一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后纯化得各斜面菌种，备用；利用各斜面菌种制备相应的原菌液；将各原菌液按2：2：2：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，得复合微生态制剂的一级种子；将一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中培养得复合微生态制剂的二级种子；最后将二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ培养以获得复合微生态制剂的成品。生猪通过服用或饮用该复合微生态制剂，能够增强生猪机体的抵抗力，起到明显的保健效果；另外，其还具保存简单、使用方便、及成本低的优点。
【专利说明】—种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及一种养殖领域用的复合微生态菌剂，尤其涉及一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂。
【【背景技术】】
[0002]1950年底美国FDA批准抗生素用作饲料添加剂以来，抗生素在畜牧生产和动物保健中，对促进生长、疫病防治、提高肉蛋奶等产量及生活水平发挥了重要作用，但由于它们的长期广泛使用及滥用，其弊病日益被人们所广泛认识，诸如破坏动物体内正常微生物群，导致微生态平衡失调；促进耐药菌株数量的增加和耐药性的增强，导致机体的外源性和内源性感染；降低了动物免疫力和机体免疫力；且在动物产品(肉、蛋、奶)中的残留严重威胁着人类健康。因此，近年来世界各国均在研究减少或不用抗生素的养殖方法(即无抗养殖)，可以说，无抗养殖已成为今后畜牧养殖业发展的一个重要方向。
【
【发明内容】
】
[0003]本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于生猪保健的复合微生态制剂，能够增强生猪机体的抵抗力，减少抗生素药物的使用。
[0004]本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的:一种用于生猪保健的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下:
[0005](I)原菌种斜面培养:将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90_培养皿中进行纯化，得嗜酸乳杆菌斜面菌种、双歧杆菌斜面菌种、枯草芽孢杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；
[0006](2)原菌种液体培 养:将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基I中，之后置于37°C下厌氧培养1-2天得嗜酸乳杆菌原菌液；将双歧杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基II中，接着于37°C下厌氧培养3天得双歧杆菌原菌液；将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基III中，接着于30°C好氧培养1-2天得枯草芽孢杆菌原菌液;将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基IV中，之后于28°C -30°C下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；
[0007](3)—级种子培养:将嗜酸乳杆菌原菌液、双歧杆菌原菌液、枯草芽孢杆菌原菌液、及酿酒酵母原菌液按2:2:2:1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基I中进行培养，具体地:先接种枯草芽孢杆菌原菌液与酿酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培养3天，然后再接种嗜酸乳杆菌原菌液与双歧杆菌原菌液，于37°C下厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；
[0008](4)二级种子培养:将所得的一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基II中，并于30°C下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，得复合微生态制剂的二级种子；
[0009](5)成品培养:将所得的二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基III中，并于30°C下先好氧3-5天再厌氧培养3-5天，获得复合微生态制剂的成品。[0010]进一步地，所述步骤(I)中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°c下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基I的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。
[0011]进一步地，所述步骤(I)中双歧杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将双歧杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°c下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基II的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ；;所述斜面培养基II的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.05克、硫酸锰0.025克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。
[0012]进一步地，所述步骤(I)中枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将枯草芽孢杆菌接种于已灭菌的斜面培养基III上，之后于30°C下好氧培养1-2天；所述斜面培养基III的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基III的组分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化钠5克、琼脂15克、水1000ml、PH7.2。
[0013]进一步地，所述步骤(I)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为:用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基IV上，之后于28-30°C下好氧培养3天；所述斜面培养基IV的灭菌温度为121°C、灭菌时间为30min ;且该斜面培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。
[0014]进一步地，所述步骤(2)中液体培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、水IOOOml ;液体培养基II的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.05克、·硫酸锰0.025克、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8 ;液体培养基III的组分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化钠5克、水1000ml、PH7.2 ;液体培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、7jC 1000ml、PH自然。
[0015]进一步地，所述步骤(3)中发酵培养基I的组分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。
[0016]进一步地，所述步骤(4)中发酵培养基II的组分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。
[0017]进一步地，所述步骤(5)中发酵培养基III的组分:糖蜜5%、氯化铵0.2%、、磷酸二氢钾0.1%、氯化钠0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。
[0018]本发明一种用于生猪保健的复合微生态制剂的有益效果在于:生猪通过服用或饮用该复合微生态制剂，能够增强机体的抵抗力，起到明显的保健效果；且该复合微生态制剂还具有无副作用、无耐药性、无残留的特点，是抗生素药物保健品的理想替代品，能够为无抗养殖提供辅助作用；另外，其还具有保存简单、使用方便、及成本低的优点。
【【具体实施方式】】[0019]本发明一种用于生猪保健的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下:
[0020](I)原菌种斜面培养:将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90_培养皿中进行纯化，得嗜酸乳杆菌斜面菌种、双歧杆菌斜面菌种、枯草芽孢杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；
[0021](2)原菌种液体培养:将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基I中，之后置于37°C下厌氧培养1-2天得嗜酸乳杆菌原菌液；将双歧杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基II中，接着于37°C下厌氧培养3天得双歧杆菌原菌液；将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基III中，接着于30°C好氧培养1-2天得枯草芽孢杆菌原菌液;将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基IV中，之后于28°C -30°C下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；
[0022](3)—级种子培养:将嗜酸乳杆菌原菌液、双歧杆菌原菌液、枯草芽孢杆菌原菌液、及酿酒酵母原菌液按2:2:2:1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基I中进行培养，具体地:先接种枯草芽孢杆菌原菌液与酿酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培养3天，然后再接种嗜酸乳杆菌原菌液与双歧杆菌原菌液，于37°C下厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；
[0023](4)二级种子培养:将所得的一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基II中，并于30°C下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，得复合微生态制剂的二级种子；
[0024](5)成品培养:将所得的二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基III中，并于30°C下先好氧3-5天再厌氧培养3-5天，获得复合微生态制剂的成品。
[0025]其中:步骤(I)中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°c下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基I的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖 5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。步骤(I)中双歧杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将双歧杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°C下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基II的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ；；所述斜面培养基II的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.05克、硫酸锰0.025克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。步骤(I)中枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将枯草芽孢杆菌接种于已灭菌的斜面培养基III上，之后于30°C下好氧培养1-2天；所述斜面培养基III的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基III的组分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化钠5克、琼脂15克、水1000ml、PH7.2。步骤(I)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为:用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基IV上，之后于28-30°C下好氧培养3天；所述斜面培养基IV的灭菌温度为121°C、灭菌时间为30min ;且该斜面培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH 自然。
[0026]步骤(2)中液体培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、水IOOOml ;液体培养基II的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.05克、硫酸锰0.025克、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8 ;液体培养基III的组分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化钠5克、水1000ml、PH7.2 ;液体培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
[0027]步骤(3)中发酵培养基I的组分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。步骤(4)中发酵培养基II的组分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠
0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%,余量为水。步骤
(5)中发酵培养基III的组分:糖蜜5%、氯化铵0.2%、、磷酸二氢钾0.1%、氯化钠0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。
[0028]需要说明的是，本发明中各培养基的百分比均为质量百分比。
[0029]本发明复合微生态菌制剂用于对生猪养殖进行保健，以提高生猪的免疫力和抗病性， 申请人:以该复合微生态制剂应用于一生猪养殖场为例进行阐述说明，具体地:
[0030]在福建龙岩某某养猪场，选取30头仔猪随机平均分为两组，一组为实验组，一组为对照组，实验组灌服所述复合微生态制剂10-20ml头/天，连服7天，对照组按常规药物防治；结果表明:实验组的仔猪死亡率为8.1%，仔猪黄痢发病率为3.7% ;而对照组的仔猪死亡率为12.1 %，仔猪黄痢发病率为10.7%;因此，所述复合微生态制剂对仔猪能够起到明显的保健效果。
[0031]综上，生猪通过服用或饮用该复合微生态制剂，能够增强机体的抵抗力，起到明显的保健效果；且该复合微生态制剂还具有无副作用、无耐药性、无残留的特点，是抗生素药物保健品的理想替代品，能够为无抗养殖提供辅助作用；另外，其还具有保存简单、使用方便、及成本低的优点。`
【权利要求】
1.一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:其制备方法的具体步骤如下:(1)原菌种斜面培养:将冷冻保藏管中的嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90_培养皿中进行纯化，得嗜酸乳杆菌斜面菌种、双歧杆菌斜面菌种、枯草芽孢杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；(2)原菌种液体培养:将嗜酸乳杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基I中，之后置于37°C下厌氧培养1-2天得嗜酸乳杆菌原菌液；将双歧杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基II中，接着于37°C下厌氧培养3天得双歧杆菌原菌液；将枯草芽孢杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基III中，接着于30°C好氧培养1-2天得枯草芽孢杆菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基IV中，之后于28°C -30°C下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；(3)—级种子培养:将嗜酸乳杆菌原菌液、双歧杆菌原菌液、枯草芽孢杆菌原菌液、及酿酒酵母原菌液按2:2:2:1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基I中进行培养，具体地:先接种枯草芽孢杆菌原菌液与酿酒酵母原菌液，并于30°C下好氧培养3天，然后再接种嗜酸乳杆菌原菌液与双歧杆菌原菌液，于37°C下厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；(4)二级种子培养:将所得的一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基II中，并于30°C下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，得复合微生态制剂的二级种子；(5)成品培养:将所得的二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基III中，并于30°C下先好氧3-5天再厌氧培养3-5天，获得复合微生态制剂的成品。
2.根据权利要求1所述.的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(I)中嗜酸乳杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将嗜酸乳杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°C下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基I的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。
3.根据权利要求1所述的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(I)中双歧杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将双歧杆菌接种于已灭菌的斜面培养基I上，之后于37°c下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基II的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ；;所述斜面培养基II的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.05克、硫酸锰0.025克、碳酸钙20克、琼脂15克、水1000ml、PH6.8。
4.根据权利要求1所述的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(I)中枯草芽孢杆菌在斜面中活化的具体操作为:用接种环将枯草芽孢杆菌接种于已灭菌的斜面培养基III上，之后于30°C下好氧培养1-2天；所述斜面培养基III的灭菌温度为121°C、灭菌时间为20min ;且该斜面培养基III的组分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化钠5克、琼脂15克、水1000ml、PH7.2。
5.根据权利要求1所述的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(I)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为:用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基IV上，之后于28-30°C下好氧培养3天；所述斜面培养基IV的灭菌温度为121°C、灭菌时间为30min ;且该斜面培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH 自然。
6.根据权利要求1所述的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(2 )中液体培养基I的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.2克、硫酸锰0.05克、碳酸钙20克、水IOOOml ;液体培养基II的组分:蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.05克、硫酸锰0.025克、碳酸钙20克、水1000ml、PH6.8 ;液体培养基III的组分:蛋白胨30克、葡萄糖I克、牛肉膏5克、氯化钠5克、水1000ml、PH7.2 ;液体培养基IV的组分:马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
7.根据权利要求1所述的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(3)中发酵培养基I的组分:糖蜜5%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。
8.根据权利要求1所述的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(4)中发酵培养基II的组分:糖蜜5%、酵母粉0.1%、蛋白胨0.1%、氯化铵0.1%、氯化钠0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。
9.根据权利要求1所述的一种用于生猪养殖保健的复合微生态制剂，其特征在于:所述步骤(5)中发酵培养基III的组分:糖蜜5%、氯化铵0.2%、、磷酸二氢钾0.1%、氯化钠`0.05%、硫酸镁0.05%、硫酸锌0.`025%、硫酸亚铁0.025%，余量为水。
【文档编号】C12R1/23GK103436473SQ201310374524
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月23日 优先权日:2013年8月23日
【发明者】陈琳, 莫艳华, 秦火保, 周世须 申请人:福州大用生物应用科技有限公司