专利名称：保存稳定性优异的含有s-腺苷-l-蛋氨酸的干酵母组合物及其制造方法
技术领域：
本发明涉及高浓度地含有水溶性的作为生理活性物质有用的S-腺苷-L-蛋氨酸(以下，记为SAMe)、保存稳定性优异的干酵母组合物及其制造方法。
背景技术：
SAMe在机体内广泛存在，是在核酸、神经传导物质、磷脂、激素、蛋白质等合成、代谢中作为各种利用转甲基酶的甲基反应的甲基供给体而扮演重要角色的水溶性生理活性物质。SAMe在人体几乎所有细胞中可见，作为各种生物化学中的共同因子发挥作用，通过甲基转移、硫基转移和氨基丙基转移的3个代谢路线被代谢。例如，是软骨維持和脑内物质的生物合成不可缺少的物质。根据近年的SAMe的功能研究，也报告了对脂肪肝、高脂血症、动 脉硬化症、失眠症、酒精性肝炎、老年痴呆症等的治疗效果。这样，SAMe是重要的生理活性物质，在欧美各国作为抑郁症、肝脏疾病和关节炎等的治疗药或健康食品被广泛利用。因此，強烈希望廉价、简便地制造、提供SAMe。目前，作为SAMe的制造方法，已知有使用含有作为前体物质的L-蛋氨酸的培养基进行发酵生产的方法；使用从酵母等微生物分离精制得到的SAMe合成酶(蛋氨酸腺苷基转移酶)、以5'-三磷酸腺苷(ATP)和L-蛋氨酸作为基质、酶合成SAMe的方法，和利用合成法的方法等。关于酶合成法，是使用从酵母等微生物分离精制得到的SAMe合成酶(蛋氨酸腺苷基转移酶)，以5'-三磷酸腺苷(ATP)和L-蛋氨酸作为基质，酶合成SAMe的方法，与发酵法相比，虽然该方法有SAMe的积蓄量多、不需要从菌体提取的SAMe操作等的优点，但是有酶的制备繁琐、得到的酶活性微弱、必须除去ATP分解酶等妨碍物质的问题，还有基质ATP极其高价的各种问题，未必能够成为实用的方法。另外，由于近年的基因工程的发展，通过使用克隆得到的SAMe合成酶基因，该酶的制备变得更加简便，虽然酶制备的问题得到解決，但依然必须将高价的ATP作为基质使用等其它实用上的问题还未被解決。另外，由于SAMe热不稳定，有即使在常温下也容易被分解的性质，因此，在作为医药品、健康食品使用时成为大的障碍。作为其对策，进行了以保存稳定性提高为目的的多种尝试。例如，一般有将以上述制造方法得到的SAMe组合物通过色谱法等精制后，制成和硫酸、对甲苯磺酸的盐或和丁烷ニ磺酸的盐，实现使SAMe稳定化的方法(例如，參照专利文献O ;或者，在精制得到的SAMe中进行添加物处理，使SAMe形成组合物而实现稳定化的方法(例如，參照专利文献I);由于需要许多工夫和费用，因此，作为治疗药和健康食品廉价地制造提供重要的SAMe是极其困难的。近年来，进行着关于使用将SAMe以更廉价、精制エ序少、具有能够简便地制造SAMe的生产能力且能够ロ服摄取的微生物的、含有SAMe的干燥微生物的研究(例如，參照专利文献2、非专利文献I)。但是，现状是，与精制得到的SAMe、SAMe组合物相比，含有SAMe的干燥微生物的保存稳定性低形成问题。现有技术文献专利文献
专利文献I :日本特开昭59-51213号公报专利文献2 国际公开第2008/090905号非专利文献非专利文献I Biochemica et Biophysica Acta, 1573, 105-108，(2002)非专利文献2 :J of Chromatography B, 863，94-100 (2008)
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的目的在于确立能够以低成本、简便地制造高浓度地含有SAMe的保存稳定性优异的干酵母组合物的エ艺。用于解决课题的方法为了解决上述课题，本发明的发明人深入地研究了经济地生产高浓度地含有SAMe、且能够以稳定的状态长时间保存的、性能优异的组合物的方法，结果发现，使用具有SAMe生产能力且能够ロ服摄取的酵母，在菌体内使SAMe高浓度地产生积蓄后，以离心分离等分离方法从培养液分离酵母菌体，在所得到的酵母菌体浓缩物中添加增粘剂后，使之干燥，由此，能够简便地收率良好地制造作为高浓度地含有作为目的的SAMe、且保存稳定性优异的组合物的干酵母，从而完成了本发明。另外，发现本发明的含有SAMe的干酵母的组合物，除了保存稳定性优异，机体吸收性也优异，从而完成了本发明。本发明提供( I)ー种含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，含有S-腺苷-L-蛋氨酸和增粘齐U，和(2) ー种含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物的制造方法,使用具有S-腺苷-L-蛋氨酸生产能力的酵母，在由酵母的菌体培养液得到的酵母菌体浓缩物中添加增粘剂后，进行干燥。发明的效果本发明的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，保存稳定性优异，并且机体吸收性也优异，因此，通过破碎制成粉末状，或根据需要加入其它生理活性成分、赋形剂等添加剂、压缩压片制成片剂状的组合物，或将粉体造粒为颗粒状、将造粒得到的颗粒灌装而进行胶囊化等，能够提供医药、健康食品用的、水溶性的、作为生理活性物质有用的组合物。另外，能够提供以低成本、简便地制造高浓度地含有S-腺苷-L-蛋氨酸的保存稳定性优异的组合物、机体吸收性也优异的含有SAMe的干酵母组合物的方法。
具体实施例方式本发明中所使用的酵母种类，只要是具有SAMe生产能力且能够ロ服摄取的酵母即可，例如，可以列举属于酵母菌属的酵母。其中，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)更适合。此外，在干酵母中，含有大量5'-核苷酸、游离氨基酸、具有抗氧化作用且有利于肝功能改善的谷胱甘肽、具有免疫カ增强作用、整理肠道作用的β -葡聚糖、食物纤维等有用成分，作为健康食品等被广泛利用。在培养上述酵母时所使用的碳源，只要是酵母能够同化的物质即可，没有特别限制，例如，可以列举葡萄糖、蔗糖、淀粉、废糖蜜等碳水化合物、こ醇等醇或こ酸等有机酸。只要是酵母能够同化的物质，氮源也没有特别限制，例如，可以列举氨、硝酸、尿素等无机氮化合物、或酵母提取物、麦芽提取物等含有有机氮的化合物。另外，作为无机盐类，可以使用磷酸、钾、钠、镁、钙、铁、锌、锰、钴、铜、钥等的盐。还能够添加參与SAMe的骨架结构的蛋氨酸、腺嘌呤、腺苷核糖核苷，进行培养。作为培养基，使用含有L-蛋氨酸的培养基(Shiozaki S.，et all, J.Biotechnology, 4, 345-354，(1986))。在作为培养基成分含有蔗糖、酵母提取物、L-蛋氨酸、尿素、甘氨酸、磷酸ニ氢钾、硫酸镁七水合物、生物素、氯化钙ニ水合物和微量金属盐的培养基中接种细菌，流动加入蔗糖和/或こ醇等碳源，并且进行好氧培养，能够得到含有SAM的菌体。培养温度和培养液的pH根据所使用的酵母种类而不同，作为培养温度，能够列举20 35°C的温度，作为培养液的pH，能够列举pH4 7的范围。 另外，在提高菌体内的SAMe含量中，优选好氧培养。培养槽只要能够进行通气且能够根据需要进行搅拌即可，例如，能够利用机械式搅拌培养槽、空气升降式培养槽和气泡塔型培养槽等。培养基的提供方法，一次性或者分别连续地或间歇地提供碳源、氮源、各种无机盐类、各种添加剂等。例如，蔗糖、こ醇等基质既可以作为与其它培养基成分的混合物向培养槽提供，另外，也可以与其它培养基成分分别独立地向培养槽提供。培养液的PH控制可以通过酸、碱溶液进行。作为碱，希望使用作为氮源所使用的氨、尿素、或非氮类碱，例如，使用氢氧化钠、氢氧化钾等，进行PH控制。作为酸，使用无机酸，例如，使用磷酸、硫酸、硝酸，或有机酸。此外，也能够使用无机盐类的磷酸盐、钾盐、钠盐、硝酸盐等进行pH控制。以这样的条件进行培养，在目标量的SAMe在酵母菌体中积蓄的阶段，取出培养液，分离酵母菌体。作为分离方法，只要是能够高效地进行菌体的分离和洗浄的方法即可，没有特别限制，作为适合的例子，可以列举使用对流型酵母离心分离机和分离膜的超滤装置。接着，在分离得到的酵母菌体的分离浓缩物中添加增粘剂。由此，干酵母中的SAMe保存稳定性和机体吸收性提高，另外，酵母的干燥エ序中的成品率也提高，另外，干酵母独特的臭气也得到掩蔽。作为所添加的增粘剂的量，以相对于含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物的质量比计，优选为O. I 70质量％的范围，更优选为O. 4 70质量％的范围，更加优选为O. 7 70质量％的范围。而且，特别优选为4. 5 70质量％的范围。如果低于O. I质量％，则干酵母中的SAMe保存稳定性变得不充分，如果超过70质量％，不仅浪费，而且干酵母中的SAMe保存稳定性显示用量依赖性地下降的倾向。在本发明中，增粘剂是指具有增粘作用、如凝胶化剂那样的能够在食品中添加的各种增粘剂等。具体而言，作为能够使用的增粘剂，可以列举下述(I) (7)，能够从中选择ー种以上使用。(I)选自黄原胶、结冷胶、凝胶多糖、海藻黄原胶、普鲁兰多糖和納豆菌胶中的来自微生物的增粘剂；(2)选自瓜尔胶、塔拉胶、刺槐豆胶、罗望子胶和车前子胶中的来自种子的增粘剂；(3)选自纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、淀粉和羧甲酸钠中的来自植物的增粘剂；(4)选自角叉菜胶、藻酸钠、藻酸和藻酸丙ニ醇酯中的来自海藻的增粘剂；(5)选自阿拉伯树胶、黄蓍胶、虫胶和阿拉伯半乳聚糖中的来自树脂的增粘剂；(6)选自壳聚糖和几丁质中的来自甲壳的增粘剂；和(7)选自果胶、甘露聚糖、透明质酸、软 骨素、琼脂、胶原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸钠中的增粘剂。其中，更优选(I)选自黄原胶、结冷胶、凝胶多糖、海藻黄原胶、普鲁兰多糖和納豆菌胶中的来自微生物的增粘剂；(2)选自瓜尔胶、塔拉胶、刺槐豆胶、罗望子胶和车前子胶中的来自种子的增粘剂；(5)选自阿拉伯树胶、黄蓍胶、虫胶和阿拉伯半乳聚糖中的来自树脂的增粘剂；(6)选自壳聚糖和几丁质中的来自甲壳的增粘剂；和(7)选自果胶、甘露聚糖、透明质酸、软骨素、琼脂、胶原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸钠中的增粘剂。还特别优选(I)选自黄原胶、结冷胶、凝胶多糖、海藻黄原胶、普鲁兰多糖和纳豆菌胶中的来自微生物的增粘剂，和(2)选自瓜尔胶、塔拉胶、刺槐豆胶、罗望子胶和车前子胶中的来自种子的增粘剂。在本发明中所使用的增粘剂，在食品、化妆品、医药品用途中被广泛使用，能够安全地使用。在这样操作进行增粘剂的添加处理后，对酵母菌体的浓缩物，通过利用喷雾干燥器的喷雾干燥法、冷冻干燥法等的干燥方法使水分蒸发，制成含有SAMe的干酵母组合物。作为干燥条件，在喷雾干燥法中，希望在入口温度210°C以下、出口温度110°C以下使之干燥。在冷冻干燥法中，希望在最終塔板温度30°C以下使之干燥。从保存稳定性的观点出发，希望本发明的含有SAMe组合物的水分含量为5. O质量％以下。接着，对该干酵母组合物进行破碎，制成粉状，或根据需要，在粉状的干酵母中加入其它生理活性成分、赋形剂等的添加剂后，压缩压片，制成片剂状的组合物，还能够进ー步包覆其表面。另外，也能够将粉体造粒为颗粒状、将粉体、造粒得到的颗粒灌装而进行胶囊化
坐寸ο实施例以下，利用实施例和比较例更具体地说明本发明，但本发明不受这些例子限定。实施例I 4( a )酵母菌体的培养根据如上所述的公知的培养法，在含有L-蛋氨酸的培养基(Shiozaki S.，etall, J. Biotechnology, 4，345-354 (1986))中接种属于酵母菌属的酿酒酵母IF02346，边以培养温度27 29°C好氧通气搅拌，边培养6日。其结果，得到18L菌体浓度3. 5wt%、SAMe含量205mg/g —干酵母的酵母菌体培养液。
(b)酵母菌体的收集用连续旋转型离心分离器(日立HIMAC CENTRIFUGE CR10B2)处理18L上述酵母菌体培养液，得到3. 4kg液状酵母菌体浓缩物，其中，菌浓度以干燥物換算，相当于18质量％。(c)向酵母菌体浓缩物添加增粘剂在上述3. 4kg酵母菌体浓缩物中，以相对于该酵母浓缩物中的SAMe的质量比为O. 02,0. 2,2. 2,11. I倍量地加入黄原胶，在室温搅拌混合30分钟，得到添加了黄原胶的酵母菌体浓缩物。(d)干酵母的制造在冷冻干燥器(日本真空技术株式会社生产)的冷冻干燥用不锈钢盘中流入添加了上述黄原胶的酵母菌体浓缩物，在-50°C冷冻干燥后，以最终塔板温度25°C的条件冷冻 干燥36小吋。通过进ー步对所得到的冷冻干酵母进行粉碎而得到粉末干酵母。在密闭玻璃容器中装入这样操作得到的粉末干酵母，在40°C、RH75%的加速试验条件下进行保存稳定性试验。在表I中表示在40°C、RH75%的加速保存稳定性试验的結果。此外，对于SAMe残留率，通过使用高氯酸的公知方法从含有SAMe的干酵母提取SAMe，通过使用液相色谱的比较定量法实施。对于保存后有无臭气，由5名參加者的感官检查求出。感官检查的评价方法为，5名參加者全部认为无异臭时记为5名中I 2名认为有异臭时记为“Λ”、5名中3名以上认为有异臭时记为“ X ”。本发明中的SAMe測定方法，使用以下条件的液相色谱。所使用的分析条件柱Nacalai(nacalai tesque) C0SM0SILC>4· 6X IOOmm洗脱液0· 2M KH2PO4水溶液/甲醇=95/5流速O.7mL/min,检测器UV (260nm)SAMe保持时间约150秒实施例5 8在酵母菌体浓缩物中使用凝胶多糖，与实施例I同样处理，得到粉末干酵母。在表I中表示所得到的粉末干酵母中的SAMe含量、质量、以及所得到的含有SAMe的干酵母在密闭玻璃容器中在40°C、RH75%的加速条件下的保存稳定性试验的结果、感官检查的結果。实施例9在酵母菌体浓缩物中，相对于该酵母浓缩物中的SAMe的质量比为O. 2倍量地加入瓜尔胶，除此以外，与实施例I同样地处理，得到粉末干酵母。在表I中表示所得到的粉末干酵母中的SAMe含量、质量、以及所得到的含有SAMe的干酵母在密闭玻璃容器中在40°C、RH75%的加速条件下的保存稳定性试验的结果、感官检查的結果。实施例10在酵母菌体浓缩物中，相对于该酵母浓缩物中的SAMe的质量比为O. 2倍量地加入罗望子胶，除此以外，与实施例I同样地处理，得到粉末干酵母。在表I中表示所得到的粉末干酵母中的SAMe含量、质量、以及所得到的含有SAMe的干酵母在密闭玻璃容器中在40°C、RH75%的加速条件下的保存稳定性试验的结果、感官检查的結果。实施例11在酵母菌体浓缩物中，相对于该酵母浓缩物中的SAMe的质量比为O. 2倍量地加入结冷胶，除此以外，与实施例I同样地处理，得到粉末干酵母。在表I中表示所得到的粉末干酵母中的SAMe含量、质量、以及所得到的含有SAMe干酵母在密闭玻璃容器中在40°C、RH75%的加速条件下的保存稳定性试验的结果、感官检查的結果。比较例I除了在酵母菌体浓缩物中不添加黄原胶以外，与实施例I同样处理，得到粉末干酵母。在表I中表示所得到的粉末干酵母中的SAMe含量、质量、以及所得到的含有SAMe的干酵母在密闭玻璃容器中在40°C、RH75%的加速条件下的保存 稳定性试验的结果、感官检查的結果。比较例2在酵母菌体浓缩物中，相对于该酵母浓缩物中的SAMe的质量比为2. 2倍量地加入海藻糖，除此以外，与实施例I同样地处理，得到粉末干酵母。在表I中表示所得到的粉末干酵母中的SAMe含量、质量、以及所得到的含有SAMe的干酵母在密闭玻璃容器中在40°C、RH75%的加速条件下的保存稳定性试验的结果、感官检查的結果。[表I]
权利要求
1.一种含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，其特征在于 含有S-腺苷-L-蛋氨酸和增粘剂。
2.如权利要求I所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，其特征在于 所述增粘剂是选自下述(I) (7)的任一项中的至少I种， (1)选自黄原胶、结冷胶、凝胶多糖、海藻黄原胶、普鲁兰多糖和纳豆菌胶中的来自微生物的增粘剂； (2)选自瓜尔胶、塔拉胶、刺槐豆胶、罗望子胶和车前子胶中的来自种子的增粘剂； (3)选自纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、淀粉和羧甲酸钠中的来自植物的增粘剂； (4)选自角叉菜胶、藻酸钠、藻酸和藻酸丙二醇酯中的来自海藻的增粘剂； (5)选自阿拉伯树胶、黄蓍胶、虫胶和阿拉伯半乳聚糖中的来自树脂的增粘剂； (6)选自壳聚糖和几丁质中的来自甲壳的增粘剂；和 (7)选自果胶、甘露聚糖、透明质酸、软骨素、琼脂、胶原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸钠中的增粘剂。
3.如权利要求2所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，其特征在于 所述增粘剂是选自下述的(I)、(2)和(5) (7)的任一项中的至少I种， (1)选自黄原胶、结冷胶、凝胶多糖、海藻黄原胶、普鲁兰多糖和纳豆菌胶中的来自微生物的增粘剂； (2)选自瓜尔胶、塔拉胶、刺槐豆胶、罗望子胶和车前子胶中的来自种子的增粘剂； (5)选自阿拉伯树胶、黄蓍胶、虫胶和阿拉伯半乳聚糖中的来自树脂的增粘剂； (6)选自壳聚糖和几丁质中的来自甲壳的增粘剂；和 (7)选自果胶、甘露聚糖、透明质酸、软骨素、琼脂、胶原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸钠中的增粘剂。
4.如权利要求I 3中任一项所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，其特征在于 相对于含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，含有所述增粘剂O. I 70重量％。
5.如权利要求I 4中任一项所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，其特征在于 干酵母为属于酵母菌属的酵母。
6.如权利要求5所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物，其特征在于 所述属于酵母菌属的酵母为酿酒酵母。
7.一种含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母组合物的制造方法，其特征在于 使用具有S-腺苷-L-蛋氨酸生产能力的酵母，在由酵母的菌体培养液得到的酵母菌体浓缩物中添加增粘剂后，进行干燥。
全文摘要
本发明提供一种含有S-腺苷-L-蛋氨酸和增粘剂的保存稳定性优异的干酵母组合物。通过在培养收集具有SAMe生产能力的酵母得到的酵母菌体浓缩物中添加增粘剂后进行干燥，能够简便且经济性地制造保存稳定性和机体吸收性优异的、高浓度地含有S-腺苷-L-蛋氨酸的干酵母，因此，能够在市场上提供高浓度地含有水溶性的作为生理活性物质有用的S-腺苷-L-蛋氨酸、保存稳定性和机体吸收性优异的干酵母组合物。
文档编号C12N1/16GK102858950SQ20118001781
公开日2013年1月2日 申请日期2011年4月5日 优先权日2010年4月7日
发明者高野健太郎, 莪山真與 申请人:三菱瓦斯化学株式会社