.0蔗糖5.07.0山楂浸提物4.06.0三种混合菌种2.05.0稳定剂CMC-Na0.1其中三种混合菌种为乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌3种菌混合，其比例为1:0.51.0:0.51.0;(4)工艺步骤1)原料奶经奶检、净化、待用；2)将蔗糖、稳定剂用少量乳液于50-6(TC溶解，加入净化后的奶液中，搅拌均匀，升温至5862X:，15-17Mpa进行均质；3)将均质后的奶液加热至8892。C，5min灭菌，然后降温至43匸，接种；4)接种后于4045。C恒温室发酵45h,至pH4.64.8，迅速冷却到10"C以下，并移至0-4"C冷库冷藏后熟。3.如权利要求2所述降胆固醇的发酵酸乳的制备方法，其特征在于工艺步骤(一)原料制备的(l)中所述菌种活化和发酵剂制作的经分离筛选、定向诱导而得乳酸菌GL-03是用如下方法制得无菌操作天然发酵干酪经无菌水稀释后，吸取2ml加入灭菌的脱脂乳中，37°C静置富集培养48h;取lml富集培养液加入含0.04%溴百里香草酚兰9ml无菌的改良KENJI选择性培养基中，37'C振荡培养1-2天；取培养液100叱加到同样的培养基里培养，共需三次转管培养；根据培养基的比混浊度和指示剂颜色的变化，取第三次培养后的菌液200叱加入到pH2的MRS液体培养基培养6h，取其IOO化培养液转接到含0.30%猪胆盐MRS液体培养基中培养24h，然后取200叱培养液的涂布在改良MRS平板上，37T:恒温培养4872h;挑取产酸的典型菌落，反复的划线分离、纯化，革兰氏染色、镜检，至纯菌落为止；然后，经16SrDNA测序进行菌种鉴定；定向诱导:将选育的乳酸菌GL-03活化后，定量加到含0.25%胆固醇的KENJI发酵培养基中进行培养，每培养一次胆固醇的浓度都要增加O.15%，五次驯化培养后，使培养基中胆固醇的含量达到lmg/mL;选择生长良好的乳酸菌GL-03，在含胆固醇0.lmg/mL的MRS液体培养基中，测定其在诱导驯化前后的胆固醇降解率的变化，从中筛选出降胆固醇能力提高较大的菌株而成。4.如权利要求2所述降胆固醇的发酵酸乳的制备方法，其特征在于工艺步骤中所述的原料奶为还原奶。5.如权利要求2所述降胆固醇的发酵酸乳的制备方法，其特征在于所述工艺步骤3)，是将均质后的奶液加热135"C，进行超高温3-5s灭菌，然后降温至43°C，接种。全文摘要一种降胆固醇的发酵酸乳及其制备方法。原料奶用乳酸菌GL-03、保加利亚杆菌和嗜热链球菌3种混合菌种和山楂提取物经发酵制得；其工艺步骤为原料奶须经奶检、净化后备用；蔗糖、稳定剂用少量乳液溶解，加入净化后的奶液中升温至60℃进行均质、灭菌，降温至43℃接种于40～45℃恒温室发酵4～5h，至pH4.6～4.8后迅速冷却到10℃以下，并移至0-4℃冷库冷藏后熟。乳酸菌GL-03体外培养试验表明其有很强的耐酸、耐胆盐能力，粘附性好，对常见的肠道致病菌有明显的抑制作用，不携带耐药性因子，是一种适宜于人体肠道定植的乳酸菌，同时体外胆固醇降解率可达56％。动物试验证明降胆固醇酸乳具有降低血清胆固醇的功能。文档编号A23L1/29GK101361506SQ20081001349公开日2009年2月11日申请日期2008年9月28日优先权日2008年9月28日发明者侯红漫,郭东启申请人:大连工业大学