专利名称：一种蛇毒蛋白的提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蛇毒蛋白的提取工艺，具体涉及一种蛇毒蛋白分离纯化出具有酪 蛋白水解活性的蛋白酶。
背景技术：
现有蛇毒蛋白提取中化学成份复杂，具有其他蛋白质和多肽的混合物，做为进一 步研究有局限。本发明提取出具有酪蛋白水解物活性的物质，使分子量在50000的蛋白质 组分得到最多。
发明内容
本发明目的是针对现有蛇毒蛋白提取的存在的不足，提供一种简单有效的方法， 使从蛇毒分离提取出一种具酪蛋白水解物活性蛋白，本发明目的是这样实现的一)制取粗毒，(二)应用DEAE-S^hadex A-50，用含NaCl的缓冲液进行梯度洗脱，分离蛇毒； DEAF-SephadEx A-50，Sephadex G-75，Pharmacia 产品，三羟甲基氨基甲烷(Tris), *，丙 烯酞胺和十二烷基硫酸钠(SDS)系，Ampboline系瑞典LKB公司产品，酪蛋白系中国医药公 司产品，SDS-N烯酞胺凝胶电泳测蛋白质分子量所用的标准蛋白为瑞典LKB公司产品(19， 300-71，500)，牛血清白蛋白(电泳纯)系中国科学院生物物理所生化厂生产，均为电泳 纯。。，用含NaCl的Tris-Hpl-7缓冲液进行直绛梯度洗脱，分离蝮蛇蛇毒。3g粗毒溶于15ml。· lmol/L，PH7. 5的缓冲液中，于IOOOOrpm冷冻离心110分钟， 取上清液上样，柱层析纯化3，1.柱层析。(三)将分离出的粗毒用PH7.5的Tris-HCl缓冲液中于IOOOOOrpm冷冻离心，取得上清液。(四)上述上清液用kphadexG-75柱层析，在吸光度为240nm，收集蛋白峰，经超 滤浓缩，冷冻干燥得到蛇毒蛋白。4.根据权利要求3所述的蛇毒蛋白的制作方法，其特征在于，分离出蛇毒蛋白中 与酪蛋白相近分子量的蛇毒蛋白，其紫外吸收光谱表明在277nm有最大吸收，为以后蛇毒 蛋白的进一步纯化有了基础。5，以上蛇毒蛋白以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，以标闪准的蛋白分子量对其电泳 相对迁移率作图，得到分子量为68000。
权利要求
1.一种蛇毒蛋白的提取方法，其特征在于，包含从腹蛇蛇毒中分离纯化出具有酪蛋 白水解活性的蛋白酶。
2.—种蛇毒蛋白的提取方法，根据权利要求1所述的纯化蛇毒的制作方法包含以下步骤(一)制取粗毒，(二)应用DEAE-S^hadexA-50，用含NaCl的缓冲液进行梯度洗脱，分离蛇毒；(三)将分离出的粗毒用PH7.5的Tris-HCl缓冲液中于IOOOOOrpm冷冻离心，取得上清液。(四)上述上清液用kphadexG-75柱层析，在吸光度为MOnm，收集蛋白峰，经超滤浓 缩，冷冻干燥得到蛇毒蛋白。
3.根据权利要求3所述的蛇毒蛋白的制作方法，其特征在于，分离出蛇毒蛋白中与酪 蛋白相近分子量的蛇毒蛋白，其紫外吸收光谱表明在277nm有最大吸收，为以后蛇毒蛋白 的进一步纯化有了基础。
4.以上蛇毒蛋白以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，以标闪准的蛋白分子量对其电泳相对 迁移率作图，得到分子量为68000。
全文摘要
本发明涉及提供一种蛇毒蛋白的提取方法，现有蛇毒蛋白提取中化学成份复杂，具有其他蛋白质和多肽的混合物，做为进一步研究有局限。本发明提取出具有酪蛋白水解物活性的物质，采用NaCl缓冲溶液梯度洗脱，10000RPM冷冻离心，提取上清液，冷冻干燥使分子量在50000的蛋白质组分得到最多。
文档编号C12N9/64GK102041253SQ20091019766
公开日2011年5月4日 申请日期2009年10月26日 优先权日2009年10月26日
发明者张新鼎 申请人:上海优博生物技术有限公司