专利名称：用β-半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制备悬钩子苷的方法
技术领域：
本发明属于有机化合物的生物合成技术领域，具体涉及一种用β -半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制备悬钩子苷的方法。
背景技术：
悬钩子苷(又名甜茶甙或甜茶素，Rubusoside, Ru)为广西甜茶、Rubus usavissmius. S Lee)的主要甜味成分，具有高甜度、低热值、天然无毒等特点，对有糖尿病人或“三高”人群都有很好的保健作用。但甜茶的种植区域范围小、产量低，目前只有屈指可数几家广西公司从事悬钩子苷的生产，产品纯度最高仅为70%左右，成分复杂，含有甜菊醇和甜菊单糖苷等物质。甜菊糖苷(13- [ (2-0-,0 -D-Glucopyranosyl-^ -D-glucopyranosyl) oxy] kaur-16-en -18-oic acid β -D-glucopyranosyl ester, stevioside，以下简禾尔 St)是从甜叶菊、Stevia rebaudiana Bertoni)中提取出的四环二萜类化合物，是一种具有后苦涩味的甜味剂，可以低成本大量生产。^水解后可以得到甜菊醇、异甜菊醇、甜菊双糖苷、悬钩子苷或者其混合物；各组分含量取决于水解的选择性。化学水解时，完全水解St可以得到甜菊醇或异甜菊醇，部分水解则得到上述多种化合物。通过酶催化方法水解^有希望利用酶的高区域选择性，只水解M分子中β -1，2糖苷键，专一性的得到悬钩子苷。St被各种催化剂水解的方程式如下
权利要求
1.一种用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制备悬钩子苷的方法，其特征是以甜菊糖苷或者含有甜菊糖苷的甜叶菊提取物为底物，将其用水或缓冲液配制成10-200mg/mL的反应液，50-65°C下恒温0. 3-0. 7h后加入β -半乳糖苷酶，反应至甜菊糖苷转化率不再升高； 煮沸反应液IOmin使酶失活或离心回收固定化酶，经浓缩、重结晶后可得到纯度大于97%的悬钩子苷；进一步通过柱层析纯化可以得到纯度大于99%的悬钩子苷。
2.根据权利要求1所述的用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制备悬钩子苷的方法， 其特征是所说的缓冲液为PH 4. 0-5. 4的醋酸缓冲液或者pH 6. 0的磷酸缓冲液。
3.根据权利要求1所述的用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制备悬钩子苷的方法， 其特征是所说的半乳糖苷酶来源于M/^rgiBM oiT^e，其形态是酶液或固定化酶。
4.根据权利要求1所述的用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制备悬钩子苷的方法， 其特征是所述的半乳糖苷酶的添加量为为2000-14000 U/g St。
全文摘要
一种用β-半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制备悬钩子苷的方法，属于有机化合物的生物合成技术领域。本发明以β-半乳糖苷酶选择性催化水解从甜叶菊提取物中获得的甜菊糖苷，用以制备悬钩子苷，具有转化率高、速度快、选择性高、分离纯化简单等优点。本发明提供了一种高效、环境友好的新方法以制备悬钩子苷。
文档编号C12P19/56GK102250990SQ20111014435
公开日2011年11月23日 申请日期2011年5月31日 优先权日2011年5月31日
发明者万会达, 夏咏梅, 方云 申请人:江南大学