专利名称：一种从固态发酵纳豆中分离溶栓物质的方法
技术领域：
本发明涉及溶栓物质的提取，具体的说是一种从固态发酵纳豆中分离溶栓物质的方法。
背景技术：
在现代社会生活中，血栓性疾病是一种常见病，常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死、静脉血栓栓塞。据世界卫生组织公布的数据显示，心脑血管疾病已经成为危害人类健康的第一杀手。目前，我国约有1.1亿人患有高血压、动脉硬化等心脑血管疾病，其发病具有高死亡率、高复发率、高致残率的特点。因此，开发具有预防和治疗血栓性疾病的功能食品，具有广阔的市场前景与深远的社会意义。纳豆是由黄豆经纳豆菌发酵而成的一种健康食品，其中所含丰富的纳豆激酶，被公认为是一种安全的食用血栓预防剂。它不同于目前使用的大多数以激活纤维蛋白溶酶为基础的溶栓药物，纳豆激酶可直接溶解血液中的交联形式的纤维蛋白。长期食用纳豆对预防心脑血管疾病具有积极作用。此外，纳豆中还富含优质小分子蛋白质(多肽)、超氧化物歧化酶(S0D)、异黄酮等生理活性物质及对人体有益的纳豆菌，因而被誉为"超级健康食品"、“世界第一健康美食”等。特别是每天坚持食用100克左右的纳豆对人体免疫功能、调节血脂、预防心血管疾病、增加骨密度等都能起到很好的保健作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从固态发酵纳豆中分离溶栓物质的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种从固态发酵纳豆中分离溶栓物质的方法将原料纳豆用无菌水于在40C -10°C下浸提5-8小时，而后过滤收集浸提液，将4°C -10°C的无水乙醇加入到浸提液中静置沉淀3-5小时后离心，沉淀即为得到的纳豆溶栓物质。所述浸提时纳豆与无菌水的质量比为1: 1-3。所述无水乙醇加入到浸提液中至乙醇终浓度体积比为70-80%，静置沉淀3-5小时。所述无水乙醇加入到浸提液中静置沉淀后在4-10°C，以6000-10000转/分钟，离心8_10min，将所得沉淀冻干，即为纳豆溶栓物质。本发明所具有的优点1.依照本发明的方法提取的溶栓物质提取纯度高，其溶栓物质是固态发酵纳豆溶栓活性的30倍；2.本发明提取方法成本低所用试剂为可回收乙醇，比传统盐析方法节约能源；3.本发明提取方法中沉淀分离容易，加入冰乙醇后抽提物以胶状聚合物的形式析出，工业操作简单。
图1为本发明实施例提供的标准曲线图，其为以尿激酶活力(UI)为横坐标，溶纤圈面积的对数值为纵坐标，制作标准曲线。图2为本发明实施例提供的所得溶栓物质活性示意图。
具体实施例方式实施例1纳豆为原料(购自沈阳科健生物技术有限公司)，以无菌水1:1质量6°C浸提6小时，过滤浸提物得浸提液。将4°C的无水乙醇加入到浸提液中至乙醇体积浓度为70%。静置沉淀3小时后在4°C，以6000转/分钟，离心lOmin，将所得沉淀在真空条件下冻干(真空泵条件-50到-70°C，16-24h)，即为纳豆溶栓物质。实施例2在纳豆中加入无菌水1 :1质量6°C浸提8小时，过滤浸提物得浸提液。将6°C的无水乙醇加入到浸提液中至乙醇体积浓度为80%。静置沉淀4小时后在10°C，以10000转/分钟，离心8min，将所得沉淀在真空条件下冻干(真空泵条件-50到_70°C，16_24h)，即为纳豆溶栓物质。实施例3在纳豆中加入无菌水2 I质量10°C浸提5小时，过滤浸提物得浸提液。将6°C的无水乙醇加入到浸提液中至乙醇体积浓度为80%。静置沉淀5小时后在8°C，以8000转/分钟，离心9min，将所得沉淀在真空条件下冻干(真空泵条件-50到_70°C，16_24h)，即为纳豆溶栓物质。实施例4在纳豆中加入无菌水2 I质量10°C浸提8小时，过滤浸提物得浸提液。将4°C的无水乙醇加入到浸提液中至乙醇体积浓度为70%。静置沉淀5小时后在9°C，以9000转/分钟，离心8min，将所得沉淀在真空条件下冻干(真空泵条件-50到_70°C，16_24h)，即为纳豆溶栓物质。实施例5在纳豆中加入无菌水3 I质量4°C浸提5小时，过滤浸提物得浸提液。将10°C的无水乙醇加入到浸提液中至乙醇体积浓度为80%。静置沉淀4小时后在6°C，以7000转/分钟，离心9min，将所得沉淀在真空条件下冻干(真空泵条件-50到_70°C，16_24h)，即为纳豆溶栓物质。实施例6在纳豆中加入无菌水3 I质量4°C浸提6小时，过滤浸提物得浸提液。将10°C的无水乙醇加入到浸提液中至乙醇体积浓度为70%。静置沉淀3小时后在4°C，以6000转/分钟，离心9min，将所得沉淀在真空条件下冻干(真空泵条件-50到_70°C，16_24h)，即为纳豆溶栓物质。测其溶栓活性。本实施例采用琼脂糖-纤维蛋白平板法测其溶栓活性大小，在同一纤维蛋白平白内，点不同浓度的尿激酶各20 μ L，37°C培养16小时，测量溶纤圈直径。以尿激酶活力(UI)为横坐标，溶纤圈面积的对数值为纵坐标，制作标准曲线(参见图1)。将上述各实施例所得纳豆溶栓物质，点于同一纤维蛋白平板上，37°C培养16小时，测溶圈大小，由标准曲线计算出样品的活性相对于尿激酶的单位数，以单位IU/mg表示溶栓活力(参见图2)。
权利要求
1.一种从固态发酵納豆中分离溶栓物质的方法，其特征在于将原料納豆用无菌水于在4°C -10°C下浸提5-8小吋，而后过滤收集浸提液，将4°C -1O0C的无水こ醇加入到浸提液中静置沉淀3-5小时后离心，沉淀即为得到的納豆溶栓物质。
2.按权利要求1所述的从固态发酵納豆中分离溶栓物质的方法，其特征在于所述浸提时纳豆与无菌水的质量比为1: 1-3。
3.按权利要求1所述的从固态发酵納豆中分离溶栓物质的方法，其特征在于所述无水こ醇加入到浸提液中至こ醇终浓度体积比为70-80%，静置沉淀3-5小吋。
4.按权利要求1所述的从固态发酵納豆中分离溶栓物质的方法，其特征在于所述无水こ醇加入到浸提液中静置沉淀后在4-10°C，以6000-10000转/分钟，离心8-10min，将所得沉淀冻干，即为纳豆溶栓物质。
全文摘要
本发明涉及溶栓物质的提取，具体的说是一种从固态发酵纳豆中分离溶栓物质的方法。将原料纳豆用无菌水于在4℃-10℃下浸提5-8小时，而后过滤收集浸提液，将4℃-10℃的无水乙醇加入到浸提液中静置沉淀3-5小时后离心，沉淀即为得到的纳豆溶栓物质。本发明通过浸提和乙醇沉淀达到从固态发酵纳豆中分离溶栓物质目的。本发明具有提取活性高、得率高、成本低和环保的优点。
文档编号A23L1/29GK103039966SQ20111031314
公开日2013年4月17日 申请日期2011年10月14日 优先权日2011年10月14日
发明者付煊赫, 刘晓洁, 苏振成, 张惠文 申请人:沈阳科健生物技术有限公司