一种用醋酸提取激肽释放酶的方法
【专利摘要】本发明公开了一种用醋酸提取激肽释放酶的方法。本发明的技术方案是以猪胰为原料提取、沉淀猪胰制成丙酮粉后，灵活运用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脱脂脱水等传统蛋白纯化技术，制备激肽释放酶。本发明操作简单，生产周期短，成本低廉，非常适用于规模化大生产。
【专利说明】一种用醋酸提取激肽释放酶的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体地说是以猪胰为原料提取、沉淀猪胰制成丙酮粉后，灵活运用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脱脂脱水等传统蛋白纯化技术，制备激肽释放酶。
【背景技术】
[0002]激肽释放酶(kallikein)是从猪胰脏中分离纯化制得的天然酶类药物，临床上又称血管舒缓素，具有舒展毛细血管和小动脉的作用，在临床上常用来治疗高血脂，防治脂肪肝、动脉粥样硬化、高血压、心绞痛等多种疾病，它的开发具有重要的医学和社会价值。在我国，激肽释放酶生产还存在很大的发展空间。
[0003]传统的纯化激肽释放酶的工艺由于工艺复杂、成本较高；离子交换层析是目前是适合激肽释放酶工业化生产的最普遍方法；而选择离子交换树脂的主要依据是被分离物的性质和分离目的，包括被分离物和主要杂质的解离特性、分子量、浓度、稳定性、所处介质的性质以及分离的具体条件和要求。其中最重要的一条是根据分离要求和分离环境保证分离目的物与主要杂质对树脂的吸附力有足够的差异。被分离物中杂质越多，这种差异性显然会越不明显。在实际大生产中，原料中都含有杂质，如果在采用这些高端色谱技术之前，不对原料或者粗制品进行预处理，势必会因为原料中的杂质含量过多而减短离子交换介质的寿命，降低树脂吸附效率，且洗脱中会存在拖尾现象，延长生产周期，影响产品收率及比活。
[0004]激肽释放酶是以的猪胰脏为原料，因此，必须对原料进行预处理、提纯得到粗制的激肽释放酶，然后再采用离子交换层析技术进行精制生产。
[0005]本发明是灵活运用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脱脂、脱水等传统蛋白纯化技术，从猪胰脏中制备激肽释放酶，该技术不仅操作简单、生产成本低廉，而且避免了激肽释放酶降解失活，提高产品比活。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是用醋酸溶液从合格的猪胰脏中提取激肽释放酶。
[0007]本发明的技术方案是:以猪胰为原料提取、沉淀猪胰制成丙酮粉后，灵活运用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脱脂脱水等传统蛋白纯化技术，制备激肽释放酶。本发明具有生产周期短，操作简单、成本低廉的特点，非常适用于规模化大生产。包括如下步骤:
[0008]1、醋酸提取:将猪胰脏制成丙酮粉后，加入18~22倍量0.01~0.03mol / L醋酸溶液，于10°C搅拌提取10~14小时，离心，得上清液；将残渣加8~12倍量0.01~
0.03mol / L醋酸溶液再次进行搅拌提取4~8小时，离心，合并两次上清液；
[0009]2、丙酮沉淀:收集上清液，加入2~10°C丙酮使溶液的浓度达到33%，搅匀，过滤，得滤液；将滤液中补加2~10°C丙酮至溶液的浓度达到70%，搅匀，静置3~6小时，离心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脱脂、脱水，干燥，得激肽释放酶；
【具体实施方式】[0010]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0011]实施例1
[0012]所述的以猪胰为原料提取、沉淀猪胰制成丙酮粉后，灵活运用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脱脂脱水等传统蛋白纯化技术，制备激肽释放酶，包括如下步骤:
[0013]1、醋酸提取:将猪胰脏IOKg制成丙酮粉后，加入20倍量0.02mol / L醋酸溶液，于10°C搅拌提取12小时，离心，得上清液；将残渣加10倍量0.02mol / L醋酸溶液再次进行搅拌提取6小时 ，离心，合并两次上清液29.8L。
[0014]2、丙酮沉淀:收集上清液，加入5°C丙酮使溶液的浓度达到33%，搅匀，过滤，得滤液；将滤液中补加5°C丙酮至溶液的浓度达到70%，搅匀，静置4小时，离心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脱脂、脱水，干燥，得激肽释放酶97g。
[0015]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【权利要求】
1.一种用醋酸提取激肽释放酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤: (1)醋酸提取:将猪胰脏制成丙酮粉后，加醋酸溶液搅拌提取，离心，得上清液；将残渣加醋酸溶液再次进行搅拌提取，离心，合并两次上清液； (2)丙酮沉淀:收集上清液，加入丙酮搅匀，过滤，得滤液；将滤液中补加丙酮，静置，离心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脱脂、脱水，干燥，得激肽释放酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤(1)中，丙酮粉与醋酸溶液的比例为IKg:18~22L，醋酸溶液的浓度为:0.01~0.03mol / L ;加入醋酸溶液的提取时间为:10~14小时。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤(2)中，所用丙酮的温度为2~10°C;第一次加入丙酮的量为至溶液 浓度达到33% ;补加丙酮的量为至溶液浓度达到70%。
【文档编号】C12N9/64GK103740686SQ201310638710
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年11月29日 优先权日:2013年11月29日
【发明者】刘乃山, 林晓磊, 李静洁, 刘君 申请人:青岛康原药业有限公司