专利名称：：一种能促进黄瓜生长和防治黄瓜枯萎病的植物内生菌剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis、保藏日期2008年09月04日、保藏单位全称中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、保藏单位简称CGMCC、保藏编号CGMCCNo.2659)，并制成菌剂。
背景技术：
：黄瓜枯萎病(Fusariumoxysporumf.sp.cucumeri皿m)是黄瓜生产中危害最为严重的病害之一，广泛发生于保护地中。每年因黄瓜枯萎病造成的产量损失10%-30%，严重年份高达50%以上。目前防治该病的主要措施是化学防治和嫁接，由于有些生产者长期使用化学农药，盲目打药，任意加大农药使用量，随意增加农药使用次数，更有甚者使用高毒、高残留农药，导致该病抗药性增强，农药残留加重，危害消费者健康。嫁接虽然可以减少发病率，但劳动强度加大，生产成本增高。植物内生细菌(endophyticbacteria)是指能在健康植物组织内栖居而对植物不造成实质性危害，并与植物建立了和谐联合关系的微生物。内生细菌在植物体内具有稳定的生存空间，不易受外界环境条件的影响，可在植物体内独立繁殖和传递。它避开了温度、紫外线、营养贫乏等不利因素的影响，具有相对安全稳定的生存环境、营养来源丰富，因而更利于其发挥生物防治潜能，研究发现部分内生细菌具有促进植物生长或抑制植物病原菌生长达到控制病害的作用。目前内生细菌用于生物防治，已引起国际上广泛关注。国内外已有关于从棉花、马铃薯、水稻、辣椒、菜花、烟草等多种植物体内分离筛选到具有防病作用的内生细菌。枯草芽孢杆菌是很多植物的内生细菌，已有许多种类被广泛应用于植物病害的生物防治中。利用烟草植株内生枯草芽孢杆菌防治烟草青枯病，田间防效43%_78%。从番茄茎分离的内生枯草芽孢杆菌菌株B47对番茄青枯病的防治效果达79.79X。利用花生内生枯草芽孢杆菌防治花生立枯病和枯萎病效果明显。从桔梗中分离的内生枯草芽孢杆菌对桔梗立枯病有一定的抑制作用。
发明内容本发明就是针对上述问题，提供一种用于促进黄瓜生长、防治黄瓜枯萎病的植物内生菌剂。本发明采用如下技术方案蛋白胨O.72.0%、酵母浸膏0.31.0%、NaC10.51.0%，其余为水，配成母液；将母液按装液量为2555%，发酵温度2032°C，接种量210%，pH值59;120200r/min振荡发酵培养24-72小时即可。本发明的有益效果本发明植物内生菌来源于黄瓜植株体内，所以对植物本身及人都是安全的，不会使人和植物产生抗药性，也不会像一部分农药那样有剧毒性，且其生产、加工过程中无毒副作用。本发明的植物内生菌是兼有竞争和拮抗两种功能，可促进黄瓜生长，预防和治疗黄瓜枯萎病有良好的防治效果。在黄瓜枯萎病的防治试验中，本发明的植物内生菌剂防治效果达到了65.7X，与50X多菌灵WP800倍防效68.6%相当。应用前景广阔。分类命名枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)微生物(株):B504保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所菌种保藏中心邮编100101保藏时间2008年9月4日保藏编号CGMCCNo:2659具体实施例方式菌种制备枯草芽孢杆菌B504菌株，由LB培养基活化培养，LB培养基成分酵母浸膏5g、蛋白胨10g、琼脂15g、NaCl10g、蒸馏水lOOOml，pH值7.2，温度2831°C。实施例1:植物内生菌剂促进黄瓜胚根和植株生长试验本发明的植物内生菌剂为蛋白胨1.0%、酵母浸膏0.5%、NaCl0.7%、其余为水，配成母液，将母液按装液量为25%，发酵温度29°C，接种量6%，pH值78;140r/min振荡发酵培养46小时即成。稀释1000倍左右，用于催芽。1.植物内生菌剂促进胚根生长情况用3%次氯酸纳进行种子消毒15min，清水反复冲洗，放在干净的垫有滤纸的培养皿中，每皿放种子50粒左右，每个处理3皿，每个培养皿中加入菌液15ml左右，然后加入种子。将培养皿放入25t:恒温培养箱中。播种前(胚根长约9mm左右)时，切下胚根，随机取IOO粒称重。结果见表l。表1植物内生菌剂促进胚根生长情况<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>2.植物内生菌剂促进植株生长情况将上述试验剩余种子播于装有自然土壤的塑料筐中。30天后测定植株重量，每个处理称重30株，计算平均株高、植株鲜重、植株根系鲜重结果见表2。表2B504菌株促进植株生长情况<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>从表1、表2的试验结果看出，本发明的植物内生菌剂具有促进黄瓜种子胚根和植株生长的作用。实施例2:植物内生菌剂防治黄瓜枯萎病试验本发明的植物内生菌剂为蛋白胨1.0%、酵母浸膏0.5%、NaCl0.7%、其余为水，配成母液，将母液按装液量为25%，发酵温度29°C，接种量6%，pH值78;140r/min振荡发酵培养46小时即成。将制备的植物内生菌剂进行黄瓜枯萎病试验。从表3的试验结果看出，本发明的植物内生菌剂对黄瓜枯萎病有较好的防治效果。其中本发明的植物内生菌剂1000倍防治效果好，达到65.7%，与50X多菌灵WP防效68.6%相当。表3植物内生菌剂防治黄瓜枯萎病效果分析处理浓度调査总数发病率(％)防效(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>权利要求一种能促进黄瓜生长和防治黄瓜枯萎病的植物内生菌剂，其特征在于将蛋白胨0.7～2.0％、酵母浸膏0.3～1.0％、NaCl0.5～1.0％，其余为水，配成母液；将母液按装液量为25～55％，发酵温度20～32℃，接种量2～10％，pH值5～9；120～200r/min振荡发酵培养24-72小时即可。2.根据权利要求1所述的一种能促进黄瓜生长和防治黄瓜枯萎病的植物内生菌剂，其特征在于将蛋白胨1.0%、酵母浸膏0.5%、NaCl0.7%，其余为水，配成母液；将母液按装液量为25%，发酵温度29t:，接种量6%，pH值78，140r/min振荡发酵培养46小时即成。全文摘要一种能促进黄瓜生长和防治黄瓜枯萎病的植物内生菌剂是涉及一种枯草芽孢杆菌，并制成菌剂。本发明提供一种用于促进黄瓜生长、防治黄瓜枯萎病的菌剂。本发明采用如下技术方案蛋白胨0.7～2.0％、酵母浸膏0.3～1.0％、NaCl0.5～1.0％，其余为水，配成母液；将母液按装液量为25～55％，发酵温度20～32℃，接种量2～10％，pH值5～9；120～200r/min振荡发酵培养24-72小时即可。文档编号C12N1/20GK101766189SQ200810230338公开日2010年7月7日申请日期2008年12月29日优先权日2008年12月29日发明者刘长远,吕国忠,孙柏欣,梁春浩,王辉,苗则彦,赵奎华,陈彦,黄玉茜申请人:辽宁省农业科学院植物保护研究所