专利名称：一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法
技术领域：
本发明涉及一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法。
背景技术：
酯酶亦称羧基酯酶，是指可以水解羧酯键的酶，但该酶也能催化合成低级脂肪酸酯。由于该酶既能催化酯的合成，又能催化酯的分解。因此，白酒业习惯称之为酯化酶或酯分解酶。己酸乙酯是浓香型白酒的主体香味物质，也是曲酒优质品率低的主要限制因素。 己酸和乙醇在酯化酶作用下合成己酸乙酯。是己酸乙酯合成的主要途径。而酯化酶则是大曲微生物的代谢产物，酯化酶在大曲中含量多少决定了大曲的质量，酯化酶在白酒生产中能卓有成效地提高了出酒率；突出了浓香型白酒己酸乙酯的主体香；酒体协调，促进了酯化反应；较好地解决了酒质和出酒率的矛盾；产酒醇甜，赋予成品酒良好的风味。因此，对大曲中酯化酶产生菌进行研究，筛选出酯化能力强的菌株，对其生长繁殖、产酶特性以及营养需求进行研究，既可以指导大曲生产以提高大曲品质，而提高白酒的优质品率。同时也可以此为出发菌株进行育种，以获得酯化能力更强的菌株用于强化曲的生产，因此具有重要意义。
发明内容
本发明提供一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，有利于改善大曲品质、提高白酒优质品率。本发明促进酒香酵母菌产酶的培养方法，按以下步骤进行一、将酒香酵母接种到斜面培养基上，于25 30°C培养35 40h，得活化的菌种；二、挑取活化的菌种接入种子培养基中，于、150r/min摇床培养Mh，得种子液；三、将种子液按10%的接种量接入发酵培养基中，通气量为20 30mL，于、150r/min摇床培养35 37h，得培养物，即完成促进酒香酵母菌产酶的培养方法；其中步骤一中每升斜面培养基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g 酵母浸膏、15 20g琼脂和余量的蒸馏水组成，pH为6.0;步骤二中每升种子培养基由Ig 葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸馏水组成，pH为6. 0 ；步骤三中每升发酵培养基由6g橄榄油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5gMgS04. 7H20和余量的蒸馏水组成， 发酵培养基的初始PH值为6 8。本发明的优点使用本发明的方法培养酿酒酵母菌，产酶量高，酶活达到105 163U/L。本发明方法与早前已有的方法相比，使酯化酶的活力有较大的提高，从而增加经济效益、降低生产成本，具有良好的应用前景。有利于改善大曲品质、提高白酒优质品率，对中国白酒质量的提高，发展生态食品具有重要意义。同时也可以此为出发菌株进行育种，以获得酯化能力更强的菌株用于强化曲的生产，且本方法对酯化酶酶学特性的进一步研究及提高工艺控制的科学性至关重要。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一本实施方式促进酒香酵母菌产酶的培养方法，按以下步骤进行 一、将酒香酵母接种到斜面培养基上，于25 30°C培养35 40h，得活化的菌种；二、挑取活化的菌种接入种子培养基中，于、150r/min摇床培养Mh，得种子液；三、将种子液按 10%的接种量接入发酵培养基中，通气量为20 3011^，于^°C、150r/min摇床培养35 37h，得培养物，即完成促进酒香酵母菌产酶的培养方法；其中步骤一中每升斜面培养基由 Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15 20g琼脂和余量的蒸馏水组成，pH为6. 0 ；步骤二中每升种子培养基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸馏水组成，pH为6. 0 ；步骤三中每升发酵培养基由6g橄榄油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5g MgSO4. 7H20 和余量的蒸馏水组成，发酵培养基的初始PH值为6 8。步骤一中所述酒香酵母为Brettanomyces custersianus，在《富含β -葡萄糖苷酶的酒香酵母在酿酒领域中的应用》(葛有辉、王德良、曹健，酿酒科技，2011年第2期)中公开。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中于培养 36h。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是步骤三中通气量为22 ^mL。其它与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是步骤三中通气量为25mL。其它与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一至四之一不同的是步骤三中于 280C、150r/min摇床培养36h。其它与具体实施方式
一至四之一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤三中所述发酵培养基的初始pH值为7。其它与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
七本实施方式促进酒香酵母菌产酶的培养方法，按以下步骤进行一、将酒香酵母接种到斜面培养基上，于培养36h，得活化的菌种；二、挑取活化的菌种接入种子培养基中，于^°C、150r/min摇床培养Mh，得种子液；三、将种子液按 10 %的接种量接入发酵培养基中，通气量为25mL，于、150r/min摇床培养36h，得培养物，即完成促进酒香酵母菌产酶的培养方法；其中步骤一中每升斜面培养基由Ig葡萄糖、 5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15g琼脂和余量的蒸馏水组成，pH为6. 0 ；步骤二中每升种子培养基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸馏水组成，pH为6.0;步骤三中每升发酵培养基由6g橄榄油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5g K2HP04、0. 5gMgS04. 7H20和余量的蒸馏水组成，发酵培养基的初始PH值为7。将经本实施方式方法培养获得的培养物取出，经4000r/min离心20min，取上清液即为粗酶液。取IOmL环己烷、3. 65mL乙醇、6. 25mL己酸(所有试剂每500mL加入30g无水硫酸钠)和0. 2mL粗酶液，酯化反应在密闭IOOmL锥形瓶中进行，反应温度为36°C，24h后取上清液0. 5mL于50mL锥形瓶中，加入5mL水，2滴酚酞，用0. 05mol/L NaOH滴定至终点， 测定己酸的消耗量。得到酶活为163U/L。
权利要求
1.一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，其特征在于促进酒香酵母菌产酶的培养方法，按以下步骤进行一、将酒香酵母接种到斜面培养基上，于25 30°C培养35 40h，得活化的菌种；二、挑取活化的菌种接入种子培养基中，于^°C、150r/min摇床培养Mh，得种子液；三、将种子液按10%的接种量接入发酵培养基中，通气量为20 30!^，于^°C、150r/min摇床培养35 37h，得培养物，即完成促进酒香酵母菌产酶的培养方法；其中步骤一中每升斜面培养基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏、15 20g琼脂和余量的蒸馏水组成，PH为6.0 ；步骤二中每升种子培养基由Ig葡萄糖、5g蛋白胨、5g酵母浸膏和余量的蒸馏水组成，pH为6. 0 ；步骤三中每升发酵培养基由6g橄榄油、5g蛋白胨、3g酵母浸膏、0. 5gK2HP04、0. 5g MgSO4. 7H20和余量的蒸馏水组成，发酵培养基的初始pH值为6 8。
2.根据权利要求1所述的一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，其特征在于步骤一中于培养36h。
3.根据权利要求1或2所述的一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，其特征在于步骤三中通气量为22 ^mL。
4.根据权利要求1或2所述的一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，其特征在于步骤三中通气量为25mL。
5.根据权利要求4所述的一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，其特征在于步骤三中于 、150r/min 摇床培养 36h。
6.根据权利要求5所述的一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，其特征在于步骤三中所述发酵培养基的初始PH值为7。
全文摘要
一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，涉及一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法。本发明提供一种促进酒香酵母菌产酶的培养方法，有利于改善大曲品质、提高白酒优质品率。方法一、将酒香酵母接种到斜面培养基上培养，得活化的菌种；二、挑取活化的菌种接入种子培养基中，摇床培养，得种子液；三、将种子液按10％的接种量接入发酵培养基中，摇床培养，得培养物，即完成促进酒香酵母菌产酶的培养方法。使用本发明的方法培养酿酒酵母菌，产酶量高，酶活达到105～163U/L。
文档编号C12N9/18GK102559634SQ201210060878
公开日2012年7月11日 申请日期2012年3月9日 优先权日2012年3月9日
发明者卢嫚, 宋北, 广慧, 彭丽杰, 杨雪辰, 王继华 申请人:哈尔滨师范大学