专利名称：：金耳银杏白果黄酒、制备方法及其功效的制作方法
技术领域：
：本发明涉及生物工程
技术领域：
，特指利用双酶法水解银杏白果，经过两次菌种发酵获得的发酵液经过过滤和勾兑生产金耳银杏白果黄酒的方法和用途。
背景技术：
：白果的主要成分是蛋白质、淀粉和脂肪，另外含有黄酮、萜类化合物、银杏酸、氢化白果酸、氢化白果亚酸、银杏醇、白果酚、五碳多糖；脂面醇瓣虞分。我国中医古书，一直将白果列为重要药材，白果酸抑制多种杆菌及皮肤真菌，并对葡萄球菌、链球菌、白喉、炭瘟杆菌，枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、伤寒菌等都有不同程度的抑制作用。从鲜白果中提取出来的白果酚甲，有降压作用，并且使血管的渗透性增加。近年来各地临床试验证明，经常食用白果，可治高血压、止白带、咳锹发热；心脑血管、呼吸系统、皮肤病、牙痛等疾病，还有清热扰菌、温肺益气、扩张血管、增加血流量、定痰喘、去皱纹、防衰老、润音喉、健身美容、延年益寿等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酸，易导致人体食欲不振、脱皮、触痛，不等程度的肝损害、肾小球肾炎，白果酸有溶血作用引起惊厥和死亡。由于这些副作用阻碍了白果的大量的食用。因此采用一方面可以强化白果的药用价值，同时具有降低白果毒性的技术开发利用白果资源具有重要社会学意义，同时也会带来巨大的经济价值。国内关于银杏白果发酵酒有部分研究和报道，已经申请发明专利共十多项，这些专利基本上采用浸泡、勾兑或者发酵，如中国专利(CN01113680.4)介绍了一种以银杏为主要原料加入48度至52度白酒中浸渍提取有效成份后得酒液，然后再加入银杏提取物即银杏酮、蜂蜜勾兑而成；专利(CN03131562.3)主要介绍以草莓和浸泡、蒸煮后的银杏、红枣、葡萄为原料，经糖、米曲、活性酵母发酵2436小时，搅拌勾兑50°60°麦酒，封存515天后压汁，经粗、细过滤，取汁与糖按501的比例调配，该酒具有软化血管、降低血脂、补血、活血、润肺、健脾之功效和营养、医用价值；专利(CN96115885.9)主要涉及采用银杏叶80110克、小米7085克、糯米5080克、高梁4560克、糖化酶3040克、红曲7595克、白酒3045克、水1535克等原料经过发酵获得银杏酒，该酒可预防防治由动脉硬化引起的疾病、脑血管障碍后遗症、脑受伤后遗症等；专利(CN1376776)涉及银杏叶低温粉碎机内粉碎，白酒浸泡，脱苦以及白酒勾兑，该酒降低血清胆固醇、预防脑供血不足、脑功能性障碍提高人体耐缺氧能力、促进红细胞的生成功能。目前，对银杏叶或白果发酵的方法主要银杏叶或其提取物或者白果加入大米、酒曲或其他辅料直接发酵。用这些方法得到的酒由于含有银杏叶或白果中果的活性成分，如黄酮和萜类因而具有一定的功效。例如胡广东，宋瑞滨曾经报道米与银杏叶或白果一同蒸煮，蒸煮冷却后加入米曲糖化发酵，经过后续压榨获得银杏果酒。由上述研究可知，银杏叶或其提取物以及银杏白果可以与米混合通过与酒曲发酵获得含有银杏活性成分的功能性白酒，但是无论银杏叶还是其提取物或者白果都含有一定量的银杏毒素，如氢氰酸、银杏酚酸，使得银杏白酒或果酒的使用量受到了一定的限制，限制了银杏酒的销售量。
发明内容本发明提供的是一种金耳银杏白果黄酒的酿制技术，采用双酶法水解银杏白果，获得银杏白果水解液，该水解液中含有银杏黄酮、萜类化合物、氨基酸和肽类、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽类含量>1%，淀粉含量>2%，该水解液添加银杏叶提取物后通过金耳菌种转化，加入米饭酒曲发酵获得发酵液，该发酵液经过过滤、勾兑获得金耳银杏白果黄酒。金耳银杏白果黄酒，其特征在于酒精度845%，总黄酮含量彡15mg/L，银杏内酯彡16mg/Kg，总萜类化合物含量30800mg/L，蛋白质彡60mg/Kg,可溶性糖^2.0%,白果酚酸彡5ppm，氢氰酸彡0.1ug/L。本发明的目的在于提供一种金耳银杏白果黄酒的制备方法，其特征在于按下述步骤制备得到精确称取已经脱壳的白果，打浆加入110倍的水，升温到3070°C，按0.020.5%加入蛋白酶水解16小时，继续升温到80120°C维持2100分钟，冷却到60100°C，加入0.22%市售液化酶60100°C水解0.55小时，加入0.15%银杏叶提取物(总黄酮化合物含量>20%，总萜类化合物含量>5%)，100130°C灭菌1060分钟，以310%接入用白果水解液经过在温度2233°C下连续25次扩大培养的金耳菌种，在温度2233°C，搅拌转速80180转/分，通风量10.311.2v/v/m发酵培养210天；发酵结束后加入110倍白果重的的糯米和水煮成的米饭(糯米水=112)，以及糯米重的0.53%酒曲(黄酒酒曲或白酒酒曲)和糯米重的0.050.5%酿酒酵母，1040°C发酵730天后，经过过滤，滤液加入食用酒精、蜂蜜和柠檬酸勾兑，灭菌就得到不同风味的金耳银杏白果黄酒。其中所述金耳菌种制备工艺金耳试管斜面菌种，接入经过121°C1060分钟灭菌的220%的银杏白果水解液，在温度2033°C，搅拌转速80180转/分，通风量10.311.2v/v/m培养110天，连续25次扩大培养后可作为菌种使用。所使用的蛋白酶包括风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、高效水解蛋白酶、小麦蛋白水解专用酶等。用该工艺生产的金耳银杏白果黄酒，其特征在于色质浅褐色至褐色，具有淡淡白果香味和金耳子实体香味，该酒浓缩后香味浓郁持久不退。本发明提供的金耳银杏白果黄酒，该酒含有银杏活性成分(黄酮和萜类)和金耳活性成分(如多糖和蛋白质)，具有预防糖尿病、高血脂、抗氧化和增加肌体免疫力具有特效。其特征在于该酒具有降低体内氧化压力，增强肌体免疫力，调节血糖、血脂，缓解老年性哮喘等功效。图1是本发明的工艺流程图。具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步阐述本发明中实施例1-3中金耳斜面菌种采用PDA培养基制备。lOOOmLPDA培养基含200g马铃薯提取液(去皮马铃薯切成碎片、lOOOmL蒸馏水煮沸30分钟，八成纱布过滤，滤液定容至lOOOmL，滤液即为马铃薯提取液)加入蔗糖20g、琼脂20g，煮沸待琼脂完全溶化后分装试管，塞上棉塞，121°C灭菌，制成斜面。无菌接种金耳菌种，28°C培养7天，4°C冷藏待用。实施例1精确称取已经脱壳的白果200g，加入200mL水打浆，升温到30°C，加入0.4g中性蛋白酶(广西南宁东恒华道生物科技有限公司，80万单位/g)，水解6小时，继续升温到80°C维持40分钟，冷却到60°C，加入0.4mL液化酶(无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL)60°C水解0.5小时，加入lg银杏叶提取物(总黄酮化合物含量>20%，总萜类化合物含量>5%)，100°C灭菌20分钟，待用。接入9mL用白果水解液培养的金耳菌种(Tremellaaurantialba)，在温度22°C，搅拌转速80转/分，通风量10.3v/v/m发酵培养2天；发酵结束后加入200g糯米和200mL水煮成的米饭，以及糯米重的lg白酒酒曲(购自洋河酒厂)和糯米重的0.lg酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae，安琪酵母股份有限公司)，10°C发酵30天后，离心，上清液加入食用酒精25mL，柠檬酸0.lg，蜂蜜10g，调勻后获得金耳银杏白果黄酒。其中金耳菌种制作工艺为金耳试管斜面菌种，接入经过121°C，10分钟灭菌的2%的银杏白果水解液，在温度20°C，搅拌转速80转/分，通风量10.3v/v/m培养1天，连续2次扩大培养后可作为菌种使用。该酒为浅褐色，酒精度12%，总黄酮含量>lmg/L，总萜类化合物含量>3mg/L，氢氰酸<0.liig/L。实施例2精确称取已经脱壳的白果200g，打浆加入1000mL水，升温到50°C，加入0.7g碱性蛋白酶(济宁和美生物工程有限公司)，水解3小时，继续升温到100°C维持40分钟，冷却到80°C，加入1.6mL液化酶(无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/mL)80°C水解1.5小时，加入3g银杏叶提取物(总黄酮化合物含量>20%，总萜类化合物含量>5%)，120°C灭菌40分钟，待用。接入30mL用白果水解液培养的金耳菌种，在温度26°C，搅拌转速120转/分，通风量10.6v/v/m发酵培养6天；发酵结束后加入500g糯米和500mL水煮成的米饭，以及糯米重的7.5g黄酒酒曲(购自中南食品科学研究院)和2g酵母，25°C发酵20天后，离心取清液加入食用酒精70mL.柠檬酸0.3g，蜂蜜20g，即为金耳银杏白果黄酒。其中金耳菌种制作工艺为金耳试管斜面菌种，接入经过121°C，10分钟灭菌的10%的银杏白果水解液，在温度28°C，搅拌转速120转/分，通风量10.6v/v/m培养7天，连续4次扩大培养后可作为菌种使用。该酒为褐色，酒精度19%，总黄酮含量>5mg/L，总萜类化合物含量>720mg/L，氢氰酸<0.liig/L。实施例3精确称取已经脱壳的白果200g，打浆加入2000mL水，升温到70°C，加入lg高效蛋白水解酶(无锡赛德生物工程有限公司，16万单位/g)，水解1小时，继续升温到120°C维持10分钟，冷却到100°C，加入20mL液化酶(江苏宜兴微生物制剂厂，10万单位/mL)，100°C水解5小时，加入50g银杏叶提取物(总黄酮化合物含量>20%，总萜类化合物含量>5%)，5130°C灭菌60分钟，待用。接入200mL用白果水解液连续两次培养的金耳菌种，在温度33°C，搅拌转速180转/分，通风量11.2v/v/m发酵培养10天；发酵结束后加入1000g糯米和1000mL水煮成的米饭，以及糯米重的30g黄酒酒曲(购自浙江力克生物科技有限公司)和5g酵母，40°C发酵40天后，离心取清液加入食用酒精100mL，柠檬酸0.05g,蜂蜜20g勾兑即为金耳银杏白果黄酒。其中金耳菌种制作工艺为金耳试管斜面菌种，接入经过121°C，10分钟灭菌的3%的银杏白果水解液，在温度33°C，搅拌转速180转/分，通风量11.2v/v/m培养10天，连续4次扩大培养后可作为菌种使用。该酒为褐色，酒精度26%，总黄酮含量彡4mg/L,总萜类化合物含量彡480mg/L，氢氰酸彡0.1ug/L。实施例4实施例1-3中的金耳白果黄酒，可以还可以加入其它风味物质勾兑成不同风味的金耳银杏白果黄酒，这系列酒具有增强机体免疫力，调节血糖、降低体内血脂和氧化压力。这些风味物质包括甜味剂、酸味剂、香精香料和色素。甜味剂白砂糖、果葡糖浆、甜叶菊苷、甘草苷、阿斯巴甜等；酸味剂柠檬酸、酒石酸、苹果酸、乳酸酒等；香精香料柠檬油、橘子油、甜橙油、橘子香精、柠檬香精、菠萝香精、薄荷香精等；色素植物色素、红曲色素等天然色素和苋菜红、胭脂红等人工合成色素。降血糖实验体重为21_33g雄性昆明小白鼠，适应性喂养5天后，禁食24小时后，按200mg/kg剂量腹腔注射四氧嘧啶造模型，5天后禁食5小时，测血糖，血糖值>13mmol/L为实验性糖尿病模型鼠。实验模型鼠按禁食3-5小时的血糖水平随机分组，分为一个模型对照组和5个试验组，试验组分为实施例15的样品。其中实施例13试验剂量为26mL/Kg体重。对照组给以等量的蒸馏水，连续给药28天后，禁食5小时，眼眶静脉取血，分析血清中血糖值的变化。结果(表1)所有供试药物血糖值和模型对照组以及给药前相比，均显著降低。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>权利要求金耳银杏白果黄酒，其特征在于其中酒精度8～45％，总黄酮含量≥1～5mg/L，银杏内酯≥1～6mg/Kg，总萜类化合物含量30～800mg/L，蛋白质≥60mg/Kg，可溶性糖≤2.0％，白果酚酸≤5ppm，氢氰酸≤0.1μg/L。2.金耳银杏白果黄酒的制备方法，其特征在于按下述步骤制备得到精确称取已经脱壳的白果，打浆加入110倍的水，升温到3070°C，按0.020.5%加入蛋白酶水解16小时，继续升温到80120°C维持2100分钟，冷却到60100°C，加入0.22%市售液化酶60100°C水解0.55小时，加入0.15%银杏叶提取物，100130°C灭菌1060分钟，以310%接入用白果水解液经过在温度2233°C下连续25次扩大培养的金耳菌种，在温度2233°C，搅拌转速80180转/分，通风量10.311.2v/v/m发酵培养210天；发酵结束后加入110倍白果重的的糯米和水煮成的米饭，其中以质量计糯米水=112，以及糯米重的0.53%酒曲和糯米重的0.050.5%酿酒酵母，1040°C发酵730天后，经过过滤，滤液加入食用酒精、蜂蜜和柠檬酸勾兑，灭菌就得到金耳银杏白果黄酒。3.根据权利要求2所述的金耳银杏白果黄酒的制备方法，其特征在于其中所述金耳菌种制备工艺金耳试管斜面菌种，接入经过121°C1060分钟灭菌的220%的银杏白果水解液，在温度2033°C，搅拌转速80180转/分，通风量10.311.2v/v/m培养110天，连续25次扩大培养后可作为菌种使用。4.根据权利要求2所述的金耳银杏白果黄酒的制备方法，其特征在于所使用的蛋白酶包括风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、高效水解蛋白酶、小麦蛋白水解专用酶。5.根据权利要求2所述的金耳银杏白果黄酒的制备方法，其特征在于其中所述的酒曲为黄酒酒曲或白酒酒曲。6.根据权利要求2所述的金耳银杏白果黄酒的制备方法，其特征在于其中所述的银杏叶提取物中总黄酮化合物含量>20%，总萜类化合物含量>5%。7.金耳银杏白果黄酒，其特征在于该酒具有降血糖的功效。全文摘要本发明公开了金耳银杏白果黄酒，其中酒精度8～45％，总黄酮含量≥1～5mg/L，银杏内酯≥1～6mg/kg，总萜类化合物含量30～800mg/L，蛋白质≥60mg/kg，可溶性糖≤2.0％，白果酚酸≤5ppm，氢氰酸≤0.1μg/L。采用双酶法水解银杏白果，获得银杏白果水解液，该水解液中含有银杏黄酮、萜类化合物、氨基酸和肽类、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽类含量≥1％，淀粉含量≥2％，该水解液添加银杏叶提取物后通过金耳菌种转化，加入米饭酒曲发酵获得发酵液，该发酵液经过过滤、勾兑获得金耳银杏白果黄酒。该酒含有银杏和金耳活性成分，具有预防糖尿病、高血脂、抗氧化和增加肌体免疫力具有特效。文档编号C12R1/865GK101831369SQ20101014571公开日2010年9月15日申请日期2010年4月13日优先权日2010年4月13日发明者任晓锋,崔凤杰,张志才,林琳申请人:江苏大学