专利名称：一种皇佳吉鸡品种的分子生物学鉴定方法
技术领域：
本发明属于生物品种鉴定技术领域，具体涉及一种皇佳吉鸡品种的分子生物学鉴 定方法。
背景技术：
皇佳吉鸡是现代新农业股份有限公司最新培育的优质新型肉鸡品种，因其肉质鲜 香、味醇、汁多，受到了消费者的广泛亲睐。但市场上一些不法企业、养殖户非法生产和销售 假冒、仿冒皇佳吉鸡的现象屡见不鲜，严重损害了皇佳吉鸡品牌的声誉，影响了现代新农业 股份有限公司的发展。目前对家禽品种的鉴定主要是以形态学标记为依据来审查育种档案 和生产性能测定。但随着育种技术的不断成熟，亲本与杂交后代的外貌特征有较大的相似 性，很难从外貌特征进行区分。所以利用形态学标记来进行家禽品种(品系)鉴定就不够 科学、准确。如果进行生产性能测定，不仅耗费大量的人力、时间和高昂的性能测定费用，而 且性能测定的结果还受饲养各个环节因素的影响，因此生产性能测定也难以准确反映各品 种(品系)的真实的生产性能和种质特性。基于基因克隆和DNA测序技术发展的DNA分子 标记能够准确的揭示品种之间最根本的遗传差异(碱基差异)。线粒体DNA分子标记就属 于这类标记特别是COI (细胞色素C氧化酶亚基I)基因，它具有遗传自主性、严格的母系遗 传、拷贝数高、无组织特异性、进化速度快等特点，已经广泛应用于鲸、人类、鸟类等群体鉴 定。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种准确性高， 鉴定时间短，成本低的皇佳吉鸡品种的分子生物学鉴定方法。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种皇佳吉鸡品种的分子生物 学鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)通过苯酚-氯仿法分别提取皇佳吉鸡和受测鸡包括线粒体DNA的总DNA ；(2)按照GeneBank上发表的红色原鸡线粒体DNA的COI基因序列(AP003322)和 丝羽乌骨鸡线粒体DNA的COI基因序列(AB086102)设计三对引物PFl (SEQ ID NO. 3)和 PRl (SEQ ID NO. 4)，PF2 (SEQ IDN0. 5)和 PR2 (SEQ ID NO. 6)，PF3 (SEQ ID NO. 7)和 PR3 (SEQ
ID NO.8)；所述引物的序列分别为
上游引物PFl:5，-TACAGCCTAACGCTTCAACA-3‘；
下游引物I3Rl:5，-GGTTGCGGTCGGTAAGTAGT-3’。
上游引物PF2:5，-GCCCATGCTTTCGTCATAA-3‘；
下游引物PR2:5，-TGGGATGGCGATGATTATTG-3’。
上游引物PF3:5，-CGCCATCCCAACTGGTAT-3，；
下游引物PR3:5，-GATGAGGCGTCTTGAAAG-3’。
(3)利用步骤⑵中所述引物对皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因进行PCR扩增，将
3扩增的产物克隆并在DNA测序仪上进行测序获得皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列 (SEQ ID NO. 1)；(4)根据步骤(3)中测得的皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列设计引物 PF(SEQ ID NO. 9)和 PR(SEQ ID NO. 10)；所述引物的序列为上游引物PF 5，-GCACAGGATGGACAGTTTAC-3，；下游引物PR 5，-ATAGCATAGGGGGGTCTCAT-3，。利用所述引物获取可用于品种鉴定的皇佳吉鸡COI基因中的一段基因序列(SEQ ID NO. 2)，进行测序，并通过Chromasl. 49软件准确读取测序结果；(5)利用步骤⑷中所述引物获取受测鸡与步骤⑷中测得的皇佳吉鸡COI基因 中的一段基因序列(SEQ ID NO. 2)相应的基因序列，进行测序，并通过Chromasl.49软件准 确读取测序结果；(6)将步骤(4)获得的测序结果和步骤(5)获得的测序结果进行人工逐碱基读取 和核对；(7)通过DnaSP4. 10. 7软件统计皇佳吉鸡和受测鸡的变异位点、单倍型、平均核苷 酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，并根据皇佳吉鸡和受测鸡的变异位点、单倍型、平均 核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，确定皇佳吉鸡和受测鸡基因序列的平均变异程 度，平均变异程度不大于2%则为同一品种，平均变异程度大于2%则为不同品种；(8)运用生物学软件构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单倍型系统发生树， 根据构建的群体聚类图和单倍型系统发生树的结果确定皇佳吉鸡与受测鸡是否为同一品 种，若皇佳吉鸡与受测鸡的单倍型聚为一类则为同一品种，否则为不同品种。上述步骤(8)中所述构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单倍型系统发生树 的方法为运用MEGA4. 0软件估计皇佳吉鸡和受测鸡之间Kimura双参数遗传距离，并基 于Kimura双参数模型应用UPGMA/NJ法构建群体聚类图和单倍型系统发生树，同时运用 NETW0RK4. 5. 0. 1软件构建群体聚类图和单倍型系统发生树。本发明与现有技术相比具有以下优点本发明利用品种间的遗传信息差异经软件 精密计算和分析的结果鉴定真伪皇佳吉鸡品种，具有准确性高、鉴定时间短和成本低等优
点ο下面通过实施例对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
图1为本发明实施例2皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图。图2为本发明实施例2皇佳吉鸡和受测鸡的单倍型系统发生树。图3为本发明实施例3皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图。图4为本发明实施例3皇佳吉鸡和受测鸡的单倍型系统发生树。
具体实施例方式实施例1受测鸡为皇佳吉鸡(1)通过苯酚-氯仿法分别提取皇佳吉鸡(1只，品种代号为HJJ1)和受测鸡(皇佳吉鸡2只，品种代号为SHJJl和SHJJ2)包括线粒体DNA的总DNA ；
(2)按照GeneBank上发表的红色原鸡线粒体DNA的COI基因序列AP003322和丝 羽乌骨鸡线粒体DNA的COI基因序列AB086102设计三对引物PFl (SEQ ID NO. 3)、PR1 (SEQ ID NO. 4)，PF2 (SEQ ID NO. 5)、PR2 (SEQ ID NO. 6)和 PF3 (SEQ ID NO. 7)、PR3 (SEQ ID NO. 8)；
所述引物的序列分别为
上游引物PFl:5，-TACAGCCTAACGCTTCAACA-3‘；
下游引物PRl:5，-GGTTGCGGTCGGTAAGTAGT-3’。
上游引物PF2:5，-GCCCATGCTTTCGTCATAA-3‘；
下游引物PR2:5，-TGGGATGGCGATGATTATTG-3’。
上游引物PF3:5，-CGCCATCCCAACTGGTAT-3，；
下游引物PR3:5，-GATGAGGCGTCTTGAAAG-3’。
(3)利用步骤⑵中所述引物对皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因进行PCR扩增，将
扩增的产物克隆并在DNA测序仪上进行测序获得皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列 (SEQ ID NO. 1)；利用引物 PFl，PR2 进行 PCR 扩增DNA 模板 lOOng，10 X buffer2. 5 μ L, 25mM 镁 离子2yL，10mM dNTP 0. 5yL，混合引物(上游引物PFl和下游引物PRl各为IOpmol/ μ L) 0. 5 μ L，TaqDNA聚合酶1U，加水至25 μ L。PCR反应程序94°C预变性5min ；94°C变性 45s ；58°C退火45s ；72°C延伸Imin ；进行35个循环；最后72°C延伸IOmin ；
利用引物 PF2, PR2 进行 PCR 扩增=DNA 模板 IOOng, 10 X buffer2. 5 μ L, 25mM 镁 离子2yL，10mM dNTP 0. 5yL，混合引物(上游引物PF2和下游引物PR2各为IOpmol/ μ L) 0. 5 μ L，TaqDNA聚合酶1U，加水至25 μ L。PCR反应程序94°C预变性5min ；94°C变性 45s ；56°C退火45s ；72°C延伸Imin ；进行35个循环；最后72°C延伸IOmin ；利用引物PF3, PR3 进行 PCR 扩增=DNA 模板 IOOng, 10 X buffer2. 5 μ L, 25mM 镁 离子2yL，10mM dNTP 0. 5yL，混合引物(上游引物PF3和下游引物PR3各为IOpmol/ μ L) 0. 5 μ L，TaqDNA聚合酶1U，加水至25 μ L。PCR反应程序94°C预变性5min ；94°C变性 45s ；59°C退火45s ；72°C延伸Imin ；进行35个循环；最后72°C延伸IOmin ；(4)根据步骤(3)中测得的皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列设计引物 PF (SEQ ID N0. 9)和 PR (SEQ ID NO. 10)上游引物PF 5，-GCACAGGATGGACAGTTTAC-3，；下游引物PR 5，-ATAGCATAGGGGGGTCTCAT-3，。利用所述引物获取可用于品种鉴定的皇佳吉鸡COI基因中的一段基因序列(SEQ ID N0. 2)，进行测序，并通过Chromasl. 49软件准确读取测序结果；利用引物PF，PR 进行 PCR 扩增DNA 模板 lOOng，10Xbuffer2. 5 μ L，25mM 镁离 子2yL，10mM dNTP 0. 5 μ L，混合引物(上游引物和下游引物各为IOpmol/μ L) 0. 5 μ L， TaqDNA聚合酶1U，加水至25 μ L。PCR反应程序94°C预变性5min ；94°C变性45s ；55°C退 火45s ；72°C延伸Imin ；进行38个循环；最后72°C延伸IOmin ；(5)利用步骤⑷中所述引物获取受测鸡与步骤⑷中测得的皇佳吉鸡COI基因 中的一段基因序列(SEQ ID N0. 2)相应的基因序列，进行测序，并通过Chromasl.49软件准 确读取测序结果；PCR扩增条件及反应程序同步骤⑷；
5
(6)将步骤(4)获得的测序结果和步骤(5)获得的测序结果进行人工逐碱基读取 和核对；(7)通过DnaSP4. 10. 7软件统计皇佳吉鸡和受测鸡的变异位点、单倍型、平均核苷 酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，并根据皇佳吉鸡和受测鸡的变异位点、单倍型、平均 核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，确定皇佳吉鸡和受测鸡基因序列的平均变异程 度；(8)运用MEGA4. 0软件估计皇佳吉鸡和受测鸡之间Kimura双参数遗传距离，并基 于Kimura双参数模型应用UPGMA/NJ法构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单倍型系统 发生树，同时运用NETW0RK4. 5. 0. 1软件构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单倍型系 统发生树。鉴定结果采用设计的上、下游引物，通过测序技术获得了皇佳吉鸡和受测鸡共计 3个个体的COI基因一段长65 Ibp序列，运用Chromasl. 49软件比对未发现变异位点，运用 DnaSP4. 10. 7软件发现所有序列共有1种单倍型(Hapl :CAG)，皇佳吉鸡与受测鸡序列之间 单倍型多样度为0. 000，核苷酸多样度为0. 000，平均核苷酸差异为0. 000，基因序列的平均 变异程度为0%。通过所得结果，得出待测品种是皇佳吉鸡。实施例2受测鸡为土鸡(1)通过苯酚-氯仿法提取皇佳吉鸡(1只，品种代号为HJJ1)和受测鸡(土鸡3 只，品种代号为TJl，TJ2和TJ3)包括线粒体DNA的总DNA ；(2)按照GeneBank上发表的红色原鸡线粒体DNA的COI基因序列AP003322和丝 羽乌骨鸡线粒体DNA的COI基因序列AB086102设计三对引物PFl (SEQ ID NO. 3)、PR1 (SEQ ID NO. 4)，PF2 (SEQ ID NO. 5)、PR2 (SEQ ID NO. 6)和 PF3 (SEQ ID NO. 7)、PR3 (SEQ ID NO. 8)；
所述引物的序列分别为
上游引物PFl:5，-TACAGCCTAACGCTTCAACA-3‘；
下游引物PRl:5，-GGTTGCGGTCGGTAAGTAGT-3’。
上游引物PF2:5，-GCCCATGCTTTCGTCATAA-3‘；
下游引物PR2:5，-TGGGATGGCGATGATTATTG-3’。
上游引物PF3:5，-CGCCATCCCAACTGGTAT-3，；
下游引物PR3:5，-GATGAGGCGTCTTGAAAG-3’。
(3)利用步骤⑵中所述引物对皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因进行PCR扩增，将
扩增的产物克隆并在DNA测序仪上进行测序获得皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列 (SEQ ID NO. 1)；(4)根据步骤(3)中测得的皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列设计引物 PF (SEQ ID N0. 9)和 PR (SEQ ID NO. 10)上游引物PF 5，-GCACAGGATGGACAGTTTAC-3，；下游引物PR 5，-ATAGCATAGGGGGGTCTCAT-3，。利用所述引物获取可用于品种鉴定的皇佳吉鸡COI基因中的一段基因序列(SEQ ID N0. 2)，进行测序，并通过Chromasl. 49软件准确读取测序结果；
(5)利用步骤⑷中所述引物获取受测鸡(土鸡)与步骤⑷中测得的皇佳 吉鸡COI基因中的一段基因序列(SEQ ID N0.2)相应的基因序列，进行测序，并通过 Chromasl. 49软件准确读取测序结果；(6)将步骤(4)获得的测序结果和步骤(5)获得的测序结果进行人工逐碱基读取 和核对；(7)通过DnaSP4. 10. 7软件统计皇佳吉鸡和受测鸡(土鸡)的变异位点、单倍型、 平均核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，并根据皇佳吉鸡和受测鸡(土鸡)的变异位 点、单倍型、平均核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，确定皇佳吉鸡和受测鸡(土鸡) 基因序列的平均变异程度；(8)运用MEGA4. 0软件估计皇佳吉鸡和受测鸡(土鸡)之间Kimura双参数遗传距 离，并基于Kimura双参数模型应用UPGMA/NJ法构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单 倍型系统发生树，同时运用NETW0RK4. 5. 0. 1软件构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图，以 及单倍型系统发生树。本实施例中的PCR扩增条件及反应程序同实施例1。鉴定结果采用设计的上、下游引物，通过测序技术获得了皇佳吉鸡和受测鸡(土 鸡)共计4个个体的COI基因一段长651bp序列，运用Chromasl. 49软件比对发现3个变 异位点(C-G/53bp处，A-I7282bp处，C_G/606bp处)，运用DnaSP4. 10. 7软件发现共有4种 单倍型，1个皇佳吉鸡个体享有1种单倍型(Hapl =CAG)，3个受测鸡(土鸡)共享3种单倍 型(Hap2，Hap3, Hap4 :GAC，CTC, CAC)，皇佳吉鸡与受测鸡(土鸡)序列之间单倍型多样度 为0. 800，核苷酸多样度为0. 00195，平均核苷酸差异为1. 26667，2个品种间基因序列的平 均变异程度大于2%。运用MEGA4. 0软件计算出皇佳吉鸡和受测鸡(土鸡)之间Kimura 双参数遗传距离为0. 00257，基于Kimura双参数模型应用UPGMA法构建群体聚类图(如图 1)，皇佳吉鸡和受测鸡(土鸡)聚于不同分支。运用NETW0RK4. 5. 0. 1软件构建单倍型系统 发生树(如图2)，皇佳吉鸡个体享有的单倍型1 (Hapl)与3个受测鸡(土鸡)共享的3种 单倍型(Hap2，Hap3，Hap4)聚于不同分支。通过所得结果，得出待测品种不是皇佳吉鸡。实施例3受测鸡为乌鸡(1)通过苯酚-氯仿法提取皇佳吉鸡(1只，品种代号为HJJ1)和受测鸡(乌鸡3 只，品种代号为WJl，WJ2和WJ3)包括线粒体DNA的总DNA ；(2)按照GeneBank上发表的红色原鸡线粒体DNA的COI基因序列AP003322和丝 羽乌骨鸡线粒体DNA的COI基因序列AB086102设计三对引物PFl (SEQ ID NO. 3)、PR1 (SEQ ID NO. 4)，PF2 (SEQ ID NO. 5)、PR2 (SEQ ID NO. 6)和 PF3 (SEQ ID NO. 7)、PR3 (SEQ ID NO. 8)；
所述引物的序列分别为
上游引物PFl:5，-TACAGCCTAACGCTTCAACA-3‘；
下游引物PRl:5，-GGTTGCGGTCGGTAAGTAGT-3，。
上游引物PF2:5，-GCCCATGCTTTCGTCATAA-3‘；
下游引物PR2:5，-TGGGATGGCGATGATTATTG-3’。
上游引物PF3:5，-CGCCATCCCAACTGGTAT-3，；
下游引物PR3 5，-GATGAGGCGTCTTGAAAG-3，。(3)利用步骤(2)中所述引物对皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因进行PCR扩增，将 扩增的产物克隆并在DNA测序仪上进行测序获得皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列 (SEQ ID NO. 1)；(4)根据步骤(3)中测得的皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列设计引物 PF (SEQ ID NO. 9)和 PR (SEQ ID NO. 10)上游引物PF 5，-GCACAGGATGGACAGTTTAC-3，；下游引物PR 5，-ATAGCATAGGGGGGTCTCAT-3，。利用所述引物获取可用于品种鉴定的皇佳吉鸡COI基因中的一段基因序列(SEQ ID NO. 2)，进行测序，并通过Chromasl. 49软件准确读取测序结果；(5)利用步骤⑷中所述引物获取受测鸡(乌鸡)与步骤⑷中测得的皇佳 吉鸡COI基因中的一段基因序列(SEQ ID N0.2)相应的基因序列，进行测序，并通过 Chromasl. 49软件准确读取测序结果；(6)将步骤(4)获得的测序结果和步骤(5)获得的测序结果进行人工逐碱基读取 和核对；(7)通过DnaSP4· 10. 7软件统计皇佳吉鸡和受测鸡(乌鸡)的变异位点、单倍型、 平均核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，并根据皇佳吉鸡和受测鸡(乌鸡)的变异位 点、单倍型、平均核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，确定皇佳吉鸡和受测鸡(乌鸡) 基因序列的平均变异程度；(8)运用MEGA4. 0软件估计皇佳吉鸡和受测鸡(乌鸡)之间Kimura双参数遗传距 离，并基于Kimura双参数模型应用UPGMA/NJ法构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单 倍型系统发生树，同时运用NETW0RK4. 5. 0. 1软件构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和 单倍型系统发生树，根据两种软件的群体聚类图和单倍型系统发生树的结果。本实施例中的PCR扩增条件及反应程序同实施例1。鉴定结果采用设计的上、下游引物，通过测序技术获得了皇佳吉鸡和受测鸡(乌 鸡)共计4个个体的COI基因一段长651bp序列，运用Chromasl. 49软件比对发现3个变 异位点(T-A/9bp处，A-C/46bp处，C_G/386bp处)，运用DnaSP4. 10. 7软件发现共有3种单 倍型，1个皇佳吉鸡个体享有1种单倍型(Hapl =TAC)，3个受测鸡(乌鸡)共享2种单倍型 (Hap2, Hap3 :TCG，ACG)，皇佳吉鸡与受测鸡(乌鸡)序列之间单倍型多样度为0. 733，核苷 酸多样度为0. 00236，平均核苷酸差异为1. 53333，2个品种间基因序列的平均变异程度大 于2%。运用MEGA4. 0软件计算出皇佳吉鸡和受测鸡(乌鸡)之间Kimura双参数遗传距离 为0. 0036，基于Kimura双参数模型应用UPGMA/NJ法构建群体聚类图(如图3)，皇佳吉鸡 和受测乌鸡聚于不同分支。运用NETW0RK4. 5. 0. 1软件构建单倍型系统发生树(如图4)，1 个皇佳吉鸡个体享有的单倍型I(Hapl)，3个受测乌鸡共享的2种单倍型(Hap2，Hap3)聚于 不同分支。通过所得结果，得出待测品种不是皇佳吉鸡。以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明 技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变换，均仍属于本发明技 术方案的保护范围内。
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权利要求
一种皇佳吉鸡品种的分子生物学鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)通过苯酚 氯仿法分别提取皇佳吉鸡和受测鸡包括线粒体DNA的总DNA；(2)按照红色原鸡线粒体DNA的COI基因序列AP003322和丝羽乌骨鸡线粒体DNA的COI基因序列AB086102设计三对引物；所述引物的序列分别为上游引物PF15’ TACAGCCTAACGCTTCAACA 3’；下游引物PR15’ GGTTGCGGTCGGTAAGTAGT 3’。上游引物PF25’ GCCCATGCTTTCGTCATAA 3’；下游引物PR25’ TGGGATGGCGATGATTATTG 3’。上游引物PF35’ CGCCATCCCAACTGGTAT 3’；下游引物PR35’ GATGAGGCGTCTTGAAAG 3’。(3)利用步骤(2)中所述引物对皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因进行PCR扩增，将扩增的产物克隆并在DNA测序仪上进行测序获得皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列；(4)根据步骤(3)中测得的皇佳吉鸡线粒体DNA的COI基因的全序列设计引物；所述引物的序列为上游引物PF5’ GCACAGGATGGACAGTTTAC 3’；下游引物PR5’ ATAGCATAGGGGGGTCTCAT 3’。利用所述引物获取可用于品种鉴定的皇佳吉鸡COI基因中的一段基因序列，进行测序，并通过Chromas1.49软件准确读取测序结果；(5)利用步骤(4)中所述引物获取受测鸡与步骤(4)中测得的皇佳吉鸡COI基因中的一段基因序列相应的基因序列，进行测序，并通过Chromas1.49软件准确读取测序结果；(6)将步骤(4)获得的测序结果和步骤(5)获得的测序结果进行人工逐碱基读取和核对；(7)通过DnaSP4.10.7软件统计皇佳吉鸡和受测鸡的变异位点、单倍型、平均核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，并根据皇佳吉鸡和受测鸡的变异位点、单倍型、平均核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离确定皇佳吉鸡和受测鸡基因序列的平均变异程度，若平均变异程度不大于2％则为同一品种，平均变异程度大于2％则为不同品种；(8)运用生物学软件构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单倍型系统发生树，根据构建的群体聚类图和单倍型系统发生树的结果确定皇佳吉鸡与受测鸡是否为同一品种，若皇佳吉鸡与受测鸡的单倍型聚为一类则为同一品种，否则为不同品种。
2.根据权利要求1所述的一种皇佳吉鸡品种的分子生物学鉴定方法，其特征在于，步 骤(8)中所述构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单倍型系统发生树的方法为运用 MEGA4. O软件估计皇佳吉鸡和受测鸡之间Kimura双参数遗传距离，并基于Kimura双参数模 型应用UPGMA/NJ法构建群体聚类图和单倍型系统发生树，同时运用NETW0RK4. 5. 0. 1软件 构建群体聚类图和单倍型系统发生树。
全文摘要
本发明公开了一种皇佳吉鸡品种的分子生物学鉴定方法，其基于基因克隆和DNA测序技术准确获得皇佳吉鸡和受测鸡的线粒体DNA的COI基因序列，运用DnaSP4.10.7软件统计皇佳吉鸡和受测鸡的变异位点、单倍型、平均核苷酸差异、核苷酸分歧度和净遗传距离，运用生物学软件构建皇佳吉鸡和受测鸡的群体聚类图和单倍型系统发生树，根据构建的群体聚类图和单倍型系统发生树的结果确定皇佳吉鸡与受测鸡是否为同一品种。本发明利用品种间的遗传信息差异经软件精密计算和分析的结果鉴定真伪皇佳吉鸡品种，具有准确性高、鉴定时间短和成本低等特点。
文档编号C12Q1/68GK101974647SQ20101056197
公开日2011年2月16日 申请日期2010年11月26日 优先权日2010年11月26日
发明者宋金典 申请人:现代新农业(集团)股份有限公司