一种通过检测生物液体中miRNA来鉴定患早期肺癌的无症状高风险个体的方法
【专利摘要】一种从34种miRNA的组中选择至少5种血清miRNA的诊断和/或预后模型，所述miRNA在无症状高风险个体的群体中鉴定早期肺癌，即非小细胞肺癌（(NSCLC）具有80％准确性。所述模型还能区别良性和恶性损伤并对捕获疾病发作有足够的灵敏度。另外，所述模型还能诊断或确定诊断症状患者的肺癌，以及监控患有该肺癌的对象在外科手术和/或化疗和/或放疗治疗后的肺肿瘤状态。
【专利说明】—种通过检测生物液体中miRNA来鉴定患早期肺癌的无症
状高风险个体的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及诊断和预后肺癌的方法和途径。更具体地，本发明涉及检测无症状对象中早期肺癌的生物液体miRNA测试。
【背景技术】
[0002]肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC )是全球癌症死亡的首要元凶，主要由于缺乏有效的早期诊断工具。早期疾病(I期)就诊断出的患者预后相当好(5年后存活率为60-80%3)。不幸的是，所有NSCLC中只有20-25%被早期诊断4’5。烟草接触是肺癌的主要风险因素6。甚至在原吸烟者中，烟草相关的风险仍长期居高不下7。因此，早期检测NSCLC的有效工具，尤其在高风险个体中，极其需要。
[0003]低剂量螺旋计算机断层扫描(LD-CT)已在前瞻性观察试验中测试，并已证明是小结节(甚至〈5_)和无症状肺癌诊断(主要(67-85%)在I期^1°)的有效检测方法。对于每年LD-CT筛选是否降低晚期疾病(II1-1V期)诊断和肺癌死亡n_13存在争论，并且以下情况的可能性已增加=LD-CT筛选可能导致过度诊断和过度治疗生物无痛性癌症，所述癌症可能很少达到临床相关性或造成对象的健康风险14’15。然而，最近已确定LD-CT的有效性，其作为一种大型随机试验(国家肺筛选试验16)基于“目前积累数据对研究的主要问题提供了统计学上有说服力的答案”过早停止(http: //www.cancer, gov/newscenter/pressreleases/NLSTresultsRelease)。
[0004]如果早期诊断的确是降低肺癌死亡的有效方法，那么开发诊断性血液测试对执行有效人口筛选而言极其相关。特异性循环微小RNA (miRNA)的检测可用于该目的。实际上有证据支持该说法，即循环微小RNA对几乎每种恶性17_26和非恶性疾病27_31(包括肺癌32_34)而言有诊断潜力。
[0005]现有技术
[0006]一些现有技术公开了使用检测miRNA以诊断有症状癌症，也包括肺癌。然而，没有现有技术文献公开当对象仍然无症状时对早期疾病有作用的方法。
[0007]现有技术文献包括:
[0008]-Lu J 等，Nature, 2005 年 6 月 9 日；435 (7043): 834-8 指出癌症诊断中 miRNA 概况分析的可能性。
[0009]-Chen X，等，Cell Research Cell Res.2008 年 10 月；18 (10): 997-1006 得出血清miRNA可用作检测各种癌症和其它疾病的潜在生物标记物。
[0010]-Bishop Ja,等，Clinical Cancer Research, Clin Cancer Res.2010 年 I 月 15日；16(2):610-9描述了 miRNA方案是高度可靠的NSCLC分类策略。该测试基于来自活检/吸出物的RT-PCR并聚焦在hsa-miR-205。
[0011] -Gilad S，等，Plos One PLoS One.2008 年 9 月 5 日；3 (9): e3148 指出在血清和其它体液中miRNA测定的医学相关可能性。[0012]-Shen等，Lab Invest.2010年11月29日鉴定了肺NSCLC患者血浆中12个表达变化的miRNA。.[0013]-Keller 等，BMC Cancer, 2009 年 10 月 6 日；9:353 检测了在肺癌对象(NSCLC)的血细胞中下调的27种miRNA;通过使用其中24种miRNA，其能区分肿瘤患者和对照的血细胞样品，但没有公开无症状个体的早期诊断方法。
[0014]-Yu S-L 等，Cancer Cell2008 年 I 月;13(1):48-57 研究了 miRNA 表法概况是否能预测NSCLC患者的临床结果。使用实时RT-PCR，其获得微小RNA在112名NSCLC患者中的表达，其中分为训练组和测试组。使用Cox回归和风险评分分析，其鉴定一个5种miRNA标识以用于预测训练组中NSCLC的治疗结果。通过测试组和独立组验证该微小RNA标识。该方法涉及预后标识，但没有用于诊断的数据。
[0015]-Lebanony 等，J Clin Oncol.2009 年 4 月 20 日；27 (12): 2030-7 使用高通量微阵列来检测122名腺癌和鳞状NSCLC样品中微小RNA的表达水平。其鉴定hsa-miR-205是鳞状细胞肺癌的高度特异性标记物。
[0016]-Boeri 等，Proc Natl Acad Sci U S A.2011 年 3 月 I 日;108 (9): 3713—8.电子Hi版于2011年2月7日描述了在高风险个体(重度吸烟者)中通过使用血浆样品中循环miRNA来诊断肺癌的方法。作者鉴定了循环微小RNA的四种标识以用于诊断和预后目的。所述四种不同的miRNA标识是:1.风险标识-鉴定对象所处发展肺癌的风险的miRNA标识。2.诊断标识-鉴定患者患有肺癌的miRNA标识。3.侵袭性疾病的风险标识一发展侵袭性肺癌风险的miRNA标识。4.存在侵袭性疾病的标识-鉴定患者患有侵袭性疾病的miRNA标识。以上标识中无一预期本发明的标识核心方法。此外，Boeri等没有表明“真正的”病例-对照研究，所述研究对精确限定所提出标识的准确度、灵敏度和特异性而言是必需的。实际上，使用非肺癌患者的血浆 池来替代对照个体，因此防止计算所述标识的“真正”特异性(即对照对象数预测为总数的负数)。
[0017]-CN101638656公开了与非小细胞肺癌(SCLC)预后相关的血清/血浆miRNA标记物及其应用。
[0018]-CN101307361公开了通过Solexa技术鉴定肺癌患者血清中miRNA的方法。
[0019]-CN101608232公开制备新型用于筛选和鉴定低丰度小RNA表达概况的新型小RNA芯片及其应用。
[0020]-US2007/050146 公开了微小 RNA 及其应用。
[0021]-US2007/299030公开了用于人乳腺癌和肺癌的微小RNA生物标记物。
[0022]-US2008/182237公开了与肺癌相关的核酸。
[0023]-US2010/010072公开了用于人乳腺癌和肺癌的微小RNA生物标记物。
[0024]-US2010/178653公开了癌症分类的基因表达标识。
[0025]-W02007/081720公开了用于肺癌诊断、预后和治疗的基于微小RNA的方法和组合物。在肺癌细胞而非生物液体中测定微小RNA水平。
[0026]-W02009/153775公开了区分肺癌特异类型的方法。
[0027]-W02009/052386公开了微小RNA在肺疾病中的差异性表达及其应用。
[0028]-W02009/070653公开了肺癌患者外周血中的一些微小RNA表达概况分析和靶向。
[0029]-W02009/066291公开了用于测定肿瘤来源的微小RNA表达标识。[0030]-W02010/054233公开了外周血单核细胞中的生物标记物以用于在慢性阻塞性肺病或非小细胞肺癌患者对象中诊断或检测肺癌。
[0031]-W02010/073248公开了用于分类肿瘤样品组织来源的基因表达标识。
[0032]-W02010/109017公开了将miR661用作乳腺癌的诊断工具。
[0033]-W02010/139810公开了通过血细胞中的miRNA表达概况确定肺癌诊断的方法。事实上，所述方法已在以下患者的血细胞中测试:17名NSCLC患者(p.33，1.30-33),7名鳞状细胞癌、7名腺癌患者和3名其它癌亚型患者，或非癌症个体(19名个体)。微小RNA从血细胞中提取。通过商业化微阵列芯片(Geniom智人miRNA生物芯片，Geniom Biochip miRNAhomo sapiens)筛选。该文献报道了 866例miRNA的表达概况分析并通过t_检验选择了27种显著性miRNA (?值〈0.05)(图10b)。然后作者使用其它统计方法(与本发明分析不具可比性)来进一步支持其发现。[0034]-W02011/014697 公开了通过miRNA表达概况，即 miR-328 和 miR330_3p 预测 NSCLC患者中脑转移发展的方法和试剂盒。
[0035]-W02011/025919公开了在接触致癌物(苯并[a]芘)的小鼠系统中通过检测至少一种选自血清样品中miRNA组的miRNA来表征肺癌的方法。微小RNA提取自血浆样品并通过实时PCR进行筛选。然后作者分析8名肺癌患者和8名正常个体(对照)中miRNA的表达概况。然后其扩增miRNA筛选至180种miRNA并在16名肺癌(NSCLC)患者和12名具有良性肺病症的患者，之后在患者和正常个体的扩增组中，对其分析。
[0036]以上标识中无一预测本发明的标识核心方法或无病症对象中高水平的准确度和灵敏度。
【发明内容】
[0037]虽然早期诊断可通过在高风险个体中进行基于断层扫描的群筛选成功实现，但仍需要更简单的方法来用于有效的癌症预防方案。
[0038]作者研究一种生物液体(即血清)中的肺癌诊断性微小RNA (miRNA)标识，能在无症状高风险个体群中鉴定患有非常早期的肺肿瘤的对象，尤其是非小细胞肺癌(NSCLC)t5X症状高风险个体是无任何肺病症状的个体，但属于高风险组，即相比参照群体通常具有更高可能性出现不利结果的一组群体。大约25%的确诊肺癌是无症状的且只在胸部造影时意外检测至丨J (Lung Carcinoma: Tumors of the Lungs:Merck Manual Professional (〈〈月市癌:肺肿瘤:默克专业手册)》，Waun Ki Hong, MD; Anne S.Tsao，MD.2008.默克夏普&汤米研究实验室(Merck Sharp&Dohme Corp))。因此极其需要改善诊断方法以至能早期甚至在无症状期检测肺癌以保证早期的治疗干预。
[0039]在无症状个体血清中通过实时PCR分析循环微小RNA(miRNA)，所述个体纳入2004年开始并仍在进行的大型前瞻性早期检测试验(COSMOS研究)，其中通过每年低剂量螺旋计算机断层扫描(LD-CT)筛选5203名高风险个体(重度吸烟者，年龄超过50岁)以检测肺癌。从该人群出发对达到所述结果密切相关。
[0040]在两个独立的血清组中检验结果:1)来自相同试验的无症状对象，以及2)来自症状患者的非相关血清集合。
[0041]作者建立一种至少5种血清miRNA的诊断模型(4个已鉴定miRNA和一个从30个其他鉴定的miRNA的组中选择的miRNA)，所述模型在无症状高风险个体的群体中鉴定患有早期肺癌的对象，即NSCLC，准确率约为80%。所述标识还能区分良性和恶性损伤，灵敏度足够捕获疾病发作、诊断或确定诊断症状患者的肺癌，以及监控肺癌对象在外科手术和/或化疗和/或放疗治疗后的响应(即肺肿瘤状态)。
[0042]关于现有技术文件W02010/139810，5个miRNA中只发现I个(即miR_15a)在对照比较分析中具有相同的调节趋势(即下调)，该分析由本发明作者在症状对象中开始实施。该结果还显示通过实施在症状对象中开始的比较分析(即t检验P值〈0.05 ;未配对t检验，双尾)，如W02010/139810中所述，我们鉴定了一系列只与我们34个原始miRNA标识具有56%相似度的被调控的miRNA (19个miRNA)。另外，这些19个miRNA中只有I个由W02010/139810 公开在图 10 中。
[0043]因此本发明的目的是诊断无症状肺肿瘤对象中的肺肿瘤，或区分对象中良性和恶性肺结节，或对象中的肺肿瘤预后的方法，包括以下步骤:
[0044]a)检测所述对象生物液体样品中包含在下列34种miRNA中的至少5种miRNA:hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5 p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID No
?24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQID N0.26) ; hsa-miR-374a (MIMAT0000727, SEQ ID N0.27) ; hsa-miR-376a (MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174，SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(ΜΙΜΑΤ0003230，SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(ΜΙΜΑΤ0000096，SEQ ID N0.34);且
[0045]b)相对合适对照比较所述miRNA量，其中所述比较允许诊断或预后肺肿瘤，或区分良性和恶性肺结节。
[0046]在一个优选实施方式中，所述至少5个miRNA是:
[0047]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
[0048]且一个miRNA包含在下组中:
[0049]hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID No.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ IDN0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SBQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086,SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244,SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752,SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(MIMAT0000727，SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0050]优选的所述至少5个miRNA是:
[0051]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);或
[0052]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-223 (MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);或
[0053]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2)。
[0054]在另一优选的实施方式中所述至少5个miRNA是:hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22) ;hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27) ;hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ IDN0.2);
[0055]且一个miRNA包含在下组中:
[0056]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ IDN0.7);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759,SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(ΜΙΜΑΤ0000440，SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(ΜΙΜΑΤ0000280，SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(ΜΙΜΑΤ0000083，SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086，SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090，SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0057]优选的所述至少5个miRNA是:
[0058]hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQID N0.2);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);或
[0059]hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3)。
[0060]在另一个优选的实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少10个miRNA，其中所述至少10个miRNA是:
[0061]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
[0062]且其它6个miRNA包含在下组中:
[0063]hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ IDN0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086，SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244,SEQ ID N0.22) ; hs￡rmiR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752，SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(ΜΙΜΑΤ0000727，SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98 (MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0064]优选的所述至少10个miRNA是:
[0065]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQID N0.8);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQID N0.18);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-486-5p(MIMATOO02177，SEQ ID N0.31)。
[0066]在本发明另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少10个miRNA，其中所述至少10个miRNA是:
[0067]hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQID N0.2);
[0068]且其它6个miRNA包含在下组中:
[0069]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22 (MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280,SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083,SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085，SEQ ID N0.19);hs￡rmiR-29a(MIMAT0000086，SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090,SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(ΜΙΜΑΤ0000760，SEQ ID N0.25); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-376a(MIMAT0000729，SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0070]在本发明的另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少15个miRNA，其中所述15个miRNA是:
[0071]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
[0072]且其它11个miRNA包含在下组中:
[0073]hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID No
?3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ IDN0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086，SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244，SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752,SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0074]优选的所述至少15个miRNA是:
[0075]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa_let_7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ IDN0.8) ;hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQID N0.13);hsa-miR-2 6b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQID N0.20);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-486-5p(MIMATOO02177，SEQ ID N0.31);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33)?
[0076]在本发明的另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少15个miRNA，其中所述15个miRNA是:
[0077]hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQID N0.2);
[0078]且其它11个miRNA包含在下组中:
[0079]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID No
?3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191 (MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086，SEQ ID N0.20) ;hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090,SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760，SEQ ID N0.25);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-376a (ΜΙΜΑΤ0000729，SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0080]在本发明另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少20个miRNA，其中所述20个miRNA是:
[0081]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
[0082]且其它16个miRNA包含在下组中:[0083]hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5) ;hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250,SEQ ID N0.7) ;hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431,SEQ ID N0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433，SEQ ID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa_miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14) ;hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30)
;hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33)
;hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)?
[0084]优选的所述至少20个miRNA是:
[0085]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa_let_7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ IDN0.8);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ IDN0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815，SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30) ;hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177，SEQ ID N0.31);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(ΜΙΜΑΤ0000096，SEQ ID N0.34)。
[0086]在本发明另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少20个miRNA，其中所述20个miRNA是:
[0087]hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQID N0.2);
[0088]且其它16个miRNA包含在下组中:
[0089]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086,SEQ ID N0.20) ; hsa-miR-30b (MIMAT0000420, SEQ ID N0.21) ; hsa^iiiR-32 (MIMAT0000090,SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760，SEQ ID N0.25);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-376a(MIMAT0000729，SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33) ;hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0090]在本发明另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少25个miRNA，其中所述25个miRNA是:
[0091]hsa-let-7a( MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa_miR-133b (MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
[0092]且其它21个miRNA包含在下组中:
[0093]hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ IDN0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22 (MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086,SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244,SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752,SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760，SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(ΜΙΜΑΤ0000727，SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-566 (MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0094]优选的所述至少25个miRNA是:
[0095]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa_let_7b(MIMAT0000063, SEQ ID Nο.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQID N0.8);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086,SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753，SEQ ID N0.26);hsa-miR-374a(MIMAT0000727,SEQ D N0.27);hsa-miR-432-staR (MIMAT0002815，SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486_5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa_miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0096]在本发明另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少25个miRNA，其中所述25个miRNA是:
[0097]hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQID N0.2);
[0098]且其它21个miRNA包含在下组中:
[0099]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMVT0000086，SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090，SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(ΜΙΜΑΤ0000760，SEQ ID N0.25);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-376a(MIMAT0000729，SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0100]在本发明另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少30个miRNA，其中所述30个miRNA是:[0101]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ IDN0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
[0102]且其它26个miRNA包含在下组中:
[0103]hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3) ;hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445,SEQ ID N0.5) ;hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7) ;hsa-miR-140-5p (MIMAT0000431,SEQ ID N0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433，SEQ ID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMATOO00759，SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30) ;hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0104]优选的所述至少30个miRNA是:
[0105]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4)
;hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5) ;hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ IDN0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17) ;hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ IDN0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ IDN0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-342_3p(MIMAT0000753,SEQID N0.26);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174，SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMATOO03230，SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMATOOO0096，SEQ ID N0.34)。
[0106]在本发明另一个实施方式中，检测步骤a)包括检测来自所述对象的生物液体样品中至少30个miRNA，其中所述30个miRNA是:[0107]hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQID N0.2);
[0108]且其它26个miRNA包含在下组中:
[0109]hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7) ;hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440,SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086,SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090,SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760，SEQ ID N0.25);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ IDN0.26);hsa-miR-376a(MIMATOO00729，SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484 (MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
[0110]在本发明方法的一个【具体实施方式】中，检测步骤a)包括检测上列34个miRNA中包含的所有miRNA。
[0111] 在一个优选实施方式中，生物液体样品包含在下组中:血液、血清、血浆、尿液、唾液、黏液、眼泪、羊水、乳汁、痰液、脑脊液、腹膜液、胸膜液和精液，或其部分。从所述对象中提取生物液体样品后，也可将其储存、冷冻、冻干、分馏等。
[0112]在一个优选实施方式中，肺肿瘤是非小细胞癌(NSCLC)。
[0113]在一个优选实施方式中，其中通过用引物和/或探针杂交来实施所述miRNA检测，其中每个引物和/或探针对其中一个miRNA序列具有特异性和选择性。任何其它合适的核酸杂交和检测方法都在本发明的范围中，如微阵列或测序。
[0114]在本发明一个优选实施方式中，合适对照包括与健康个体(即没有肺肿瘤的个体)相同的miRNA。
[0115]在一个优选实施方式中，本发明的方法包括以下步骤:用至少一种存在于相同生物液体样品中的非相关miRNA，和/或用至少一种外源性加标在所述样品中的非相关miRNA,归一化所述miRNA量。
[0116]合成微小RNA加标可用于检测所述方法方案中总微小RNA的回收。加标微小RNA是优选选自非人微小RNA (即完全与人不同源的微小RNA)，也与技术平台相关。
[0117]在一个优选实施方式中，至少I种非相关miRNA属于下组:miR_197，SEQID N0.35;miR-19b, SEQ ID N0.36;miR-24, SEQ ID N0.37;miR-146a, SEQ IDN0.38;miR-15b, SEQ ID N0.39;miR-19a, SEQ ID N0.40..更优选地，所述非相关 miRNA 为miR-197, SEQ ID N0.35;miR-19b, SEQ ID N0.36;miR-24, SEQ ID N0.37;miR-146a, SEQ IDN0.38;miR-15b, SEQ ID N0.39;miR-19a, SEQ ID N0.40。
[0118] 在一个优选实施方式中，本发明的方法包括以下步骤:用存在于或加至相同生物液体样品中的非相关miRNA量的中值均一化5-34个核心miRNA量。
[0119]本发明的另一方面涉及监控患有所述肺肿瘤的对象在外科手术和/或化疗和/或放疗治疗后肺癌状态的方法，包括跟进5-34个核心miRNA的调节的步骤。
[0120]本发明的另一方面涉及实施如上所述的方法的试剂盒，包括用于每个待检测miRNA的特异性引物和/或探针。
[0121]本发明的另一方面涉及实施如上所述的方法的微阵列或聚合酶链反应(PCR)板，包括用于每个待检测miRNA的特异性引物和/或探针。
[0122]发明的优点
[0123]本测试可在无症状高风险个体中鉴定早期肺肿瘤(即NSCLC)对象。所述测试表现了临床情况中所需的几个特性:
[0124]I)其可在低量的生物液体(即血清，0.1-1.0ml或更多)中实施，无需任何预扩增步骤；
[0125]2)相比现行的筛选方法，其便宜、简便得多且更利于立即操作(特别是从患者利益和顺应度的角度来看);
[0126]3)其准确地指出代表无症状个体(COSMOS测试组A)或症状个体(独立测试组B)对象的两个独立测试组中的疾病可能性；
[0127]4)其能区分良性和恶性损伤，以及捕获恶性疾病发作。
[0128]在对比基于LD-CT的筛选方案时，这是现有用于早期诊断最有效工具，本发明的测试表现80%的准确率，在训练和测试组间显著稳定。
[0129]所述测试发现其在临床上的主要应用是作为对高风险个体的“第一线筛选测试”，以鉴定应该进行进一步测试(包括LD-CT)的那些个体。可能证明该测试非常有助于用便宜且最小侵入性的方法在无需特定利益下的高风险群筛选。另外，也发现所述测试在临床上作为“第二线筛选测试”的应用以在LD-CT (或通过其它诊断工具)检测的肺结节情况下诊断癌症，和/或监控治疗干预后的疾病消退。
[0130]专家们应该认识到系统性并前瞻性地比较LD-CT结果和本发明血清测试结果的大型研究可能调整截止评分或建立多变量风险预测的截止范围。该变化在本发明的范围之间，前提是其不会改变核心“34个miRNA组中的至少5个miRNA”模型内容，提供其显著的稳定性。
[0131]发明详述
[0132]本发明描述了具体的非限制性实施例。
【专利附图】
【附图说明】
[0133]图1。研究设计。a.从两个独立集合中获得血清:i)来自COSMOS研究[59例非小细胞肺癌(NSCLC)、69例正常、33例结节、13例疾病发作前(BDO)的血清]，以及ii)来自非相关血清集合[36例NSCLC (来自症状患者)，15例肺错构瘤(PH)]。COSMOS NSCLC和正常血清分成训练组和测试组A (N，正常；T，肿瘤)。测试组B由来自非相关集合的NSCLC血清组成。其它组用于其它临床检验，如附图所示和正文所描述。b.筛选中采用总共365个miRNA试验。实施一系列测试来排除不满足准入最终分析的众多严格标准的那些miRNA。这导致选择147个miRNA以用于所述研究的所有分析。
[0134]图2.34-miRNA诊断模型。a.34-miRNA诊断模型的接受者操作特性(ROC)曲线(为了清楚显示，曲线显示在两个单独的板块中)。颜色代码和虚线根据“图例”。TR,训练组；TS-A，测试组A; TS-B,测试组B; TS-AC,只考虑AC (腺癌)的测试组A+B; TS-SCC (鳞状细胞癌)，只考虑SCC的测试组A+B; TS-1期，只考虑I期肿瘤的测试组A+B; TS-11-1V期，只考虑所有其它肿瘤期的测试组A+B。*，因为在测试组B中不存在“正常”血清，可使用来自测试组A的正常值来代替。AUC，曲线下区域。b.测试组中NSCLC患者(单独用于AC和SCC)的癌症风险，基于34-miRNA风险模型。虚线表示DLDA决定截止(3.235风险)。也显示了平均风险评分和P值(ANOVA)。c.森林图显示34-miRNA模型在测试组(所有，30例正常和70例肿瘤)中的预测强度，其通过获得的临床病理学参数分级。三角代表让步比；线代表相对95%置信区间(标称逻辑回归)。年龄(年数)和烟龄/年数(p/y)截止通过100名对象中的相对均值限定。所有分析(双尾菲希尔精确检验)中P值〈0.005。I期，I期肺肿瘤；I1-1V期，I1、III或IV期肺肿瘤。
[0135]图3.在各种临床兴趣症状下34-miRNA诊断模型的性能。a.良性结节(结节)对象、肺错构瘤(PH)，或正常个体(正常)中的风险指数。虚线表示DLDA决定截止(3.235)。还显示平均风险评分和P值(韦尔氏(Welch’s)t检验)。b.疾病发作前(BDO)和疾病发作后(肿瘤、AC和SCC分别用圆圈和方块表示)的对象的风险指数。还显示平均风险评分和P值(单尾配对t检验)。c.乳腺癌(BC，乳腺癌)和良性乳腺结节(结节)患者的风险指数。也显示平均风险评分和P值(韦尔氏t检验)。
[0136]图4.血清miRNA测试。方法。对于血清分离，血液室温放置30_60分钟以至结块，然后在3000rpm(1000-1300g)离心10分钟。移取所述血清并分成I ml等分试样置于2ml冷冻管中。试样储存在-80° C下。用Trizol-LS (英杰公司(Invitrogen))与mirVanamiRNA 分离试剂盒(mirVana miRNA Isolation Kit)(安碧公司(Ambion))提取血清 RNA(来自Iml血清，0.5ml用于测试组B血清)。简而言之，根据生产商的说明以3:1的体积比(3ml Trizol对ImL血清)将Trizol-LS加入到血清中。添加氯仿步骤和相分离后,用1.25体积纯乙醇与水相混合。然后将所得溶液加样到mirVana miRNA分离试剂盒(安碧公司)提供的柱中，然后用50yL水洗脱总RNA并储存在-80° C下。低密度阵列微小 RNA 标识板(TaqMan? Low Density Array microRNA Signature Panel) (vl.0)分析
miRNA水平，其含有365例人miRNA试验(应用生物系统公司(Applied Biosystems))。简而言之，使用 TaqMan MiRNA逆转录试剂盒(TaqMan MiRNA Riverse Transcription Kit)和TaqMan多复合物逆转录(TaqMan Multiplex RT)试验，人收集组逆转录RNA。8个多复合物逆转录反应中的各反应使用4.75 μ L已提取RNA (来自ImL血清的50 μ L)在20 μ L的终体积中进行。然后将各多复合物逆转录反应用水稀释至50 μ L，并与50 μ L的TaqMan2X通用PCR 主复合物(TaqMan2X Universal PCR master Mix)(无 AmpErase UNG)混合。将终溶液(100 μ L)加样到阵列上，使用生产商推荐的循环条件在应用生物系统7900ΗΤ (AppliedBiosystems7900HT)热循环仪上进行RTQ-PCILa.选择miRNA试验。筛选中初始采用总共365个miRNA试验。实施一系列测试来排除不满足准入最终分析的众多严格标准的那些miRNA。步骤I (序列检验)中，排除10个试验，因为其未能与最新miRNA数据库(miRbasel6.0)中的成熟miRNA序列精确配对。步骤2 (概况分析可行性，也参见板块B)中，排除161个试验，因为其不能在血清中可重复地检测到。步骤3 (质量检测1，也参见板块C，E)中，排除32个试验，因为其在检测中不显示线性特性。步骤4 (质量检测2，也参见板块D，F)中，排除15个试验，因为其可能受到术前治疗的影响。这些校验的最后，认为147个miRNA试验适用于我们的目的并实施正文所述的分析。b.步骤2详述。我们只选择在血清中可重复检测到的那些miRNA。为该目的，我们制备了 4例收集的血清样品(2例来自正常血清一 NI和N2收集池，以及2例来自肿瘤血清一 Tl和T2收集池；所有血清来自训练组),各含来自5位捐献者的等量血清。总RNA提取自各收集池并通过RTQ-PCR用于miRNA分析。数据矩阵显示4个收集池(纵向，收集池；横向，miRNA)中miRNA试验(基于Ct值截止)的检测。Ct值>36的试验视为未检测到，(黑色)，Ct值〈36的试验视为可检测(深灰色Ct〈30，淡灰色Ct30-36)。4个收集池中至少在2个中检测到的试验(194个试验)保留下来；其它(161个试验)都排除不进行进一步分析。c.步骤3详述。接下来，我们排除了不表现检测线性特性的那些miRNA试验。为该目的使用来自20名健康个体的血清收集池。作为内部对照，我们在稀释(100 μ L总RNA中IO7个拷贝)前向收集池加入已知量的合成miRNA (miR-34a,从未在血清中检测到)。已知量的miR-34a用于校正血清中miRNA拷贝的测定以及评估平台的灵敏度。然后对所述血清收集池进行线性两倍稀释，并通过RTQ-PCR用于miRNA分析。各miRNA的Ct值用对数标尺表示(对数量相对表达Ct)并且通过线性回归拟合数值。弃去显示决定系数(R2X0.85的试验，162个试验保留用于进一步分析。所述数据矩阵显示四种稀释中的miRNA试验表达概况。单独的miRNA试验示例显示在板块E中。d.步骤4详述。来自COSMOS研究的大部分血清在LD-CT扫描前采集。然而来自COSMOS研究的某些NSCLC患者案例中，得不到基线采集的血清；因此我们使用手术(通常在LD-CT扫描前几天或几周后发生)前采集的血清。另外，测试组B的血清都在手术前采集。手术前血清的所有案例中，对象在血清采集前实施诊断方法。因此，重要的是评估手术前偏向是否影响一些miRNA水平；换而言之，一些miRNA在血清中变动是否能作为术前诊断方法。为确定这个问题，我们通过一起分组配对的肿瘤样品制备了 4个血清收集池(5个对象/收集池)，所述样品在两个靠近的时间点(〈60天)取自相同的LD-CT检测NSCLC患者。在基线(LD-CT前，收集池b-Tl和收集池b-T2)和手术前(手术前，收集池前-Tl和前-T2)。通过从健康个体收集血清产生两个其它收集池,其一直来自COSMOS血清(收集池NI和N2)，并用作各种条件下计算微小RNA调控的参照。总RNA提取自各收集池并通过RTQ-PCR用于微小RNA分析。所述数据矩阵显示各微小RNA在基线(收集池b-T对N)和术前阶段(收集池前-T对收集池N)在两个不同实验(实验I (EXPl) ,NI相比b-Tl相比前-Tl;实验2 (EXP2)，N2相比b_T2相比前-T2)中的调节情况。共15个miRNA试验只在术前阶段可重复地调节，因此排除不进行进一步分析。示例显示在板块F中。e.步骤3中miRNA选择示例。f.步骤4中miRNA选择示例。[0137]图5.血清miRNA数据组。所有分析的血清中147个miRNA的表达概况数据矩阵。概况分析了总共253例血清(其来源示于图例中)。数据矩阵显示各miRNA在归一化前(a)和后(b)的Ct值。灰色柱表示各对象的类别。纵向，对象；横向，miRNA。[0138]图6.a显示在训练组中选择的血清管家(HK) miRNA (显示了试验ID、登录号、miRbasel6释放数据库中的ID以及成熟miRNA的登录号ID)。E，RTQ试验的有效性，表达为决定系数(R2)，并根据图4中的说明决定。也显示用于选择训练组中HK的参数:表达Ct(中值)(必须小于30方可纳入);用RTQ检测的样品百分数(％)(必须为100%方可纳入)，训练组中通过韦尔氏T检验的P值(P)(必须>0.10方可纳入)，以及训练组中的Ct标准差(SD)(必须〈0.90方可纳入)。b.显示板块a的相同血清管家(HK)miRNA的成熟序列,用试验ID和序列表编号表不。
[0139]图7.显示基于所选miRNA组合的不同诊断模型。a.34个核心miRNA用相对应用生物系统(Applied Biosystems)试验ID、基因符号(miRBASE释放16数据库)、前miRNA和成熟miRNA的登录号、序列表编号和成熟miRNA序列。b.通过选择不同核心miRNA模型重复板块a相同的34个miRNA的基因符号(miRBASE释放16数据库)(用叉标记)。
[0140]图8。34-miRNA诊断模型用于预测两个肺癌患者的风险，其所用血清样品在外科手术前(之前)和术后三个月(3个月后)采集。两条线代表分别代表两名患者。Y轴，用34-miRNA模型计算得到的风险指数。X轴，术前和术后采集的血清样品。
[0141]方法
[0142]对象选择标准
[0143]NSCLC患者和健康个体选自纳入COSMOS试验的连续5203个对象\所有对象是接触烟草超过20年烟龄，年龄超过50岁的吸烟者或前吸烟者(表1)。诊断时的肿瘤期根据美国癌症联合委员会(American Joint Committee on Cancer)指南确定。(http://www.cancerstaging.0rg/).从所有对象获取知情同意书。
[0144]表1.训练组和测试组的临床特性
[0145]
【权利要求】
1.一种诊断无症状对象中肺肿瘤，或区分对象中良性和恶性肺结节，或对 象中肺肿瘤预后的方法，包括以下步骤: a)在来自所述对象的生物液体样品中检测包含在下列34个miRNA中的至少5个miRNA:
hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);
hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);
hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);
hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);
hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10);
hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);
hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);
hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);
hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);
hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);
hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);
hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);
hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);
hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);
hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);
hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);
hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);
hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);
hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34); 以及b)将所述miRNA量与合适对照比较，其中所述比较可以诊断或预后肺肿瘤，或区分良性和恶性肺结节。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述至少5个miRNA是: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31); 且一个miRNA包含在下组: hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT 0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11); hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12); hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13); hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14); hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15); hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17); hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18); hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19); hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20); hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21); hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22); hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23); hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24); hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25); hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27); hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28); hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29); hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30); hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32); hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33); hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述至少5个miRNA是:hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);且一个miRNA包含在下组:hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MI MAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
4.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于，所述至少5个miRNA是:hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); 或者
hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); 或者
hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2)。
5.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述至少5个miRNA是: hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);
hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);
hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); 或者
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);
hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);
hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3)。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象的生物液体样品中检测至少10个miRNA，其中所述10个miRNA是:
hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31); 且其它6个miRNA包含在下组中: hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);
hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10);
hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);
hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);
hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);
hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);
hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);
hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);
hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);
hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);
hsa-miR-28-5p(MIMAT 0000085, SEQ ID N0.19);
hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);
hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);
hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);
hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);
hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);
hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述至少10个miRNA是: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);
hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);
hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31)?
8.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象的生物液体样品中检测至少10个miRNA，其中所述至少10个miRNA是:
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); 且其它6个miRNA包含在下组中: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11); hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12); hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13); hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14); hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15); hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17); hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18); hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19); hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20); hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21); hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23); hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24); hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28); hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29); hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30); hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31); hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32); hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33); hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象 的生物液体样品中检测至少15个miRNA，其中所述至少15个miRNA是: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);且其它11个miRNA包含在下组中:hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10);hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述至少15个miRNA是:hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);
hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);
hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);
hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33)?
11.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象 的生物液体样品中检测至少15个miRNA，其中所述至少15个miRNA是: hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8); hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22); hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27); hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); 且其它11个miRNA包含在下组中: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11); hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12); hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13); hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14); hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15); hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17); hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18); hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19); hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20); hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21); hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23); hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24); hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
12.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象 的生物液体样品中检测至少20个miRNA，其中所述至少20个miRNA是: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31); 且其它16个miRNA包含在下组中: hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11); hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12); hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13); hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14); hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15); hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17); hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18); hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19); hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20); hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21); hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22); hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23); hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24); hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25); hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27); hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28); hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述至少20个miRNA是: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);
hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);
hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);
hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);
hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);
hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);
hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);
hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);
hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
14.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象的生物液体样品中检测至少20个miRNA，其中所述至少20个miRNA是:
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);
hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); 且其它16个miRNA包含在下组中: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9);hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10);
hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);
hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);
hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);
hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);
hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);
hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);
hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);
hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);
hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);
hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);
hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);
hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);
hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);
hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
15.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象 的生物液体样品中检测 至少25个miRNA，其中所述至少25个miRNA是: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31); 且其它21个miRNA包含在下组中: hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);hsa-miR-376a(MI MAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述至少25个miRNA是:hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
17.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象 的生物液体样品中检测至少25个miRNA，其中所述至少25个miRNA是: hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8); hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22); hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27); hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); 且其它21个miRNA包含在下组中: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11); hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12); hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13); hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14); hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15); hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17); hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18); hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19); hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20); hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21); hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23); hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24); hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
18.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象 的生物液体样品中检测至少30个miRNA，其中所述至少30个miRNA是: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31); 且其它26个miRNA包含在下组中: hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11); hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12); hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13); hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14); hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15); hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17); hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18); hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19); hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20); hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21); hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22); hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23); hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24); hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25); hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27); hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28); hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述至少30个miRNA是:hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2);
hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3);
hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4);
hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5);
hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6);
hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7);
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12);
hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13);
hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14);
hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15);
hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16);
hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17);
hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18);
hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19);
hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20);
hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);
hsa-miR-32(MIMAT0000090, SEQ ID N0.23);
hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24);
hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26);
hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28);
hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29);
hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30);
hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31);
hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32);
hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33);
hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
20.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括在来自所述对象的生物液体样品中检测至少30个miRNA，其中所述至少30个miRNA是:
hsa-miR-140-5p(MIMAT0000431, SEQ ID N0.8);
hsa-miR-30c(MIMAT0000244, SEQ ID N0.22);hsa-miR-374a(MIMAT0000727, SEQ ID N0.27);
hsa-let-7b(MIMAT0000063, SEQ ID N0.2); 且其它26个miRNA包含在下组中: hsa-let-7a(MIMAT0000062, SEQ ID N0.1); hsa-let-7d(MIMAT0000065, SEQ ID N0.3); hsa-miR-103(MIMAT0000101, SEQ ID N0.4); hsa-miR-126(MIMAT0000445, SEQ ID N0.5); hsa-miR-133b(MIMAT0000770, SEQ ID N0.6); hsa-miR-139-5p(MIMAT0000250, SEQ ID N0.7); hsa-miR-142-3p(MIMAT0000434, SEQ ID N0.9); hsa-miR-142-5p(MIMAT0000433, SEQ ID N0.10); hsa-miR-148a(MIMAT0000243, SEQ ID N0.11); hsa-miR-148b(MIMAT0000759, SEQ ID N0.12); hsa-miR-17-5p(MIMAT0000070, SEQ ID N0.13); hsa-miR-191(MIMAT0000440, SEQ ID N0.14); hsa-miR-22(MIMAT0000077, SEQ ID N0.15); hsa-miR-223(MIMAT0000280, SEQ ID N0.16); hsa-miR-26a(MIMAT0000082, SEQ ID N0.17); hsa-miR-26b(MIMAT0000083, SEQ ID N0.18); hsa-miR-28-5p(MIMAT0000085, SEQ ID N0.19); hsa-miR-29a(MIMAT0000086, SEQ ID N0.20); hsa-miR-30b(MIMAT0000420, SEQ ID N0.21); hsa-miR-32(MIMAT000009 0, SEQ ID N0.23); hsa-miR-328(MIMAT0000752, SEQ ID N0.24); hsa-miR-331-3p(MIMAT0000760, SEQ ID N0.25); hsa-miR-342-3p(MIMAT0000753, SEQ ID N0.26); hsa-miR-376a(MIMAT0000729, SEQ ID N0.28); hsa-miR-432-staR(MIMAT0002815, SEQ ID N0.29); hsa-miR-484(MIMAT0002174, SEQ ID N0.30); hsa-miR-486-5p(MIMAT0002177, SEQ ID N0.31); hsa-miR-566(MIMAT0003230, SEQ ID N0.32); hsa-miR-92a(MIMAT0000092, SEQ ID N0.33); hsa-miR-98(MIMAT0000096, SEQ ID N0.34)。
21.如上述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述检测步骤a)包括检测权利要求I所述34个miRNA的列表中包含的所有miRNA。
22.如上述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述生物液体样品包含在下组中:血液、血清、血浆、尿液、唾液、黏液、眼泪、羊水、乳汁、痰液、脑脊液、腹膜液、胸膜液和精液，或其部分。
23.如上述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述肺肿瘤是非小细胞肺癌(NSCLC)0
24.如上述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述miRNA的检测通过与引物和/或探针杂交的方法进行，每个所述引物和/或探针对miRNA中的一个序列具有特异性和选择性。
25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其特征在于，所述miRNA的检测通过微阵列或测序进行。
26.如上述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述合适对照包括来自健康个体的相同miRNA。
27.如上述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:用存在于相同生物液体样品中的至少一个非相关miRNA，和/或用外源加标于所述样品中的至少一个非相关miRNA对所述miRNA量归一化。
28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述至少一个非相关miRNA包括在下组中:miR-197, SEQ ID N0.35;miR-19b, SEQ ID N0.36;miR-24, SEQ ID N0.37;miR-146a, SEQID N0.38;miR-15b, SEQ ID N0.39;miR-19a, SEQ ID N0.40。
29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述至少一个非相关miRNA由下列 miRNA 组成:miR-197, SEQ ID N0.35;miR-19b, SEQ ID N0.36; miR-24, SEQ IDN0.37;miR-146a, SEQ ID N0.38;miR-15b, SEQ ID N0.39;miR-19a, SEQ ID N0.40。
30.如上述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:用存在于相同生物液体样品中的所有miRNA量中值对如权利要求1-21所述的miRNA量归一化。
31.一种监控所述肺肿瘤对象在外科手术和/或化疗和/或放疗治疗后肺肿瘤状态的方法，所述方法包括跟进如上述任一项权利要求所述miRNA的调控的步骤。
32.—种实施上述任一项权利要求所述方法的试剂盒，所述试剂盒包括对各待检测miRNA特异性的引物和/或探针。
33.一种为实施上述任一项权利要求所述方法基于微阵列或聚合酶链反应(PCR)或测序的板，所述板包含对各待检测miRNA特异性的探针。
【文档编号】C12Q1/68GK103958695SQ201180063543
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2011年12月22日 优先权日:2010年12月30日
【发明者】F·比安基, F·尼卡西奥, M·J·L·N·马尔奇, P·迪费奥雷 申请人:意大利癌症研究基金会分子肿瘤学研究所(Ifom), 欧洲肿瘤研究所有限公司, 米兰大学