包含酶混合物的动物用耐热组合物的制作方法

专利名称：：包含酶混合物的动物用耐热组合物的制作方法包含酶混合物的动物用耐热组合物本发明涉及包含酶混合物的粉末形式的组合物。酶在各种工业应用中特别是在动物的营养物中已经被使用很长时间。在这种情况下，酶改善了植物源的消化性并因此使得饲养动物更有效地消化它们的食物。酶由很多种生物产生植物、动物以及特别是微生物，也就是说，特别是选自细菌、酵母和真菌的任何单细胞生物或多细胞生物。专利申请EP1007743具体描述了从绳状青霉菌(Penicilliumfuniculosum)获得的、以液体形式或以粉末形式配制并且目的是饲养动物的酶的混合物。酶通过喷射以液体形式添加至饲料，或者它们在混合器中被掺入饲料中然后使饲料在制粒机中成粒。很大一部分动物饲料基于卫生(微生物质量)原因或基于易为动物消耗(以碎屑或颗粒形式呈现)的原因而经历热处理。这些热处理基于在或多或少的高温下任选结合附聚作用(制粒机)来应用蒸汽。然而，已经证明是这样的情况，即酶是蛋白质，其天生对温度敏感。当应用高温时观察到酶活性的损失。本发明的目的是提供包含耐热的酶混合物的粉末形式的组合物。发明描述本发明涉及粒状粉末形式的动物用耐热组合物，其包含a)至少两种酶的液体形式的混合物，b)载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，禾口c)包衣剂，其选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物。根据一个实施方式，至少两种酶的液体形式的混合物从仅仅一种微生物的发酵获得。根据另一实施方式，至少两种酶的液体形式的混合物从两种不同微生物的发酵获得。有利地，至少两种酶的液体形式的混合物是从至少一种微生物获得的过滤和浓縮发酵果汁。根据另一实施方式，所述组合物包含a)15%至50%(按重量计)所述至少两种酶的混合物，13)25%至60%(按重量计)所述载体，c)25%至60%(按重量计)所述包衣剂。根据一个实施方式，所述至少两种酶选自木聚糖酶、!3-葡聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、植酸酶和蛋白酶。有利地，所述至少两种酶选自植酸酶、内_1，4-|3-木聚糖酶、a-阿拉伯呋喃糖酶、P-木糖苷酶、阿魏酸酯酶、内_1，5-0-阿拉伯糖酶(arabinanase)、内-1，3(4)-13-葡聚糖酶、昆布多糖酶、内-1，4-13-葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、13-糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶、果胶酯酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(rhamnogalacturonase)、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、内_1，4-|3-甘露聚糖酶、P-甘露糖苷酶和a-半乳糖苷酶。根据本发明的一个实施方式，所述微生物是绳状青霉菌，其于1998年3月24日以编号IMI378536保藏于IMI(国际真菌研究所(InternationalMycologicalInstitute),BakehamLane，EnglefieldGreen，Egham，Surrey,TW209TY，UK)。根据本发明的一个实施方式，包衣剂是羧甲基纤维素或乙基纤维素。根据本发明的一个实施方式，组合物能够通过包括下述步骤的方法获得a)共干燥下述化合物-载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，禾口-至少两种酶的液体形式的混合物，从而获得中间基料，b)通过用包衣剂浸渍该中间基料而成粒，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，c)用包衣剂包覆所述浸渍的中间基料，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，禾口d)干燥。本发明也涉及粉末形式的动物用营养添加剂，其包含a)至少两种酶的液体形式的混合物，b)载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，禾口c)包衣剂，其选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物。本发明也涉及动物饲料，其特征在于该动物饲料包含动物用营养基料和如权利要求10所述的营养添加剂。最后，本发明涉及包衣剂在制备动物用营养添加剂中的用途，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，所述动物用营养添加剂包含从仅仅一种微生物的发酵获得的至少两种酶的混合物。有利地，所述包衣剂是羧甲基纤维素。组合物本发明因此涉及粒状粉末形式的动物用耐热组合物。"耐热组合物"被理解为指对热有抵抗力的组合物。根据本发明的组合物的重要特性之一是耐热性。这是因为根据本发明的组合物将经历预期的热处理，以便一方面产生微生物品质，而另一方面配制能够更容易为饲养者所使用以及为动物所消耗的组合物。使用了术语"制粒过程(pelletizationprocess)"。制粒是小颗粒形式的饲料附聚作用。这些颗粒不易碎，不像附聚物似的。在制粒之后，获得小球。小球是具有直径为1.5至6mm以及长度为1.5至4cm的尺寸的颗粒。对于制粒而言，利用的是例如制粒机，其操作基于在或多或少的高温下使用蒸汽。例如所述组合物经得起8(TC、85t:或90°C以上的温度。"粒状粉末(Granularpowder)"被理解为指表现出一定粒度的粉末。根据本发明，获得的组合物的粒度要求如下颗粒的大小在混合物中的百分比800um以上<或=至1%400um与160um之间>或=至40%，优选<或=至50%4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>有利地，产物颗粒的中数直径在150与400iim之间。"中数直径"被理解为指50%样品具有较小尺寸以及50%样品具有较大尺寸时产物颗粒的尺寸。本发明的组合物意图用于动物。换句话说，根据本发明的组合物适合用于动物营养物中。"动物"更具体而言被理解为指饲养动物，并且特别指食草动物(特别是为了肉、奶、奶酪和皮革而饲养的牛；为了肉、羊毛或奶酪而饲养的绵羊；山羊；或猪)、家兔、家禽(小鸡、母鸡、火鸡、鸭、鹅和其它家禽)、水生动物(例如鱼、虾、牡蛎和贝壳类)或闲暇陪伴动物(leisureandcompanionanimals)(特别是马、狗或猫)。牛或牛亚科构成牛科——多胃反刍哺乳动物的亚科，多胃反刍哺乳动物包括几种重要的饲养动物种类(奶用品种、肉用品种和混合品种)。"适合用于动物营养物中的组合物"被理解为指具有使其适于动物营养的特征的组合物。用于动物营养必要的特征特别是PH和温度，在该pH和温度下包含酶混合物的组合物是活性的。这是因为动物消化系统的pH是酸性的，因此对于酶而言在该pH下保持活性是必要的以便保留它们的活性。根据本发明的一个实施方式，所述组合物在酸性pH下例如在pH小于7、优选pH小于5保留期望的酶活性。本发明因此涉及粒状粉末形式的动物用耐热组合物，其包含a)至少两种酶的液体形式的混合物，b)载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，禾口c)包衣剂，其选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物。酶由很多种生物产生植物、动物以及特别是微生物。"微生物"被理解为指特别是选自细菌、酵母和真菌的任何单细胞生物或多细胞生物。有利地，酵母选自例如巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisae)、耳卩氏酵母(Yarrowialipolytica)禾口西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)。真菌例如选自曲霉(Aspergillus)种、木霉属(Trichoderma)种和青霉菌(Penicillium)种，优选选自绳状青霉菌、里氏木酶(Trichodermareesei)、黑曲霉(Aspergillusniger)、泡盛曲霉(Aspergillusawamori)、白曲霉(Aspergilluskawachii)禾口康宁木酶(Trichodermakoningii)。根据一个实施方式，至少两种酶的液体形式的混合物从仅仅一种微生物的发酵获得。有利地，至少两种酶的液体形式的混合物是从仅仅一种微生物获得的过滤和浓縮发酵果汁。根据本发明的另一实施方式，所使用的微生物源自分离状态的微生物的遗传未修饰菌株，其产生至少两种酶活性。可选地，其可以是用多核苷酸、表达盒和/或载体转化的宿主生物。在本发明的一个实施方式中，微生物是酶在其中被表达或过表达的绳状青霉菌菌株。在另一实施方式中，宿主生物是酶在其中被表达或过表达的卡氏德巴利酵母(Debaryomycescastellii)菌株。在又一实施方式中，宿主生物是酶在其中被表达或过表达的活泼瘤胃5求菌(Ruminococcusgnavus)菌株。根据本发明的一个实施方式，所述微生物是在1998年3月24日以编号MI378536保藏于皿(国际真菌研究所，BakehamLane，EnglefieldGreen，Egham，Surrey,TW209TY，UK)的绳状青霉菌。根据另一实施方式，所述组合物包含15%至50%(按重量计)的所述至少两种酶的混合物，优选20%至40%(按重量计)。根据本发明的另一实施方式，粒状粉末形式的动物用耐热组合物包含至少三种酶、四种酶、八种酶或十种酶的液体形式的混合物。根据一个实施方式，所述至少两种酶选自木聚糖酶、!3-葡聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、植酸酶和蛋白酶。有利地，所述至少两种酶选自植酸酶、内_1，4-|3-木聚糖酶、a-阿拉伯呋喃糖酶、P-木糖苷酶、阿魏酸酯酶、内_1，5-0-阿拉伯糖酶(arabinanase)、内-1，3(4)-13-葡聚糖酶、昆布多糖酶、内-1，4-13-葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、13-糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶、果胶酯酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(rhamnogalacturonase)、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、内_1，4-|3-甘露聚糖酶、P-甘露糖苷酶和a-半乳糖苷酶。本发明也包含载体。所述载体选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴。所述载体以粒状粉末形式的耐热组合物重量的25%与60%之间的含量存在于该组合物中。最后，本组合物包含包衣剂。该包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物。植物胶是植物渗出物，其通过干燥而凝固。当表示能够用于本发明中的胶时，可以提到下述胶阿拉伯胶、剌梧桐树胶、黄蓍胶、瓜尔胶或黄原胶。"淀粉和衍生物"被理解为指由两种聚合物——直链淀粉和支链淀粉的组合形成的任意多糖。根据本发明，淀粉可以以粉末形式或以糊状物形式存在。举例来说，其可以是天然小麦淀粉、天然玉米淀粉、天然米淀粉或马铃薯粉。也可以包括物理处理例如预胶化的相同淀粉。根据本发明的一个实施方式，包衣剂是羧甲基纤维素或乙基纤维素。包衣剂以25与60%之间、优选30与58%之间(按重量计)的含量存在于粒状粉末形式的耐热组合物中。根据本发明的另一主题，所述组合物能够通过包括下述阶段的过程获得a)共干燥下述化合物-载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，禾口-至少两种酶的液体形式的混合物，从而获得中间基料，b)通过用包衣剂浸渍该中间基料而成粒，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，c)用包衣剂包覆所述浸渍的中间基料，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，禾口d)干燥。包衣剂——其是相同或不同的，在该过程在两个连续阶段期间使用。这产生显示新外观的粉末，其中包衣剂被发现于粒状粉末的内部和外部。这赋予粉末有利的性质。粉末形式的组合物显示出优良的流动性。使得能够评价粉末流动性的测量方案的实例是测定静止角。该方法基测定降落物质的圆锥体底部的角度，该降落物质是通过使样品经过放置在完全平坦水平板上方的常规高度下的专用漏斗得到的。该方法需要下述装备实验室玻璃器皿和仪器、不锈钢漏斗、直径(d)小于6mm的底部(漏斗附着至支撑物)、刻有四条直线的不锈钢板——该四条直线彼此之间形成45°的角并且垂直于漏斗的中心，以及附着至板、由不锈钢制成的支撑物。该方法包括调节板与漏斗底部之间的高度(H)为40mm、证实漏斗中心与所刻直线交叉点的垂直度、将粉末倒入漏斗中、当圆锥体的顶接触漏斗底部时停止进料、在所形成的硅石圆锥体底部在每一条所刻直线上画标记、移走硅石并且对于每一条线测量同一线上隔开两个标记的距离。以角度表达的降落材料的静止角由下式给出2//之间。间。效成分:何物质'爿r像-其中H:圆锥体的高度，以mm计(H=40)d:漏斗底部的内径，以mm计(d=6mm)D:4个测量的算术平均值以mm计a:静止角，以角度计根据本发明，粉末形式的组合物显示20。与50°之间的静止角，优选20。与45°使得能够评价粉末流动性的另一测量方案实例是根据下式测量压縮率压缩率-％^辰实密度-堆密度)振实密度根据本发明，粉末形式的组合物显示0与40%之间的压縮指数，优选0与20%之本发明的粉末形式的组合物另外可以包含除酶混合物之外的有效成分或几种有"有效成分(Activeprinciple)"被理解为指在动物中具有确定的生理活性的任食品补充剂尤其在根据本发明的有效成分的种类内。动物用食品补充剂是在补充每日饮食中意图被摄取的产品，以便克服某些化合物不足的每日供应。例如，通常是已知的是用有效成分补充饲养动物的食物摄取从而增强所饲养动物的畜牧业性能。特别地，它们可以是维生素、矿物盐、氨基酸、微量元素、激素或抗生素。来立體絲划鄉A麵燃诚上述组合物的制备过程包括下述阶段a)共干燥下述化合物-至少一种载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，禾口-从仅仅一种微生物的发酵获得至少两种酶的液体形式的至少一种混合物，作为回报获得中间基料，b)通过用包衣剂浸渍该中间基料而成粒，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，c)用包衣剂包覆所述浸渍的中间基料，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，禾口d)干燥。该过程的第一阶段因此包括共干燥以液体形式存在的酶混合物以及根据本发明的载体。该阶段可以在干燥塔上通过雾化连续进行。共干燥在不分解的温度下进行。粉末应当保持在45t:以下的温度下。该阶段导致很大部分的液体形式的酶混合物被保留在载体上。得到50iim与250iim之间大小的微粒化粉末。粉末的含水量小于20%。该过程的第二阶段包括通过用包衣剂浸渍中间基料而成粒，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物。其是一种湿法制粒类型，其包括在装备有液体添加系统的混合器——也称为制粒机中，进行颗粒稠化并结合成粒以使颗粒内聚。该阶段可以连续或分批进行。该过程的第三阶段包括沉积令人满意的包衣剂膜，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物。该包衣剂可以与成粒阶段期间使用的包衣剂相同或者其可以是不同的。该阶段可以在例如流化床干燥器上连续或分批进行。包衣剂的量取决于产物所期望的最终粒度。第四阶段包括干燥终产物。这种干燥可以在流化床上连续进行或分批进行，使得该产物的含水量小于10%，优选小于8%。在第二阶段与第三阶段之间增加中间阶段是可能的。该阶段包括连续或分批地干燥粒状粉末。在第二阶段与第三阶段之间或者在干燥粒状粉末的任选阶段之后增加筛分阶段也是可能的。制粒过程根据本发明，制粒过程包括下述阶段a)—方面粒状粉末形式的耐热组合物以及另一方面营养基料被送入进料器，b)将混合物加热至60°C与IO(TC之间的温度，优选70°C与90°C之间的温度，c)使所述组合物在成粒机中成粒，禾口d)将得到的小球切割成期望的长度，e)干燥并冷却在阶段d)获得的小球。动物用营养添加剂本发明也涉及粉末形式的营养添加剂，其包含a)至少两种酶的液体形式的混合物，b)载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，禾口c)包衣剂，其选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物。动物饲料本发明也涉及动物饲料，其特征在于该动物饲料包含动物用营养基料和如上所定义的营养添加剂。所述营养基料包含例如小麦、豆饼、挤压大豆种、棕榈油、碳酸钙、磷酸二钙、盐或含甲硫丁氨酸的预混物的混合物。腿本发明的主题也涉及羧甲基纤维素用于制备动物用营养添加剂的用途，所述营养添加剂包含从仅仅一种微生物发酵获得的至少两种酶的混合物。本发明的另一主题是羧甲基纤维素用于制备动物用营养添加剂的用途，所述营养添加剂意图改进动物的生长性能，例如改进饲料转化。附图简述图1表示现有技术的粉末和根据本发明的粉末的各自粒度；在横坐标上，以Pm计的直径；在纵坐标上，为产物的百分比。实施例1根据本发明的方法制备本发明的组合物。其以粉末形式提供并且包含55%羧甲基纤维素、25%粗麦粉和20%从绳状青霉菌IMI378536发酵得到的浓縮过滤发酵果汁，该发酵果汁包含19种酶活性。1.共干燥在165巴下喷射475kg/h的28.7%DM(干物质)酶溶液并且使其在低温下以113kg/h的速度在粗粉上连续共干燥。在恰当例子的粗粉中(inthecaseinpointmeal)，干提取物中的分布因此如下55%纯酶和45%载体。-146。C:入口气温-49。C:出口气温-40°C:固定床的气温-35°C:振动流化床装置的气温(第一部分)_27°C:振动流化床装置的气温(第二部分)在该阶段获得的微粒化粉末显示出不存在63i！m以下细粒的粉末特征，这使得产品能够以第二相进行处理。以D(v，O.5)计的平均粒度是117微米，并且含水量是7.5%。在该第一阶段结束时得到的产品被称为中间基料。2.通过浸渍成粒其以下述方式在混合器中进行-预混合成分也就是说0.77kgCMC干物质/kg中间基料干物质30秒，-在0.18kg水/kg中间基料干物质的速度下添加水120秒，伴随搅拌，-最后混合120秒。该阶段的目的是获得平均150iim至200Pm等级的颗粒，其中含水量为14%，同时使产物保持在45°C以下，以便不破坏酶活性。3.在流化床上进行中间干燥在55t:的入口温度和25t:的出口温度下在流化床干燥器上干燥产物，以便不破坏酶活性。然后在包衣之前中间基料具有7%或8%的含水量。4.包衣在喷射之前被再加热至在6(TC与7(TC之间变化的温度的7%与7.5%之间的CMC低粘度溶液被喷射。所沉积的溶液的量是0.25kgCMC干物质/kg待被包衣的产物的干物质。在该阶段获得的粉末具有300iim至400ym的平均粒度和10%至11%的含水量。然后在流化床上连续或分批干燥终产物；在这种情况中的目的是使产物回到小于10%且优选小于8%的含水量。得到的终产物具有7.6%的含水量和450g/l的密度。5.粒度测量分别测量下述组合物的粒度第一组合物是产品RovabioTM艾克赛勒AP(RovabioTMExcelAP)，其以粉末形式提供。第二组合物根据上述方法制备。其因此是根据本发明的组合物，该组合物包含55%羧甲基纤维素、25%粗麦粉和20%从绳状青霉菌MI378536发酵获得的浓縮过滤发酵果汁。组合物的粒度列在下述表中<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>颗粒的尺寸在产品RovabioExcelAP中的％第二组合物产物中的%<200um以及>16015.1%6.4%<160um以及>lOOum40.6%4.3%<lOOum26.5%0.4%中数直径135350分散指数0.50.4发现第二组合物的粒度显示包含一定量小颗粒的优势，该量低于产品RovabioExcelAP(现有技术的粒状粉末形式的组合物)的量。这种低量的小颗粒防止产物损失、产物系统与产物本身之间交叉污染、过滤和通风系统使用以及对健康的不良影响之类的问题。见图l。6.其它测量产品RovabioExcelAP的压縮率是22.1%，而第二组合物的压縮率是3眉。实施例2该目的是测试在成粒中添加至"生长"家禽饲料基料的四种酶制备物。在调温器出口处3个处理温度(8(TC、85t:和90°C)应用于每种酶制备物。材料和方法1.饲料和酶200kg生长家禽粗粉饲料被用于进行这些实验。测试四种粉末形式的组合物。相应于或不相应于根据本发明的组合物的标准的每种组合物被称为试验项。第一组合物是产品RovabioExcelAP，其以粉末形式提供并包含19种酶活性。该产品由20%粗麦粉和80%从绳状青霉菌IMI378536获得的浓縮过滤发酵果汁组成，所述发酵果汁包含19种酶活性。第二组合物根据在实施例1中描述的方法制备。其以粉末形式提供，具有上述粒度，并包含55%羧甲基纤维素、25%粗麦粉和20%从绳状青霉菌IMI378536获得的浓縮过滤发酵果汁，所述发酵果汁包含19种酶活性。第三组合物根据在实施例1中描述的方法制备。11其以粉末形式提供，具有上述粒度，并包含35%羧甲基纤维素、45%粗麦粉和20%从绳状青霉菌IMI378536获得的浓縮过滤发酵果汁，所述发酵果汁包含19种酶活性。第四组合物根据在实施例1中描述的方法制备。其以粉末形式提供，具有上述粒度，并包含35%羧甲基纤维素、45%粗麦粉和20%从绳状青霉菌IMI378536获得的浓縮过滤发酵果汁，所述发酵果汁包含19种酶活性。2.混合物利用桨式混合器制备60kg生长家禽饲料的两种混合物，其中水平轴以60rev/min旋转。每次混合的持续期间是2分钟。每次混合的批量被倒空进入矩形槽中，之后封起来(baggedup)。通过集合20个在矩形槽中以四分法获得的样品，取出代表每种混合物的大约lkg样品。见下面表中的混合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>3.成粒在具有平模的实验室制粒机(3kW的Kahl14-175制粒机)上进行成粒试验。对于生长适于烤焙小鸡的粗粉饲料(growthbroilermealfeed)，选择进行试验的制粒机模将具有直径为4mm且厚度为24mm的通道(压縮比6)。4.干燥-冷却对于每一成粒试验，使用实验室干燥器_冷却器来干燥和冷却在模出口收集的热颗粒样品。对于每个冷却器大约3.5kg的热颗粒进料，干燥_冷却时间是至少5分钟。取出代表每次制造操作的大约500g样品。5.目的是监控成粒的测量和取样在制粒机的稳定操作期间进行测量和取样(恒定的生产量、所耗用的稳定电力和稳定的温度)。从每次试验的稳定阶段期间取出的样品开始进行含水量和模停留时间测量。在试验期间记录并标明实施碾磨制粒的特征和参数。6.分析方法6.1通过DNS方法的P_葡聚糖酶该测定基于大麦P-葡聚糖——一种P-l，3(4)-葡聚糖的酶解作用。反应产物通过比色法测定，还原基团的增加利用3，5-二硝基水杨酸(DNS)测量。酶解作用之后可用的还原糖的浓度利用标准葡萄糖曲线测定，葡萄糖的吸光度在540nm测量。计算的酶活性随后以葡萄糖当量表达。将含有lml在0.1M、pH5.0的乙酸钠缓冲液中的1%(w/V)等级的P-葡聚糖溶液和lml在适当稀释下的酶溶液的溶液在5(TC温育10分钟。通过添加2mlDNS溶液(在蒸馏水中的1%(w/V)3，5-二硝基水杨酸、1.6X(w/V)NaOH和30%(w/V)右旋酒石酸钠钾)停止酶反应。均化溶液，然后在最低95t:置于回流水浴中，并且随后在浴中冷却至环境温度(5分钟之内)。向该溶液中添加10ml超纯水，并在具有lcm光程长度的玻璃比色槽中于540nm测定吸光度。该吸光度用针对参比溶液获得的吸光度校正，DNS在酶溶液之前加入该参比溶液中。通过与一系列从O.00%(w/V)至O.04%(w/V)葡萄糖的标准溶液——如在测定的情况中用DNS处理——进行比较，将结果转化为毫摩尔的还原糖。内-l，3(4)-P-葡聚糖酶活性单位被定义为在测定条件(pH5.0和5(TC)下每分钟和每克产物产生1Pmol葡萄糖当量的酶的量。6.2通过DNS方法的木聚糖酶该测定基于白桦木聚糖——一种包含13-D-l，4-桥的木糖聚合物的酶解作用。反应产物通过比色法测定，还原基团的增加利用3，5-二硝基水杨酸测量。酶解作用之后可用的还原糖的浓度利用标准木糖曲线测定，木糖的吸光度在540nm测量。计算的酶活性随后以木糖当量表达。将含有lml在O.1M、pH5.0的乙酸钠缓冲液中的1%(w/V)白桦木聚糖溶液和lml在适当稀释下的酶溶液的溶液在5(TC温育10分钟。通过添加2mlDNS溶液(在蒸馏水中的1%(w/V)3，5-二硝基水杨酸、1.6X(w/V)NaOH和30X(w/V)右旋酒石酸钠钾)停止酶反应。均化溶液，然后在最低95t:置于回流水浴中，并且随后在浴中冷却至环境温度(5分钟之内)。向该溶液中添加10ml超纯水，并在具有lcm光程长度的玻璃比色槽中于540nm测定吸光度。该吸光度用针对参比溶液获得的吸光度校正，DNS在酶溶液之前加入该参比溶液中。通过与一系列从O.00%(w/V)至O.04%(w/V)葡萄糖的标准溶液——如在测定的情况中用DNS处理——进行比较，将结果转化为毫摩尔的还原糖。内-1，4-|3-木聚糖酶活性单位被定义为在测定条件(pH5.0和50°C)下每分钟和每克产物产生1Pmol木糖当量的酶的量。6.3通过粘度测定法的木聚糖酶该方法专用于测定饲料中的内-1，4-|3-木聚糖酶活性。内-l，4-P-木聚糖酶水解木聚糖的木糖苷桥。该测定基于小麦阿拉伯糖——一种用阿拉伯糖取代的P-l，4-木聚糖多糖——溶液的木糖桥的酶解作用。在待被定量测定的酶存在下，酶活性与小麦阿拉伯木聚糖溶液的粘度降低成比例。内_1，4-|3-木聚糖酶活性单位被定义为在分析条件pH5.5和3(TC下水解底物——这降低溶液的粘度，以产生每分钟1无因次单位相对流度变化的酶的量。试验结果1.调节的设定点调节制粒机的设定点如下生产量大约41kg/h在调温器出口的处理温度80。C、85。C和90°C在模出口经历的温度蒸汽压1.6巴刀切割高度的调整10mm2.酶活性的平衡(余量)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表酶活性(单位/g)发现各种配方使得保持初始酶浓縮物的主要参考酶活性是可能的。3.在不同温度下经过制粒机之后在饲料上通过粘度测定法测量的木聚糖酶活性恢复程度<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>发现标准产品(A)的木聚糖酶活性受到成粒条件的温度升高的影响(在9(TC损失多达46%)。所测试的各种配方使得能够将活性损失限制在小于20%。实施例3RovabioExcelAP和根据本发明的组合物对用于12天与22天之间的小鸡的小麦基词料的AMEN(氣校正表观代i射會g，nitrogen—corrected即parentmetabolizableenergy)值的营养作用的研究。材料和方法1.实验方案所用的动物是RossPM3品系的雄性小鸡。7种饮食，其中每笼1只小鸡，12个重复，即总计84笼。试验是随机对照试验。试验项包括能够潜在改善以小麦和玉米为基础的饲料在小鸡中的消化性的酶活性。饮<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表在研究期间使用的饲料[O230]3.试验进展下面呈现了主要操作的时序<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表在试验饲料上测量的木聚糖酶酶恢复的分析除饮食2之外，木聚糖酶粘度测定酶活性值大于饲料的饲料建议值1100U/kgc2.能量消化率<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表每种产品的能量消化结果总体来说，第二种分析显示，根据本发明的T-Flex项改善了所测试饲料的能量消化率。另一方面，在ExcelAP项获得的改善不是显著的，尽管存在强的趋势(p=0.06)。3.生长性能<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表从D12至D22的生长结果*:饲料转化与关于能量消化率所观察到的相反，所测试的项事实上在总研究期间(12天至22天)内都对生长性能具有显著的影响(饲料转化)。根据本发明的组合物(Invl、Inv2和Inv3)和RovabioTMExcelAP组合物(API、AP2和AP3)事实上贡献了相同的转化改进。[O253]5.结论在小麦基饲料上测试的所有项对所测试饲料的AME具有影响。得到的改进是适度的。总体来说，根据本发明的产品显著改进饲料的AME。对于所有产品而言，在总期间(D12-D22)内，生长性能并且特别是关于饲料转化的性能得到极大且显著地改进。权利要求一种耐热组合物，其能够通过包括下述步骤的方法获得a)共干燥下述化合物-载体，其选自粗麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴，和-至少两种酶的液体形式的混合物，从而获得中间基料，b)通过用包衣剂浸渍所述中间基料而成粒，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，c)用包衣剂包覆所述浸渍的中间基料，所述包衣剂选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、通过发酵获得的胶以及淀粉和衍生物，和d)干燥。2.如权利要求1所述的耐热组合物，其中所述至少两种酶的液体形式的混合物得自仅仅一种微生物的发酵。3.如权利要求1所述的耐热组合物，其中所述至少两种酶的液体形式的混合物得自两种不同微生物的发酵。4.如权利要求l所述的耐热组合物，其包括a)按重量计15%至50%的所述至少两种酶的混合物，b)按重量计25%至60%的所述载体，c)按重量计25%至60%的所述包衣剂。5.如权利要求1所述的耐热组合物，根据其所述包衣剂是羧甲基纤维素。6.如权利要求1或2所述的耐热组合物，其中所述至少两种酶的液体形式的混合物是得自至少一种微生物发酵的浓縮过滤发酵果汁。7.如前述权利要求任一项所述的组合物，其中所述至少两种酶选自木聚糖酶、P-葡聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、植酸酶和蛋白酶。8.如前述权利要求任一项所述的组合物，其中所述至少两种酶选自植酸酶、内-1，4-l3-木聚糖酶、a-阿拉伯呋喃糖酶、l3-木糖苷酶、阿魏酸酯酶、内-l，5-a-阿拉伯糖酶、内-1，3(4)-13-葡聚糖酶、昆布多糖酶、内-1，4-13-葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、13_糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶、果胶酯酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、内_1，4-|3-甘露聚糖酶、P-甘露糖苷酶和a-半乳糖苷酶。9.如前述权利要求任一项所述的组合物，其中所述微生物是于1998年3月24日以编号IMI378536保藏于MI(国际真菌研究所，BakehamLane，EnglefieldGreen，Egham，Surrey,TW209TY，UK)的绳状青霉菌。10.如前述权利要求任一项所述的组合物，其中所述包衣剂是羧甲基纤维素或乙基纤维素。11.动物饲料，其特征在于所述动物饲料包含动物用营养基料和如前述权利要求之一所述的组合物。12.如前述权利要求任一项所述的组合物在制备粒状粉末形式的动物用营养添加剂中的用途。13.如前述权利要求任一项所述的组合物在制备动物饲料中的用途，其特征在于所述饲料包含动物用营养基料和营养添加剂。全文摘要本发明涉及粒状粉末形式的用于动物的耐热组合物，其包含a)至少两种酶的液体混合物；b)介质，其选自小麦粉、淀粉、石膏、麦芽糖糊精和玉米穗轴；和c)包衣剂，其选自纤维素及其衍生物、壳多糖、角叉菜聚糖、藻酸钠、植物胶、利用发酵方法获得的胶以及淀粉和衍生物。文档编号C12N9/98GK101742922SQ200880024859公开日2010年6月16日申请日期2008年6月20日优先权日2007年7月20日发明者尼古拉斯·贝斯,弗朗西斯·皮埃尔,皮埃尔·达利巴尔申请人:安迪苏法国联合股份有限公司