专利名称：一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物制剂领域，具体涉及到一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法。
背景技术：
光合细菌，是地球上最古老的具有原始光能合成体系的原核生物，光合细菌广泛分布于沼泽、池塘、湖泊、河流、水沟、海洋及土壤中，忍耐高温、高盐及低温、低盐的能力特别强，甚至在90°C高温的温泉中，在含30%盐分的盐湖里，在深达2000米的深海里，在南极冰封的海岸上，都能找到光合细菌的踪迹。光合细菌的应用性研究和生产性研究已有三四十年的历史。日本研究得较早，20世纪60年代，日本科学家观测了高浓度的粪便污水自然放置时菌数的变化，首先揭示了自然界的有机污水是通过微生物的生态学演替而被净化的。经过进一步的研究，又发现了光合细菌的菌体对家禽、家畜及鱼、虾、蟹、贝的幼体具有明显的促进生长和提高成活率的作用，从而为光合细菌菌体的综合利用开拓了新的领域。我国对光合细菌的研究起步较晚，最初仅限于菌种的分离和用于高浓度污水处理，后来许多专业人员又进行了其他方面的应用研究，取得了大量的成果。1987年上海水产大学张道南等人将其应用到虾类育苗上，结果试验组较对照组成活率提高了 19.3%，变态率提高了 18.5%。现在，光合细菌作为一种具有特殊营养、促生长、抗病因子和高效率净化养殖污水及对环境和水产动物无毒无害的特殊细菌而受到了人们的普遍重视与喜爱。因此，它在水产养殖、畜禽养殖及水处理有关的领域中被广泛应用。目前，市场上的光合细菌产品繁多，而这些光合细菌产品中，生产技术工艺更是呈多样化，申请号为0213543 5.9的“光合细菌制剂的制备方法”，根据该发明所述的工艺中，在光合细菌培养期间的80 100个小时内，每间隔25分钟需要搅拌6分钟，如果这些工作由人工来完成，是很难做到。申请号为03135857.8的“光合细菌高效制备方法”，该发明的实施过程中培养基是要经过高温高压灭菌，光合细菌的培养过程也需要专用发酵罐来完成，造价昂贵的专用设备投入及生产中大量耗能就明显的增加了生产成本。申请号为200410048678.3的“高浓度光合细菌制剂的制备方法”，该发明所述的工艺中接种是开放式，这就增加了杂菌感染的几率；接种量高达10 20%，菌种投入成本过高；另外，该发明在培养过程中的72 120小时内，每隔5 8小时需要摇匀一次，这样的工作让人工来实现也不现实。申请号为200710011997.0的“一种富集光合细菌的培养基”，该发明在实施过程中培养基需要经过高温高压灭菌，也就需要造价昂贵的专用设备投入及生产中大量耗能。申请号为200810137445.9的“一种光合细菌的培养方法”，根据该发明所述的工艺中，光合细菌的培养过程需要充氧，然而在充氧的过程中如果空气流通管道没有过滤功能，充氧时也就会往培养液输送很多的杂菌，继而加大培养液的感染率而影响产品的质量，相对也影响产品的使用效果。申请号为201010618451.3的“一种光合细菌简易培养方法”，该发明需要专用蒸馏水，培养周期也需要7天之多。申请号为201010590805.8的“一种自然生态条件下的光合细菌发酵技术”，根据
该发明所述的工艺中，培养用水是经过消毒剂消毒的，但在接种时却没有在无菌环境下进行，同样也就会感染其他杂菌，继而影响产品的质量。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供全新的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法。具体包括:液体培养基的优化配制，液体培养基的消毒方法，培养容器的选用，菌种的选择，无菌环境下接种及接种量，通过旋转式摇床培养，培养时环境的温度、光照调控及培养周期。本发明的特点是液体培养基是经过优化制备的，液体培养基是用二氧化氯来做消毒剂，实现了液体培养基不需要经过高温、高压灭菌亦能达到全面灭菌的目的，不但减少了烦琐、复杂的工艺，还减少了大量耗能；选择高纯度光合细菌做种源；接种时在无菌环境下进行，有效的避免了杂菌感染；光合细菌培养时是放置在旋转式摇床上摇动培养，对光合细菌培养环境的温度、光照调控进行有效的调控来达到快速繁殖出成品的目的。本发明中所用的二氧化氯，按量添加到液体培养基质后，在30分钟内就完成整个杀菌消毒过程；再经过静放30个小时后，二氧化氯的杀菌消毒能力就会完全消失，这时接入光合细菌菌种，不会对菌种有任何的伤害。本发明在实施过程中的光合细菌培养时是放置在旋转式摇床上摇动培养，摇床不间断的摇动有效的帮助沉淀的光合细菌上浮而获得光照，继而保持菌细胞的良好生长。本发明是通过以下技术方案来实现的:1、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中包括:液体培养基的优化配制，液体培养基的消毒方法，培养容器的选用，菌种的选择，无菌环境下接种及接种量，通过旋转式摇床培养，培养时环境的温度、光照调控及培养周期。2、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中液体培养基的各种原料配比如下:(I)磷酸氢二钾:120克。
⑵硫酸镁:75克。⑶硫酸铵:500克。(4)酵母浸膏:500克。(5)蛋白胨:400 克。(6)硫酸亚铁:50克。(7)氯化钠:120 克。(8)氢氧化钠:适量。(9)水:100 公斤。3、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中液体培养基的配制及装瓶方法如下:
(I)液体培养基的配制:先用10公斤70 80°C的热水将上述原料进行稀释后，再混入90公斤余水并搅拌均匀，接着用氢氧化钠将液体培养基的PH调整至7 8后即得液
体培养基。(2)装瓶:将液体培养基分装至各培养容器，装入量为培养容器实际容量的2/3。4、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中培养容器选用透明、白色的玻璃瓶。5、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中液体培养基的消毒方法如下:(I)用含量为10%二氧化氯的稳定性二氧化氯粉剂来做消毒剂。(2)按I升液体培养基添加0.5 I克二氧化氯粉剂对液体培养基进行消毒，消毒同时用两个一次性口罩对培养容器进行封口。(3)液体培养基按量投放二氧化氯粉剂进行消毒后，需要静放36个小时以后才能接入囷种。6、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中是选择颜色鲜紫红，浓度为30亿/毫升的光合细菌成品做菌种。7、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中接种的方法及接种量如下:(I)接种环境消毒:把经过消毒的液体培养基及菌种移至接种室(箱)内，并对接种室(箱)进行消毒。(2)接种及接种量:在无菌环境下的接种室(箱)内按照接种浓度为4 5%接种于液体培养基里。8、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中光合细菌培养时是放置在旋转式摇床培养，培养时摇床旋转速度为100 120转/分钟。9、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中光合细菌培养时环境的温度、光照调控及培养周期如下:(1)培养温度:培养环境的温度控制在28 36°C。(2)光照强度:在摇床上方安置有日光灯，保持培养环境的光照强度为3000 4000勒克斯(LX)。(3)培养周期:光合细菌在温度是28 36°C、光照强度为3000 4000勒克斯(LX)的环境下培养3 4天，即繁殖成成品。与现有的技术相比，本发明既有如下优点:1、本发明所提出的方法工艺简单、易实施。2、本发明中所述的液体培养基是经过优化制备的，液体培养基营养配比全面、合理。3、本发明在实施过程中液体培养基是用二氧化氯来做消毒剂，实现了液体培养基不需要经过高温、高压灭菌亦能达到全面灭菌的目的，不但减少了烦琐、复杂的工艺，还减少了大量耗能；接种时是在无菌环境下进行，有效的避免了杂菌感染。4、本发明在实施过程中的光合细菌培养时是放置在旋转式摇床上摇动培养,摇床不间断的摇动有效的帮助沉淀的光合细菌上浮而获得光照，继而保持菌细胞的良好生长。5、本发明在实施过程中对光合细菌培养环境的温度、光照调控进行有效的调控来达到快速繁殖出成品的目的，培养时间缩短了 3 5天，提高生产效率。6、经过本发明培育出来的光合细菌都保持优质、高纯度，这样的光合细菌在以后的繁殖扩大生产时即可生产出质量稳定、活力强的生产用光合细菌，同时也保障生产用光合细菌的使用效果。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明的方法进一步说明。一种高浓度光合细菌快速繁殖的方法，具体实施方法如下:1、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中包括:液体培养基的优化配制，液体培养基的消毒方法，培养容器的选用，菌种的选择，无菌环境下接种及接种量，通过旋转式摇床培养，培养时环境的温度、光照调控及培养周期。2、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中液体培养基的各种原料配比如下:(I)磷酸氢二钾:120克。⑵硫酸镁:75克。⑶硫酸铵:500克。(4)酵母浸膏:500克。(5)蛋白胨:400 克。(6)硫酸亚铁:50克。(7)氯化钠:120 克。(8)氢氧化钠:适量。(9)水:100 公斤。3、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中液体培养基的配制及装瓶方法如下:(I)液体培养基的配制:先用10公斤70 80°C的热水将上述原料进行稀释后，再混入90公斤余水并搅拌均匀，接着用氢氧化钠将液体培养基的PH调整至7 8后即得液
体培养基。(2)装瓶:将液体培养基分装至各培养容器，装入量为培养容器实际容量的2/3。4、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中培养容器选用透明、白色的玻璃瓶。5、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中液体培养基的消毒方法如下:(I)用含量为10%二氧化氯的稳定性二氧化氯粉剂来做消毒剂。(2)按I升液体培养基添加0.5 I克二氧化氯粉剂对液体培养基进行消毒，消毒同时用两个一次性口罩对培养容器进行封口。(3)液体培养基按量投放二氧化氯粉剂进行消毒后，需要静放36个小时以后才能接入囷种。6、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中是选择颜色鲜紫红，浓度为30亿/毫升的光合细菌成品做菌种。
7、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中接种的方法及接种量如下:(I)接种环境消毒:把经过消毒的液体培养基及菌种移至接种室(箱)内，并对接种室(箱)进行消毒。(2)接种及接种量:在无菌环境下的接种室(箱)内按照接种浓度为4 5%接种于液体培养基里。8、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中光合细菌培养时是放置在旋转式摇床培养，培养时摇床旋转速度为100 120转/分钟。9、一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，技术方案中光合细菌培养时环境的温度、光照调控及培养周期如下:(I)培养温度:培养环境的温度控制在28 36°C。(2)光照强度:在摇床上方安置有日光灯，保持培养环境的光照强度为3000 4000勒克斯(LX)。(3)培养周期:光合细菌在温度是28 36°C、光照强度为3000 4000勒克斯(LX)的环境下培养3 4天，即繁殖成 成品。
权利要求
1.一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征包括液体培养基的优化配制，液体培养基的消毒方法，培养容器的选用，菌种的选择，无菌环境下接种及接种量，通过旋转式摇床培养，培养时环境的温度、光照调控及培养周期。
2.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是液体培养基的各种原料配比如下 (1)磷酸氢二钾120克。
(2)硫酸镁75克。
(3)硫酸铵500克。
(4)酵母浸膏500克。
(5)蛋白胨400克。
(6)硫酸亚铁:50克。
(7)氯化钠120克。
(8)氢氧化钠适量。
(9)水100公斤。
3.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是液体培养基的配制及装瓶方法如下 (1)液体培养基的配制先用10公斤70 80°C的热水将上述原料进行稀释后，再混入90公斤余水并搅拌均匀，接着用氢氧化钠将液体培养基的PH调整至7 8后即得液体培养基。
(2)装瓶将液体培养基分装至各培养容器，装入量为培养容器实际容量的2/3。
4.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是培养容器选用透明、白色的玻璃瓶。
5.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是液体培养基的消毒方法如下 (1)用含量为10%二氧化氯的稳定性二氧化氯粉剂来做消毒剂。
(2)按I升液体培养基添加O.5 I克二氧化氯粉剂对液体培养基进行消毒，消毒同时用两个一次性口罩对培养容器进行封口。
(3)液体培养基按量投放二氧化氯粉剂进行消毒后，需要静放36个小时以后才能接入菌种。
6.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是选择颜色鲜紫红，浓度为30亿/毫升的光合细菌成品做菌种。
7.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是接种的方法及接种量如下 (1)接种环境消毒把经过消毒的液体培养基及菌种移至接种室(箱)内，并对接种室(箱)进行消毒。
(2)接种及接种量在无菌环境下的接种室(箱)内按照接种浓度为4 5%接种于液体培养基里。
8.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是光合细菌培养时是放置在旋转式摇床培养，培养时摇床旋转速度为100 120转/分钟。
9.根据权利要求I中所述的一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法，其特征是光合细菌培养时环境的温度、光照调控及培养周期如下 (1)培养温度培养环境的温度控制在28 36°C。
(2)光照强度在摇床上方安置有日光灯，保持培养环境的光照强度为3000 4000勒克斯(LX)。
(3)培养周期光合细菌在温度是28 36°C、光照强度为3000 4000勒克斯(LX)的环境下培养3 4天，即繁殖成成品。
全文摘要
本发明涉及一种微生物制剂领域，具体涉及到一种高纯度光合细菌快速繁殖的方法。具体包括液体培养基是经过优化制备的，液体培养基是用二氧化氯来做消毒剂，实现了液体培养基不需要经过高温、高压灭菌亦能达到全面灭菌的目的；选择高纯度光合细菌做种源，接种时在无菌环境下进行，有效的避免了杂菌感染；光合细菌培养时是放置在旋转式摇床上摇动培养，对光合细菌培养环境的温度、光照调控进行有效的调控来达到快速繁殖出成品的目的。经过本发明培育出来的光合细菌都保持优质、高纯度。
文档编号C12N1/20GK103255073SQ20121003438
公开日2013年8月21日 申请日期2012年2月15日 优先权日2012年2月15日
发明者何寒 申请人:何寒