专利名称：水解大豆蛋白产生外啡肽的方法
技术领域：
本发明涉及水解蛋白产生特定肽类的方法。
背景技术：
近年来对食物来源的生物活性肽研究发展很快，由于大豆资源丰富，是一种比 较廉价、易得的蛋白原料，因此对大豆肽的研究、开发和生产更是异常活跃。随着大豆 深加工产品开发的不断深入，大豆肽作为一种新的大豆制品受到了广泛关注，以大豆多 肽为原料的功能食品也不断被开发出来，成为食品研究领域的一个热点。但从总体来 看，对于大豆肽研究开发多偏重于其功能特性及应用方面的研究，而对大豆肽的食品安 全问题却研究较少，几乎空白。 外啡肽具有较为广泛的源，甚至是肉类和波菜的蛋白片段当中也存在具有阿片
配体活性的肽类。外啡肽隐藏在如乳蛋白、小麦谷蛋白、大米白蛋白、玉米蛋白、大麦
醇溶蛋白、a-大豆蛋白、牛血清蛋白和血红蛋白等食物蛋白分子序列的片段中，可通
过适当的酶解作用释放出来。而目前水解方法仅针对肽链长度要求而设计的，并没有对
肽链末端的氨基酸残基而制定，因此制得的肽类产品只强调其具有大豆的营养价值及易
被人体吸收，而其是否有阿片肽，有哪种阿片肽，是否还具有其他生理功能及安全性隐 串
发明内容
本发明是为了解决采用现有的方法水解大豆蛋白忽略了阿片肽所具有的生理功 能和安全隐患的问题，而提供水解大豆蛋白产生外啡肽的方法。 本发明第一种水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进行采用胰蛋白 酶/碱性酶(Alcalase)，在pH值为8.0、温度为55。C、酶与底物浓度比为1 : 3的条件下 酶解5h。 本发明第二种水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进行采用胰蛋白 酶/中性酶(Neutras)，在pH值为7.5、温度为55。C、酶与底物浓度比为2 : 1的条件下酶 解5h。 本发明第三种水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进行采用胰碱性 酶/中性酶(Alcalase/Neutras)，在pH值为7.5、温度为55。C、酶与底物浓度比为3 : l的 条件下酶解5h。本发明第四种水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进行酸性蛋白酶/ 胃蛋白蛋酶，在pH值为2.5、温度为37t:、酶与底物浓度比为2 : l的条件下酶解5h。
本发明四种方法均具有以下优点1、本发明首次提出了大豆蛋白在酶同步水解 后产生大豆外啡肽的概念，确定了同步水解产生外啡肽的条件及产生量；2、同步水解产 生外啡肽方法的确定为大豆蛋白的后加工的安全性、大豆肽食品的发展奠定了基础；3、 本发明的水解方法专门针对产品存在目标外啡肽——P -酪啡肽而设计的，使蛋白肽产品具有更强的生理功能，P-酪啡肽具有阿片样活性，能够明显提高外周胰岛素和胃泌素的 分泌，对胰高血糖素的分泌也有促进作用；P-酪啡肽能与在胃肠道和中枢神经中存在与 摄食相关的前体结合后经神经传导作用于摄食中枢，从而影响摄食行为；可以调节消化 道运动。
图1为具体实施方式
一水解产物的液相色谱图，
图2为具体实施方式
二水解产物的液相色谱图，
图3为具体实施方式
三水解产物的液相色谱图，
图4为具体实施方式
四水解产物的液相色谱图，
图5为小鼠输精管模型装置。 其中，图5中1表示张力换能器，2表示导电线，3表示剌激器，4表示螺丝夹， 5表示铂电极，6表示热水入口， 7表示麦氏浴槽，8表示导气管，9表示热水出口， 10表 示肠或输精管，一表示通氧气或空气的方向
具体实施例方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间 的任意组合。
具体实施方式
一 本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进 行采用胰蛋白酶/碱性酶，在pH值为8.0、温度为55t:、酶与底物浓度比为l : 3的 条件下酶解5h。 本实施方式中胰蛋白酶的最佳用量为8000U/g，碱性酶的最佳用量为6000U/g。
本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法水解大豆蛋白产生外啡肽为拮抗 剂，平均肽链长度7.85。 本实施方式的水解产物的液相色谱图如图1所示，从图1中可以看出本实施方式 的水解大豆蛋白产生外啡肽为拮抗剂。
具体实施方式
二 本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进 行采用胰蛋白酶/中性酶，在pH值为7.5、温度为55t:、酶与底物浓度比为2 : l的 条件下酶解5h。 本实施方式中胰蛋白酶的最佳用量为8000U/g，中性酶的最佳用量为6000U/g。
本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法水解大豆蛋白，产生外啡肽为激动 剂，目标外啡肽百分含量0.007275%，平均肽链长度7.85。 本实施方式的水解产物的液相色谱图如图2所示，从图2中可以看出本实施方式 的水解大豆蛋白产生外啡肽为激动剂。
具体实施方式
三本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进 行采用胰碱性酶/中性酶(Alcalase/Neutras)，在pH值为7.5、温度为55。C、酶与底物浓 度比为3 : 1的条件下酶解5h。 本实施方式中碱性酶的最佳用量为6000U/g，中性酶的最佳用量为6000U/g。
本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法水解大豆蛋白，产生外啡肽为激动剂，目标外啡肽百分含量0.01228%，平均肽链长度6.68。 本实施方式的水解产物的液相色谱图如图3所示，从图3中可以看出本实施方式 的水解大豆蛋白产生外啡肽为激动剂。
具体实施方式
四本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进 行酸性蛋白酶/胃蛋白蛋酶，在pH值为2.5、温度为37t:、酶与底物浓度比为2 : l的 条件下酶解5h。 本实施方式中酸性蛋白酶的最佳用量为8000U/g，胃蛋白蛋酶的最佳用量为 4000U/g。 本实施方式水解大豆蛋白产生外啡肽的方法水解大豆蛋白，产生外啡肽为激动 剂，目标外啡肽百分含量0.083065%，平均肽链长度5.91。 本实施方式的水解产物的液相色谱图如图4所示，从图4中可以看出本实施方式 的水解大豆蛋白产生外啡肽为激动剂。 将具体实施方式
一至四的水解产物采用小鼠输精管模型进行验证，验证装置如 图5所示，验证所用药剂及浓度为纳络酮的浓度为5mg/ml，样品的浓度为200mg/mL ; 反应器(放置输精管的玻璃容器)体积为20ml，改变加入的样品体积，即为改变加入的样 品的量。小鼠输精管试验结果及处理如表l所示，表l中n二5， x士s， l号样品为具体 实施方式一的水解产物，2号样品为具体实施方式
二的水解产物，3号样品为具体实施方 式三的水解产物，4号样品为具体实施方式
四的水解产物，收縮活动通过等张换能器用记 录仪记录，以记录仪电讯号(电压mV =灵敏度/mV/cmX收縮高度/cm)的变化记录收縮 反应，结果以均数±标准差(x士s)表示，选用受试药物4 5个不同的浓度，测定其抑 制电剌激标本收縮的百分率和样品半数抑制剂量IC50值。在样品浓度确定下，改变样品 加入体积即相当改变样品的加入量。如果加入样品后小鼠输精管既没有表现有收縮也没 有舒张迹象，说明这类样品既没有阿片活性，也没有拮抗活性，表明这类样品不产生外 啡肽。 表l小鼠输精管试验结果及处理表
丰i^样ii加入量(以体积表样品，数抑制劍纳络兩加纳络 l逆转效应阿片为激动
P 园示/jiL)量iC50/進g/mL入教(以体瓶还足
抽抗剂
l1030 50700,685 土 0.152*有拮抗齐u
250100 i502000.785 土 0,023*50 腦0.426 土 0駕*有激动剂
350，00 1502000.724 土 0,348*50 1000.415 土 0.381*有激动剂
450100 150200O細土 O,靜50 腦0.435 土 0,020*激动翁 * : P < 0.05 ; " : P < 0.01 从表l中的数据可以看出，具体实施方式
一的水解产生外啡肽为拮抗剂，具体 实施方式二至四水解产生外啡肽为激动剂。
权利要求
水解大豆蛋白产生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按照如下方法进行采用胰蛋白酶/碱性酶，在pH值为8.0、温度为55℃、酶与底物浓度比为1∶3的条件下酶解5h。
2. 水解大豆蛋白产生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按 照如下方法进行采用胰蛋白酶/中性酶，在pH值为7.5、温度为55t:、酶与底物浓度 比为2 : 1的条件下酶解5h。
3. 水解大豆蛋白产生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按 照如下方法进行采用胰碱性酶/中性酶，在pH值为7.5、温度为55t:、酶与底物浓度 比为3 : 1的条件下酶解5h。
4. 水解大豆蛋白产生外啡肽的方法，其特征在于水解大豆蛋白产生外啡肽的方法按 照如下方法进行酸性蛋白酶/胃蛋白蛋酶，在pH值为2.5、温度为37t:、酶与底物浓 度比为2 : 1的条件下酶解5h。
全文摘要
水解大豆蛋白产生外啡肽的方法，它涉及了水解蛋白产生特定肽类的方法。本发明解决了采用现有的方法水解大豆蛋白忽略了阿片肽所具有的生理功能和安全隐患的问题。本发明四种方法分别采用胰蛋白酶/碱性酶、胰蛋白酶/中性酶、胰碱性酶/中性酶及酸性蛋白酶/胃蛋白蛋酶，在相应的条件下进行。本发明四种水解方法确定了同步水解大豆蛋白产生外啡肽的条件及产生量，同步水解产生外啡肽方法的确定为大豆蛋白的后加工的安全性、大豆肽食品的发展奠定了基础。
文档编号C12P21/06GK101691596SQ20091007305
公开日2010年4月7日 申请日期2009年10月15日 优先权日2009年10月15日
发明者孙冰玉, 石彦国, 胡春林 申请人:哈尔滨商业大学